楊素冰，張相良廣州醫(yī)科大學(xué)附屬腫瘤醫(yī)院檢驗(yàn)科，腹部綜合科，廣東 廣州 50095

臨床研究

高精度腹腔灌注化療患者血清中miR-409-3p表達(dá)水平與胃癌預(yù)后的關(guān)系

楊素冰1，張相良2
廣州醫(yī)科大學(xué)附屬腫瘤醫(yī)院1檢驗(yàn)科，2腹部綜合科，廣東 廣州 510095

目的 探討高精度腹腔灌注化療（HIPEC）治療后血清miR-409-3P表達(dá)水平與胃癌預(yù)后的關(guān)系。方法 采用實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)檢測(cè)高精度腹腔灌注化療后血清miR-409-3p表達(dá)水平，并分析其胃癌預(yù)后的關(guān)系。結(jié)果 高精度腹腔灌注化療后血清miR-409-3p低表達(dá)量組中位生存期低于高表達(dá)量組中位生存期，差異認(rèn)為有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)論 血清miR-409-3p可能成為評(píng)估預(yù)后的生物標(biāo)志物。

miR-409-3p；胃癌；預(yù)后

胃癌是我國常見的惡性腫瘤之一［1］，腹膜轉(zhuǎn)移是胃癌最常見的轉(zhuǎn)移方式［2］，高精度腹腔灌注化療（HIPEC）在胃癌［3］、結(jié)直腸癌［4］治療中提高患者的近期生存率。但病人仍會(huì)發(fā)生腫瘤復(fù)發(fā)，甚至遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移，最重要的原因是因?yàn)槲赴┘?xì)胞對(duì)化療藥物產(chǎn)生了多藥耐藥［5］。新近研究表明微小RNA（miRNA）在腫瘤發(fā)生中發(fā)揮癌基因或抑癌基因的重要作用，是調(diào)節(jié)多藥耐藥性的關(guān)鍵上游分子之一［6］。在前期研究中通過篩選HIPEC治療前后血清miRNA表達(dá)譜發(fā)現(xiàn)有169個(gè)miRNA表達(dá)較化療前上調(diào)，其中miR-409-3P上調(diào)最為明顯。本次研究為了探討HIPEC治療后miR-409-3P表達(dá)水平與胃癌預(yù)后的關(guān)系。

1　資料與方法

1.1一般資料

收集我院2010年12月～2014年12月收治的胃癌患者行HIPEC治療98例，其中男性52例，女性46例，男女比例1.13。年齡44～71歲，中位年齡55歲。對(duì)每位患者化療后采用未添加抗凝劑的干燥管分別進(jìn)行外周靜脈血采血5 mL，于室溫下保存，凝血后進(jìn)行血清分離。

通過電話隨訪、門診隨訪、查閱病歷等方式獲得隨訪數(shù)據(jù)，最終隨訪時(shí)間為2015年12月，隨訪12～60個(gè)月，中位隨訪時(shí)間為28個(gè)月。其中4例失訪，隨訪率為95.9%。

1.2RNA提取及miR-409-3p的實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)

應(yīng)用RNA提取試劑盒提取血清中的RNA。通過PrimeScriptRT試劑盒（Takara）合成首條cDNA鏈，miR-409-3p定量采用實(shí)時(shí)熒光定量RT-PCR法，以U6 miRNA作為內(nèi)參。擴(kuò)增的特異性采用溶解曲線和PCR產(chǎn)物的瓊脂糖電泳進(jìn)行分析。miR-409-3p在血清中的表達(dá)水平采用相對(duì)于內(nèi)參U6的2-△Ct公式進(jìn)行計(jì)算，△Ct=△CtmiR-409-3p-△CtRNU6。

1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

HIPEC后miR-409-3p表達(dá)水平以平均值為界分為兩組，小于平均值為低表達(dá)組，大于平均值為高表達(dá)組。miR-409-3p表達(dá)水平高低與病理因素的關(guān)系比較采用χ2檢驗(yàn)。高、低表達(dá)組與臨床病理因素的風(fēng)險(xiǎn)比和95%CI采用Logistic二項(xiàng)回歸分析，Kaplan-Meier最小乘積法評(píng)價(jià)總生存率，miR-409-3p高表達(dá)組與低表達(dá)組生存率的差異采用Log-rank檢驗(yàn)。P＜0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2　結(jié)果

2.1miR-409-3p表達(dá)與臨床病理特征的關(guān)系

98例胃癌患者接受HIPEC治療后血清中miR-409-3p相對(duì)表達(dá)量均值為6.76，標(biāo)準(zhǔn)差為0.15。根據(jù)血清中miR-409-3p表達(dá)水平以平均值為界分為兩組，小于平均值為低表達(dá)組，大于平均值為高表達(dá)組。

血清miR-409-3p表達(dá)與臨床病理特征關(guān)系，血清miR-409-3p表達(dá)量與性別、年齡、腫瘤直徑、分化程度、有無遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移、手術(shù)性質(zhì)以及TNM分期均無關(guān)（P＞0.05）。但在淋巴有無轉(zhuǎn)移的表達(dá)量分布不一致，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05，表1）。

表1　血清miR-409-3p表達(dá)與臨床病理特征關(guān)系

2.2單因素Logistic回歸分析血清miR-409-3p表達(dá)與臨床病理特征關(guān)系

單因素Logistic回歸分析血清miR-409-3p低表達(dá)量和高表達(dá)量與臨床病理特征關(guān)系如表2所示，淋巴轉(zhuǎn)移可能影響HIPEC治療后血清中miR-409-3p表達(dá)。

表2　單因素Logistic回歸分析血清miR-409-3p表達(dá)與臨床病理特征關(guān)系

2.3血清miR-409-3p低表達(dá)與高表達(dá)組胃癌患者Kaplan-Meier生存期

HIPEC治療后血清miR-409-3p低表達(dá)量組中位生存期為 26個(gè)月，95%CI：24.020～27.980；血清miR-409-3p高表達(dá)量組中位生存期為30個(gè)月，95%CI= 25.972～34.028，兩組比較log-rank值為8.673，P=0.003。

3　討論

miRNA是一類長度在19～23 nt的內(nèi)源性非編碼單鏈小RNA，因其片段較小，且耐RNA酶降解，因此能在血清樣本中穩(wěn)定存在［7］，是一類理想的腫瘤分子標(biāo)志，這為檢測(cè)血清中miRNA應(yīng)用于評(píng)估腫瘤的預(yù)后提供了可能。miRNA的靶向作用于大約30%的人類基因，越來越多的證據(jù)表明miRNA的在基因表達(dá)中的重要性［8］。多藥耐藥性常造成胃癌化療失敗，影響患者的預(yù)后。熱療能夠有效逆轉(zhuǎn)惡性腫瘤多藥耐藥性［9］，但具體機(jī)制并未清楚。同時(shí)研究［10］發(fā)現(xiàn)某些miRNA在胃癌多藥耐藥性中發(fā)揮作用，并有報(bào)道［11-14］顯示miR-409-3p與腫瘤的增殖、侵襲以及細(xì)胞凋亡有關(guān)，提示miR-409-3p可能與胃癌多藥耐藥性有關(guān)。

體外研究中表明胃癌細(xì)胞 SGC-7901中miR-409-3p的表達(dá)顯著抑制細(xì)胞的增殖以及誘導(dǎo)細(xì)胞的凋亡［15］。Ma等［13］發(fā)現(xiàn)乳腺癌組織中miR-409-3p的表達(dá)水平相比于癌旁組織明顯下調(diào)，并與乳腺癌的不良預(yù)后顯著相關(guān)，可能的作用機(jī)制是miR-409-3p的表達(dá)降低了ZEB1蛋白質(zhì)的水平。ZEB1蛋白質(zhì)與腫瘤細(xì)胞的侵襲力、分化程度有密切關(guān)系［8］。研究發(fā)現(xiàn)與比鄰非腫瘤組相比，骨肉瘤細(xì)胞中miR-409-3p表達(dá)呈下降，表達(dá)水平與骨肉瘤的遷移相關(guān)［16］。在肺癌組織中亦發(fā)現(xiàn)相同的表達(dá)下調(diào)［11］，相比miR-409-3p高表達(dá)，低miR-409-3p表達(dá)患者腫瘤分化程度低，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的發(fā)生率較高，可能的機(jī)制是通過靶向c-Met抑制Akt的信號(hào)通路減少肺癌細(xì)胞遷移和侵襲。

本次研究結(jié)果表明患者有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，HPEC治療后血清中miR-409-3p更傾向于低表達(dá)。有研究證實(shí)血清中miRNA可作為胃癌診斷的生物標(biāo)志物［17］。本研究結(jié)果表明miR-409-3p在HIPEC治療后高表達(dá)有更長的中位生存時(shí)間，且與低表達(dá)組相比有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。那么HIPEC治療后血清中miR-409-3p有可能成為評(píng)估胃癌預(yù)后的生物標(biāo)志物。

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Relationship between expression levelsofserum miR-409-3p afterhyperthemic Intraperitoneal chemotherapy and the prognosis of gastric cancer

YANG Subing1，ZHANG Xiangliang2
1Department of laboratory medcine，2Abdominal general department Cancer Center of Guangzhou Medical University，Guangzhou 510095，China

Objective To investigate the relationship between expression levels of serum miR-409-3P after Hyperthemic Intraperitoneal Chemotherapy（HIPEC）and prognosis of gastric cancer.Methods The serum expression levels of miR-409-3p after HIPEC was examined using real-time reverse transcription polymerase chain reaction and analyze the relationship between levels and prognosis of gastric cancer.Results The high expression group tended to have longer median survival time，compared with the low expression group，P=0.003.Conclusion The expression levels of serum miR-409-3P after HIPEC may become biomarkers of evaluate prognostic of gastric cancer.

miR-409-3p；gastric cancer；prognostic

2016-05-06

廣東省醫(yī)學(xué)科學(xué)技術(shù)研究基金（B2014196）

楊素冰，主管技師，E-mail:yangsubing8@163.com