常正姣,韓　萍,劉利娥,許艷麗,蔣永紅,王文寧

(鄭州大學(xué) 公共衛(wèi)生學(xué)院,河南鄭州 450001)

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雜糧蛹蟲草菌絲共生體中蟲草素的優(yōu)化提取及測(cè)定

常正姣,韓萍*,劉利娥,許艷麗,蔣永紅,王文寧

(鄭州大學(xué) 公共衛(wèi)生學(xué)院,河南鄭州 450001)

目的:探討雜糧蛹蟲草菌絲共生體中蟲草素的最優(yōu)提取條件,并比較了不同光照時(shí)長(zhǎng)對(duì)蟲草素含量的影響,為其工藝條件的優(yōu)化和綜合利用提供依據(jù)。方法:采用單因素結(jié)合響應(yīng)曲面法優(yōu)化蟲草素的水浴提取條件,高效液相色譜法測(cè)定蟲草素含量。結(jié)果:最優(yōu)水浴提取條件為:浸提時(shí)間6.59 h、浸提溫度81.9℃、料液比1∶90,此條件下蟲草素含量為6.0143mg/g;不同光照時(shí)長(zhǎng)條件下蟲草素含量為3.8988～11.9629mg/g,不同光照時(shí)長(zhǎng)間差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p=0.000)。結(jié)論:實(shí)驗(yàn)確定了蟲草素水浴提取的最優(yōu)條件,并得出不同光照時(shí)長(zhǎng)對(duì)蟲草素含量有顯著影響,為進(jìn)一步優(yōu)化雜糧蛹蟲草菌絲共生體的培養(yǎng)條件提供參考依據(jù)。

雜糧蛹蟲草菌絲共生體,蟲草素,響應(yīng)面法,高效液相色譜法,光照時(shí)長(zhǎng)

蟲草素是蛹蟲草重要生物活性成分之一,具有調(diào)節(jié)血糖[1]、抑菌[2]、抗腫瘤[3-4]、調(diào)節(jié)免疫力[5]等作用。目前,蟲草素主要由蛹蟲草培養(yǎng)物分離提取獲得,一般通過菌種選育和培養(yǎng)條件優(yōu)化來(lái)提高蟲草素含量。蛹蟲草的人工培養(yǎng)受多種條件的影響,如培養(yǎng)基組成、溫度、光照、pH等的影響,其中光照時(shí)長(zhǎng)是影響蛹蟲草生長(zhǎng)發(fā)育的一個(gè)重要因素。已有研究表明,適宜的光照時(shí)長(zhǎng)可提高蛹蟲草菌絲體對(duì)基質(zhì)的利用率和促進(jìn)菌絲體的轉(zhuǎn)色及生長(zhǎng),并可促進(jìn)腺苷和蟲草素的合成[6-8]。

以麥仁、糙米、大豆、奶粉為固體雜糧培養(yǎng)基培養(yǎng)蛹蟲草真菌,得到被蛹蟲草真菌生態(tài)轉(zhuǎn)化的雜糧培養(yǎng)基和菌絲體共存的結(jié)構(gòu)整體,即為雜糧蛹蟲草菌絲共生體。本實(shí)驗(yàn)以不同光照時(shí)長(zhǎng)下雜糧蛹蟲草菌絲共生體為研究對(duì)象,采用單因素結(jié)合響應(yīng)曲面法優(yōu)化蟲草素水浴提取條件,并用高效液相色譜法測(cè)定共生體中蟲草素含量,比較不同光照時(shí)長(zhǎng)對(duì)雜糧蛹蟲草菌絲共生體中蟲草素含量的影響,為雜糧蛹蟲草菌絲共生體的培養(yǎng)條件優(yōu)化和其綜合利用提供依據(jù)。

1　材料與方法

1.1材料與儀器

雜糧蛹蟲草菌絲共生體樣品10份:各樣品是蛹蟲草CM-3菌種以雜糧為固體培養(yǎng)基經(jīng)轉(zhuǎn)色后分別培養(yǎng)1、3、5、7、9、11、19、27、35、43 d條件下得到的雜糧蛹蟲草菌絲共生體。樣品烘干后,使用高速萬(wàn)能粉碎機(jī)粉碎,過80目篩備用。

蟲草素標(biāo)準(zhǔn)品(HPLC≥98%)上海源葉生物科技有限公司;甲醇(色譜純)天津四友精細(xì)化學(xué)品有限公司;乙腈(色譜純)天津四友精細(xì)化學(xué)品有限公司;異丙醇(分析純)天津市富宇精細(xì)化工有限公司。

Waters e2695高效液相色譜儀配Waters 2489紫外檢測(cè)器及Empower 3數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)Waters公司;HH-42型數(shù)顯恒溫?cái)嚢杷涑Ｖ輫?guó)華電器有限公司;TD24-WS型臺(tái)式低速離心機(jī)湖南湘儀實(shí)驗(yàn)儀器開發(fā)有限公司;AL204電子天平上海梅特勒-托利多儀器有限公司;MILLI-Q超純水系統(tǒng)美國(guó)Millipore公司。

1.2實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1液相色譜條件色譜柱:C18柱,ZORBAX SB-Aq(4.6 mm×150 mm,5 μm);流動(dòng)相:V(甲醇)∶V(水)=15∶85;流速:1.0 mL/min,波長(zhǎng):259 nm;進(jìn)樣量:10 μL;柱溫:30℃;

1.2.2標(biāo)準(zhǔn)曲線準(zhǔn)確稱取蟲草素標(biāo)準(zhǔn)品1 mg(精確至0.0001 g),用水溶解后定容至10 mL,搖勻,配置成蟲草素標(biāo)準(zhǔn)品母液(100 μg/mL)。分別準(zhǔn)確吸取0.1、0.2、0.5、1.0、2、5 mL母液于10 mL容量瓶中,加水定容搖勻,配制成濃度分別為1.00、2.00、5.00、10.00、20.00、50.00 μg/mL的標(biāo)準(zhǔn)溶液。根據(jù)色譜條件進(jìn)行測(cè)定,以蟲草素濃度為橫坐標(biāo),相應(yīng)的峰面積為縱坐標(biāo),計(jì)算得出標(biāo)準(zhǔn)曲線和線性回歸方程。

1.2.3雜糧蛹蟲草菌絲共生體樣品處理準(zhǔn)確稱取樣品0.1 g(精確至0.0001 g)于10 mL離心管中,加入一定料液比的超純水,至于一定溫度下的恒溫水浴箱中提取一定時(shí)間。取出離心(4000 r/min,10 min)后,將上清液定容至10 mL,取1.5 mL過0.45 μm微孔濾膜,供上機(jī)分析。

1.3響應(yīng)面優(yōu)化水浴提取蟲草素的實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)

1.3.1單因素實(shí)驗(yàn)本實(shí)驗(yàn)主要考察水浴提取方法中的浸提時(shí)間、浸提溫度和料液比對(duì)雜糧蛹蟲草菌絲共生體中蟲草素含量的影響。

浸提時(shí)間:固定浸提溫度為60℃,料液比為1∶15,浸提時(shí)間選擇2、4、6、8、10 h五個(gè)水平,按照1.2.3進(jìn)行實(shí)驗(yàn),記錄各水平的峰面積。

浸提溫度:固定浸提時(shí)間為6 h,料液比為1∶50,浸提溫度分別選擇50、60、70、80、90℃五個(gè)水平,按照1.2.3進(jìn)行實(shí)驗(yàn),記錄各水平的峰面積。

料液比:固定浸提溫度為60℃,浸提時(shí)間為6 h,料液比選擇1∶10、1∶30、1∶50、1∶70、1∶90五個(gè)水平,按照1.2.3進(jìn)行實(shí)驗(yàn),記錄各水平的峰面積。

1.3.2響應(yīng)曲面法實(shí)驗(yàn)使用Design-Expert8.0軟件,根據(jù)單因素實(shí)驗(yàn)結(jié)果結(jié)合Box-Behnken實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)得出不同的蟲草素提取條件,按照1.2.3所述方法進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。將實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析后,得出蟲草素對(duì)于浸提時(shí)間、浸提溫度和料液比的回歸模型及最優(yōu)提取條件,并進(jìn)行驗(yàn)證。Box-Behnken實(shí)驗(yàn)因素水平和編碼見表1所列。

表1　Box-Behnken實(shí)驗(yàn)各變量的編碼水平

1.4方法學(xué)考察

精密度實(shí)驗(yàn):選取任一樣品,在選定色譜條件下連續(xù)進(jìn)樣測(cè)定6次,測(cè)其峰面積計(jì)算RSD。

加標(biāo)回收率實(shí)驗(yàn):選取6個(gè)樣品,按樣品處理方法進(jìn)行處理,再加入蟲草素標(biāo)準(zhǔn)品50 μg,后上機(jī)測(cè)定,計(jì)算加標(biāo)回收率。

日內(nèi)穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn):選取任一樣品分別于0、2、4、8、12、24 h時(shí)進(jìn)樣分析,測(cè)其峰面積計(jì)算RSD。

日間穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn):選取任一樣品分別于1、2、3、4、6、8 d時(shí)進(jìn)樣分析,測(cè)其峰面積計(jì)算RSD。

1.5統(tǒng)計(jì)分析

運(yùn)用Microsoft Excel、SPSS 17.0軟件和Design Expert 8.0軟件對(duì)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析,檢驗(yàn)水準(zhǔn)α=0.05。

圖1　蟲草素含量標(biāo)準(zhǔn)曲線Fig.1　Standard curve of cordycepin注:從低到高依次為濃度是1、2、5、10、20、 50、100 μg/mL的蟲草素標(biāo)準(zhǔn)品的色譜圖。

2　結(jié)果與分析

2.1蟲草素標(biāo)準(zhǔn)曲線和線性范圍考察

蟲草素標(biāo)準(zhǔn)曲線如圖1,得到回歸方程:y=16799.5169x-4683.3499,其中x為蟲草素濃度(μg/mL),y為峰面積(106),R2=0.9996,結(jié)果表明,蟲草素標(biāo)準(zhǔn)溶液在0～100 μg/mL范圍內(nèi),濃度與峰面積線性關(guān)系良好。蟲草素標(biāo)準(zhǔn)品高效液相色譜圖見圖2。

圖2　蟲草素標(biāo)準(zhǔn)品HPLC重疊色譜圖Fig.2　HPLC overlapping chromatogram of cordycepin standard

2.2單因素實(shí)驗(yàn)結(jié)果

2.2.1浸提時(shí)間對(duì)蟲草素含量的影響結(jié)果如圖3所示,在其他條件一定時(shí),浸提時(shí)間4～6 h對(duì)蟲草素含量影響很大,呈明顯增加趨勢(shì);當(dāng)達(dá)到6 h時(shí),含量達(dá)到最大值;再隨著浸提時(shí)間的延長(zhǎng),6～8 h期間蟲草素含量又顯著減少,后趨于平穩(wěn)。分析原因可能是在一定時(shí)間范圍內(nèi),隨著浸提時(shí)間的延長(zhǎng)有利于蟲草素的溶出,但過長(zhǎng)又會(huì)引起其降解,使得含量下降,因此選擇浸提時(shí)間6 h。

圖3　浸提時(shí)間對(duì)蟲草素含量的影響Fig.3　Effect of extraction time on the content of cordycepin

2.2.2浸提溫度對(duì)蟲草素含量的影響結(jié)果如圖4所示,在其他條件一定時(shí),隨著浸提溫度的增大,蟲草素含量呈現(xiàn)上升趨勢(shì)后趨于平穩(wěn),在80℃時(shí)有一個(gè)小高峰。溫度過低時(shí),蟲草素溶解不充分,而高溫可使傳質(zhì)速度提高以此來(lái)增加蟲草素的溶解度,因此選擇浸提溫度80℃。

圖4　浸提溫度對(duì)蟲草素含量的影響Fig.4　Effect of extraction temperature on the content of cordycepin

2.2.3料液比對(duì)蟲草素含量的影響結(jié)果如圖5所示,在其他條件一定時(shí),料液比1∶10～1∶30對(duì)蟲草素含量影響很大,蟲草素含量顯著增加;隨著料液比由1∶30增加到1∶70,蟲草素含量略有增加,但變化不明顯,在1∶70時(shí)達(dá)到最大值;后隨著料液比的增加,又略有下降。料液比過小,容易使得蟲草素的提取不完全,造成浪費(fèi),所以選擇料液比1∶70。

圖5　料液比對(duì)蟲草素含量的影響Fig.5　Effect of solid-liquid ratio on the content of cordycepin

2.3Box-Behnken實(shí)驗(yàn)優(yōu)化蟲草素提取結(jié)果

根據(jù)單因素實(shí)驗(yàn)結(jié)果,使用Design-Expert8.0軟件,以蟲草素含量為響應(yīng)值,自變量包括浸提時(shí)間、浸提溫度和料液比,進(jìn)行3因素3水平Box-Behnken實(shí)驗(yàn)。對(duì)各個(gè)變量的水平進(jìn)行編碼,結(jié)果見表1,響應(yīng)面實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)及結(jié)果見表2。

表2　Box-Behnken實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)及響應(yīng)值

利用Design-Expert8.0軟件對(duì)以上數(shù)據(jù)進(jìn)行擬合回歸分析,得出蟲草素對(duì)編碼后的自變量浸提時(shí)間、浸提溫度和料液比的二次多項(xiàng)回歸方程:

蟲草素含量=6.05+0.11A-5.408×10-3B+0.093C+7.898×10-4AB-0.014AC+0.028BC-0.16A2-0.061B2-0.020C2

表3　回歸模型方差分析

回歸模型中各因素的系數(shù)能直觀的顯示各因素對(duì)蟲草素得率的影響程度,其F值的大小與該因素對(duì)響應(yīng)值的影響呈正相關(guān)。由表3可知,浸提時(shí)間和料液比對(duì)蟲草素含量具有高度顯著影響,而浸提溫度對(duì)其影響不顯著(p>0.05)。三個(gè)因素間兩兩交互作用的響應(yīng)曲面和等高線圖如圖6所示:浸提時(shí)間與浸提溫度對(duì)蟲草素含量影響的交互作用相對(duì)較弱,等高線圖趨于圓形;浸提時(shí)間與料液比對(duì)蟲草素含量影響的交互作用相對(duì)較強(qiáng),其中浸提時(shí)間變化比料液比變化對(duì)蟲草素含量的影響大,其等高線更密集;浸提溫度與料液比對(duì)蟲草素含量影響的交互作用在三組兩兩交互作用中是最強(qiáng)的。

2.4最優(yōu)提取條件驗(yàn)證

根據(jù)響應(yīng)曲面法得出的最優(yōu)提取條件為:浸提時(shí)間6.59 h、浸提溫度81.9℃、料液比1∶90,在此條件下預(yù)測(cè)蟲草素含量為6.1445mg/g。按照最優(yōu)條件提取同一樣品中的蟲草素,平行測(cè)定3次,得到平均蟲草素含量為6.0143mg/g,與預(yù)測(cè)值相差2.12%,證明優(yōu)化的提取條件有較高的可信度。

2.5方法學(xué)考察

2.5.1精密度實(shí)驗(yàn)選取任一樣品,在選定色譜條件下連續(xù)進(jìn)樣測(cè)定6次,測(cè)其峰面積計(jì)算RSD,結(jié)果見表4。

表4　精密度實(shí)驗(yàn)

由表4可知,連續(xù)進(jìn)樣6次,蟲草素的RSD值為0.82%,小于2%,且色譜峰保留時(shí)間波動(dòng)在0.01～0.06 min,說明該實(shí)驗(yàn)方法精密度良好。

2.5.2加標(biāo)回收率實(shí)驗(yàn)選取6個(gè)樣品,按樣品處理方法進(jìn)行處理,再加入蟲草素標(biāo)準(zhǔn)品50 μg,后上機(jī)測(cè)定,計(jì)算加標(biāo)回收率。

由表5可知,蟲草素的加標(biāo)回收率在101.96%～104.76%之間,RSD值為1.16%,說明該實(shí)驗(yàn)方法加標(biāo)回收效果較好,可用于蟲草素含量的測(cè)定。

表5　加標(biāo)回收率實(shí)驗(yàn)

2.5.3日內(nèi)穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)選取任一樣品分別于0、2、4、8、12、24 h時(shí)進(jìn)樣分析,測(cè)其峰面積計(jì)算RSD。

2.5.4日間穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)選取任一樣品分別于1、2、3、4、6、8 d時(shí)進(jìn)樣分析,測(cè)其峰面積計(jì)算RSD。

穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)結(jié)果如表6和表7所示,在不同的時(shí)間進(jìn)樣同一樣品,蟲草素含量保持相對(duì)穩(wěn)定,其RSD值分別為1.04%和1.79%,穩(wěn)定性良好。

表6　日內(nèi)穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)

表7　日間穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)

2.6不同光照時(shí)長(zhǎng)對(duì)雜糧蛹蟲草菌絲共生體中蟲草素含量的影響

根據(jù)不同光照培養(yǎng)時(shí)間將蛹蟲草菌絲共生體的生長(zhǎng)過程劃分為4個(gè)生長(zhǎng)期:轉(zhuǎn)色期(1～5 d)、原基形成期(5～9 d)、現(xiàn)蕾期(9～27 d)、子實(shí)體旺長(zhǎng)期(35～43 d)。本實(shí)驗(yàn)以響應(yīng)面優(yōu)化后的最優(yōu)提取條件為基礎(chǔ),對(duì)樣品測(cè)得的蟲草素含量見表8。

由表8可知,在實(shí)驗(yàn)范圍內(nèi),不同光照時(shí)長(zhǎng)之間,雜糧蛹蟲草菌絲共生體中蟲草素的含量差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p=0.000)。且在雜糧蛹蟲草菌絲共生體生長(zhǎng)的4個(gè)階段,其不同階段間的蟲草素含量差異也具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=88.880,p=0.000)。隨著光照培養(yǎng)時(shí)間的延長(zhǎng),蟲草素的含量總體上呈現(xiàn)先上升后下降的趨勢(shì),在19 d時(shí)含量達(dá)到最大11.9626mg/g,隨后又逐漸下降并趨于穩(wěn)定。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,雜糧蛹蟲草菌絲共生體中蟲草素的合成和積累主要在原基形成和現(xiàn)蕾期,這一結(jié)果與韋會(huì)平[9]報(bào)道的現(xiàn)蕾期是收獲蟲草素的最佳時(shí)期結(jié)果相同。在現(xiàn)蕾期之后,雜糧蛹蟲草菌絲共生體中的蟲草素含量有所下降,可能是因?yàn)樽訉?shí)體的旺盛生長(zhǎng)使得共生體中蟲草素不斷轉(zhuǎn)移到子實(shí)體中。

表8　光照時(shí)長(zhǎng)對(duì)雜糧蛹蟲草菌絲共生體中蟲草素含量的影響

注:方差分析方法為SNK法;不同的英文字母表示組間在p<0.05水平上差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

3　結(jié)論與討論

本研究通過測(cè)定不同光照時(shí)長(zhǎng)條件下雜糧蛹蟲草菌絲共生體中蟲草素的含量,為共生體的培養(yǎng)條件優(yōu)化和其綜合利用提供了依據(jù)。首先對(duì)雜糧蛹蟲草菌絲共生體中蟲草素的水浴提取進(jìn)行了響應(yīng)面優(yōu)化,得到最優(yōu)提取條件是:浸提時(shí)間6.59 h、浸提溫度81.9℃、料液比1∶90,與李琴[10]等研究結(jié)果較為接近。在此條件下測(cè)得樣品中的蟲草素含量為3.8988～11.9629mg/g,并經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析發(fā)現(xiàn),不同光照時(shí)長(zhǎng)對(duì)蟲草素含量的影響差異顯著。

本文采用的雜糧蛹蟲草菌絲共生體樣品為本實(shí)驗(yàn)室人工培養(yǎng),蟲草素含量的差異與環(huán)境條件和培養(yǎng)條件的差異有關(guān)。翁梁[11]等研究不同配方培養(yǎng)基中蟲草素含量在蠶蛹與玉米糝質(zhì)量比7∶3條件下最高,為4.75mg/g,并且得到在培養(yǎng)基中適量添加黃豆、玉米糝、蛋白胨更有利于蟲草素、多糖、蟲草酸含量提高的結(jié)論。顧冬艷[12]等優(yōu)化北蟲草固態(tài)發(fā)酵培養(yǎng)基得出大豆粉與麥麩質(zhì)量比4∶1、料液比39∶30及營(yíng)養(yǎng)液中添加葡萄糖、牛肉膏、硫酸錳,此條件下蟲草素含量達(dá)到5499.12 μg/g。溫魯[13]等研究提高固體培養(yǎng)蛹蟲草核苷類代謝物的產(chǎn)物,從蛹蟲草菌株、培養(yǎng)基碳源、氮源水平、加水量、培養(yǎng)時(shí)間和光照等方面進(jìn)行研究,在以20%豆粉為氮源、按1∶1加營(yíng)養(yǎng)液、接種CM-2菌株、遮光培養(yǎng)35 d的條件下培養(yǎng)物的蟲草素含量可達(dá)5.49mg/g,高于蛹蟲草全草2.83mg/g。樂昕[14]等研究不同蛹蟲草固體栽培基質(zhì)(大米、小米、高粱米、玉米、小麥)對(duì)蟲草素含量的影響發(fā)現(xiàn),高粱米作為培養(yǎng)基質(zhì)獲得的蟲草素含量較高,達(dá)到248.2 mg/100 g,而用小米培養(yǎng)得到的含量最低?；谝陨衔墨I(xiàn)比較發(fā)現(xiàn)可知,通過不同固體栽培基質(zhì)培養(yǎng)蛹蟲草得到子實(shí)體中的蟲草素含量在5mg/g左右,而本實(shí)驗(yàn)所采用的雜糧蛹蟲草菌絲共生體中蟲草素的含量明顯較高,特別是在合適的光照時(shí)長(zhǎng)條件下蟲草素含量能達(dá)到11.96mg/g。陸艷艷[15]等測(cè)定了人工蟲草子實(shí)體、菌絲體和固體培養(yǎng)殘基中蟲草素的含量分別為1356.92、1101.04、350.96 μg/g,其中菌絲體和培養(yǎng)殘基中的蟲草素含量之和高于子實(shí)體,這也間接的說明了本實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)的雜糧蛹蟲草菌絲共生體是很有價(jià)值的。

目前,蟲草的人工栽培以收獲子實(shí)體為主,而大量的培養(yǎng)殘基被直接丟掉,造成浪費(fèi)和環(huán)境污染。而本實(shí)驗(yàn)室以雜糧為固體培養(yǎng)基,接種蛹蟲草后,把菌絲體和雜糧培養(yǎng)基作為一個(gè)整體開發(fā)利用,以期作為具有一定功效成分的膳食替代。光照時(shí)長(zhǎng)是影響蟲草生長(zhǎng)的一個(gè)重要因素,本研究初步探討了光照時(shí)長(zhǎng)對(duì)蟲草素含量的影響,為優(yōu)化培養(yǎng)條件提供了一定依據(jù)。本實(shí)驗(yàn)室還將在本文的研究基礎(chǔ)上,將其他功效成分納入?yún)⒖?作為下一步工藝條件優(yōu)化的參考指標(biāo)。

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Optimizing extraction and determination of cordycepin in multigrain cordyceps militaris hyphae symbionts

CHANG Zheng-jiao,HAN Ping*,LIU Li-e,XU Yan-li,JIANG Yong-hong,WANG Wen-ning

(College of Public Health,Zhengzhou University,Zhengzhou 450001,China)

Object:To explore the optimal extraction conditions of cordycepin in multigrain cordyceps militaris hyphae symbionts,the effect of varied lighting duration on cordycepin was compared,the purpose was to provide a basis for the optimization of its technological conditions and comprehensive utilization.Methods:The conditions of waterbath extraction of cordycepin were determined by single factor experiments combined with response surface methodology,the content of cordycepin was determined by high performance liquid chromatography,SPSS 17.0 software was applied for statistical analysis.Results:The results showed that the optimal extraction conditions were:extraction time 6.59 h,extraction temperature 81.9℃,solid-liquid ratio 1∶90.The contents of cordycepin were 6.0143mg/g under this condition.The contents of cordycepin were 3.8988～11.9629mg/g in different lighting duration and were significantly different(p=0.000).Conclusions:The optimal conditions of waterbath extraction of cordycepin were determined and the contents of cordycepin were significantly different under varied lighting duration,which can provide the reference basis for further optimization of culture conditions of multigrain cordyceps militaris hyphae symbionts.

multigrain cordyceps militaris hyphae symbionts;cordycepin;response surface methodology(RSM);high performance liquid chromatography(HPLC);lighting duration

2015-08-07

常正姣(1988-)，女，在讀碩士研究生，研究方向：營(yíng)養(yǎng)與疾病，E-mail：bluesysbb@live.cn。

韓萍(1960-)，男，博士，教授，研究方向：營(yíng)養(yǎng)與疾病，E-mail：hp999@zzu.edu.cn。

TS201.4

A

1002-0306(2016)07-0237-06

10.13386/j.issn1002-0306.2016.07.037