劉　俊　崔　龍

?

腎癌患者血清VHL、HIF-1α和HIF-2α的表達(dá)及臨床意義

劉俊崔龍

目的探討血清VHL，HIF-1α和HIF-2α的表達(dá)水平與腎癌臨床病理特征的關(guān)系。方法收集腎癌患者43例(腎癌組)和同期健康查體者40例(對(duì)照組)；檢測(cè)兩組血清VHL，HIF-1α和HIF-2α水平；測(cè)定患者癌灶最大直徑；對(duì)所有患者進(jìn)行6個(gè)月隨訪。結(jié)果與對(duì)照組比較，腎癌患者血清VHL水平明顯降低，而HIF-1α和HIF-2α水平明顯升高(P<0.01)；腎癌患者血清VHL、HIF-1α和HIF-2α表達(dá)與患者年齡、性別無(wú)明顯相關(guān)(P>0.05)，而與病理分級(jí)、臨床分期、癌灶大小以及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移顯著相關(guān)(P<0.01)；所有腎癌患者隨訪6個(gè)月，6例復(fù)發(fā)，37例未復(fù)發(fā)，復(fù)發(fā)組患者術(shù)后血清VHL水平明顯低于未復(fù)發(fā)組，而HIF-1α和HIF-2α水平明顯高于未復(fù)發(fā)組，比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05，P<0.01)。結(jié)論 血清VHL，HIF-1α和HIF-2α水平與腎癌病理分級(jí)、臨床分期、癌灶大小以及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移顯著相關(guān)，提示上述指標(biāo)可成為判定腎癌發(fā)生、發(fā)展以及復(fù)發(fā)的重要指標(biāo)。

腎癌；VHL基因；缺氧誘導(dǎo)因子-1α；缺氧誘導(dǎo)因子-2α

(ThePracticalJournalofCancer,2016,31:895～898)

腎癌為泌尿系統(tǒng)常見(jiàn)腫瘤，約占所有成人惡性腫瘤的近3%，隨著生活習(xí)慣和環(huán)境的改變以及影像等檢測(cè)技術(shù)的提高，腎癌的發(fā)病率呈逐年升高趨勢(shì)[1]。然而，值得注意的是近30%的腎癌患者在確診時(shí)即存在遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移，術(shù)后患者中復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移的比率達(dá)40%，而傳統(tǒng)的放化療對(duì)轉(zhuǎn)移性腎癌治療不敏感，預(yù)后較差，5年的生存率不到10%[2]；因此，腎癌的早期診斷是提高患者生存率的關(guān)鍵因素[3]。

VHL基因是在遺傳病性疾病Von Hippel Lindau患者中發(fā)現(xiàn)，位于3號(hào)染色體短臂；研究發(fā)現(xiàn)，VHL基因產(chǎn)物VHL蛋白以及缺氧誘導(dǎo)因子(HIF)與腎透明細(xì)胞癌的發(fā)生密切相關(guān)[4]。本研究采用酶免疫吸附法檢測(cè)腎癌患者血清中VHL，HIF-1α和HIF-2α水平，分析三者與腎癌臨床病理特征的關(guān)系，以期為腎癌的早診斷及復(fù)發(fā)提供更多客觀的臨床參考指標(biāo)。

1　材料與方法

1.1一般資料

收集本院2011年5月-2012年12月收治的46例腎癌患者，研究期間失聯(lián)3例，最后完成43例；其中男性32例，女性11例；年齡25～69歲，平均(51.67±5.39)歲；TMN分期：Ⅰ/Ⅱ期34例，Ⅲ/Ⅳ期9例。同期選擇在我院進(jìn)行健康查體者40例作為對(duì)照組，男性30例，女性10例；年齡35～70歲，平均(50.43±5.17)歲；所有對(duì)照組經(jīng)血液生化、心電圖和頭、腹部影像學(xué)等檢查均為正常，排除既往有腫瘤、自身免疫性疾病、心腦血管病以及肝腎功能障礙等病史。兩組年齡、性別一般情況比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。診斷標(biāo)準(zhǔn)：所有腎癌患者均經(jīng)CT和病理檢查確認(rèn)。腎癌的臨床分期、病理分級(jí)等參照國(guó)際抗癌聯(lián)盟(UICC)制定標(biāo)準(zhǔn)(2002年)進(jìn)行[5]。所有患者病理診斷均為腎透明細(xì)胞癌，均行腎癌根治術(shù)治療。病例入選標(biāo)準(zhǔn)：①符合腎癌診斷標(biāo)準(zhǔn)者；②檢測(cè)前均未接受任何放化療、細(xì)胞因子治療等；③患者或患者家屬簽署知情協(xié)議。病例排除標(biāo)準(zhǔn)：①伴有糖尿病、高血壓以及既往風(fēng)濕、類(lèi)風(fēng)濕病者；②合并其他系統(tǒng)腫瘤者；③研究期間不配合者；④合并其他系統(tǒng)疾病影響VHL、HIF-1α和HIF-2α升高或降低者。

1.2檢測(cè)指標(biāo)

①血清VHL、HIF-1α和HIF-2α檢測(cè) 兩組均在清晨空腹采集靜脈血，腎癌組分別取術(shù)前、術(shù)后患者的靜脈血，血樣靜置1 h后離心，取血清，分裝-70 ℃保存；均采用Elisa方法進(jìn)行，試劑盒均由上海遠(yuǎn)慕生物科技有限公司提供；所有樣本均在同一批次檢測(cè)。②測(cè)定患者癌灶最大直徑；③對(duì)所有患者進(jìn)行6個(gè)月隨訪，記錄復(fù)發(fā)病例。

1.3分析指標(biāo)

分析血清VHL、HIF-1α和HIF-2α的表達(dá)與患者年齡、性別、病理分級(jí)、臨床分期、癌灶大小和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移等臨床病理特點(diǎn)的關(guān)系。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

2　結(jié)果

2.1兩組血清VHL、HIF-1α和HIF-2α表達(dá)比較

與對(duì)照組比較，腎癌患者血清VHL水平明顯降低，而HIF-1α和HIF-2α水平明顯升高，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)，見(jiàn)表1。

表1　兩組血清VHL、HIF-1α和HIF-2α水平比較

2.2血清VHL、HIF-1α和HIF-2α水平與腎癌臨床病理特征的關(guān)系

血清VHL、HIF-1α和HIF-2α表達(dá)與腎癌患者年齡、性別無(wú)明顯相關(guān)性(P>0.05)，而與病理分級(jí)、臨床分期、癌灶大小以及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移顯著相關(guān)(P<0.01)，見(jiàn)表2。

2.3未復(fù)發(fā)組和復(fù)發(fā)組患者術(shù)后血清VHL、HIF-1α和HIF-2α水平比較

所有腎癌患者隨訪6個(gè)月，6例復(fù)發(fā)，37例未復(fù)發(fā)；復(fù)發(fā)組患者術(shù)后血清VHL水平明顯低于未復(fù)發(fā)組，而HIF-1α和HIF-2α水平明顯高于未復(fù)發(fā)組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05，P<0.01)，見(jiàn)表3。

3　討論

腎癌的臨床診斷主要依據(jù)患者的癥狀、體征結(jié)合影響學(xué)和病理學(xué)檢測(cè)，然而這些指標(biāo)的影響因素較多，加之影像學(xué)對(duì)腫瘤病灶顯影技術(shù)存在一定的滯后等限制，部分患者的病情并不能及時(shí)得到確認(rèn)而貽誤病情[6]。近年來(lái)，使用血清生物學(xué)標(biāo)記物來(lái)進(jìn)行早期診斷是臨床檢驗(yàn)的重要方向。目前，使用不同高通量平臺(tái)對(duì)腎癌的生物標(biāo)記物進(jìn)行研究，然而仍沒(méi)有足夠且唯一的生物標(biāo)記物可以用來(lái)對(duì)腎癌進(jìn)行預(yù)測(cè)[7]。因此，探尋其他較為特異性的血清生物學(xué)標(biāo)志物仍是時(shí)下臨床研究的重點(diǎn)。

一般認(rèn)為，癌細(xì)胞的增殖和腫瘤組織的生長(zhǎng)、浸潤(rùn)以及轉(zhuǎn)移有賴(lài)于腫瘤的血管形成。血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(VEGF)作為糖蛋白二聚體的1種，能夠增加毛細(xì)血管壁的通透性，也是當(dāng)前最強(qiáng)的血管通透劑之一。VEGF還可特異性地刺激使得血管內(nèi)皮細(xì)胞發(fā)生有絲分裂，誘導(dǎo)腫瘤血管的形成，從而有利于腫瘤細(xì)胞脫落、浸潤(rùn)周?chē)M織血管[8-9]。研究發(fā)現(xiàn)，VHL基因失活引起氣編碼的蛋白失去正常功能，可間接激活VEGF、環(huán)氧合酶-以及血小板源性生長(zhǎng)因子，從而促進(jìn)腎癌組織的浸潤(rùn)及癌細(xì)胞遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移[10]。本組結(jié)果顯示，VHL在腎癌患者血清表達(dá)水平顯著低于對(duì)照組健康者，與臨床分期、病理分級(jí)、癌灶大小以及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移均顯著相關(guān)，與以往報(bào)道基本一致，表明血清VHL的低表達(dá)可能與腎癌的發(fā)生發(fā)展相關(guān)，其介導(dǎo)的系列反應(yīng)可能促進(jìn)腎癌細(xì)胞的增殖、浸潤(rùn)和遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移。

表2　血清VHL，HIF-1α和HIF-2α水平與腎癌臨床病理特征的關(guān)系

表3　未復(fù)發(fā)組和復(fù)發(fā)組患者術(shù)后血清VHL、HIF-1α和HIF-2α水平比較

缺氧或VHL基因失活均可阻礙HIF降解，從而HIF在細(xì)胞內(nèi)積聚，通過(guò)HIF-1αDNA 上的識(shí)別位點(diǎn)結(jié)合下游靶基因VEGF等DNA 序列上的相應(yīng)位點(diǎn)，啟動(dòng)靶基因VEGF等的轉(zhuǎn)錄，而VEGF作用于血管內(nèi)皮細(xì)胞表面受體，激活系列缺血傳導(dǎo)通路，刺激新生血管的形成，誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞的增殖及其遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移[11]。此外，在低氧下HIF-lα可誘導(dǎo)斯鈣素蛋白-1(STC-1)表達(dá)，后者在腎小管上皮細(xì)胞高表達(dá)，可通過(guò)調(diào)節(jié)細(xì)胞內(nèi)Ca2+平衡參與腎癌細(xì)胞的增殖、浸潤(rùn)及其轉(zhuǎn)移[12]。本組結(jié)果顯示，腎癌患者血清中HIF-1α水平明顯高于對(duì)照組健康者，且其與臨床分期、病理分級(jí)、癌灶大小以及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移均明顯相關(guān)，與以往研究結(jié)果近似，表明血清HIF-1α的高表達(dá)可能與腎癌的發(fā)生發(fā)展相關(guān)，其介導(dǎo)的靶位反應(yīng)在促進(jìn)腎癌細(xì)胞的增殖、浸潤(rùn)和遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移中發(fā)揮重要作用。

HIF-2作為腫瘤耐受低氧環(huán)境的重要標(biāo)志物，由HIF-2α和HIF-1β兩個(gè)亞單位構(gòu)成；近年證實(shí)，腫瘤組織中HIF-2α失活可打斷腫瘤血管的形成，HIF-2α水平與VEGF的表達(dá)呈正相關(guān)[13]。以往研究表明，HIF-2α的高表達(dá)與腫瘤的臨床分期、低分化和不良預(yù)后密切相關(guān)[14]。本研究中，腎癌患者血清HIF-2α水平明顯高于對(duì)照組健康者，且其與臨床分期、病理分級(jí)、癌灶大小以及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移均明顯相關(guān)，與上述研究報(bào)道結(jié)果相近，提示HIF-2α基因也可能參與了腎癌的發(fā)生、發(fā)展機(jī)制。

綜上，腎癌患者血清VHL水平明顯低于對(duì)照組，而HIF-1α和HIF-2α水平明顯高于對(duì)照組，血清VHL，HIF-1α和HIF-2α水平與腎癌患者病理分級(jí)、臨床分期、癌灶大小以及淋巴轉(zhuǎn)移顯著相關(guān)，對(duì)腎癌的復(fù)發(fā)具有預(yù)測(cè)作用；因此，血清VHL，HIF-1α和HIF-2α水平可能是腎癌的早期診斷、病情評(píng)估及復(fù)發(fā)判斷的重要指標(biāo)。然而，血清VHL，HIF-1α和HIF-2α檢測(cè)并不是腎癌特有的標(biāo)志物，將上述指標(biāo)應(yīng)用于腎癌的早期診斷尚需與其他臨床檢驗(yàn)結(jié)合進(jìn)行。

[1]李恩惠，夏術(shù)階.晚期腎癌靶向治療的現(xiàn)狀與進(jìn)展〔J〕.現(xiàn)代腫瘤醫(yī)學(xué)，2012，20(7)：1514-1518.

[2]Jiang Z，Chu PG，Woda BA，et al.Combination of quantitative IMP3 and tumor stage：a new system to predict metastasis for patients with localized renal cell carcinomas〔J〕.Clin Cancer Res，2008，4(17)：5579-5584.

[3]奉松青，劉春曉，鄭少波，等.腎癌患者外周血中CD33+HLA-DR-髓源抑制性細(xì)胞的表達(dá)及其臨床意義〔J〕.南方醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)，2013，33(4)：550-553.

[4]Shuin T，Kondo K，Torigoe S，et al.Frequent somatic mutations and loss of heterozygosity of the von Hippel-Lindau tumor suppressor gene in primary human renal cell carcinomas〔J〕.Cancer Res，1994，54(11)：2852-2855.

[5]International Union Against Cancer.TMN classification of malignant tumours〔M〕.6th ed.NewYork(NY)：Wiley，2002：102.

[6]Chen S，Zou Z，Chen F，et al.A meta-analysis of fast track surgery for patients with gastric cancer undergoing gastrectomy〔J〕.Ann R Coll Surg Engl，2015，97(1)：3-10.

[7]Poste G.Bring on the biomarkers〔J〕.Nature，2011，469(7329)：156-157.

[8]Varney ML，Singh RK.VEGF-C-VEGFR3/Flt4 axis regulates mammary tumor growth and metastasis in an autocrine manner〔J〕.Am J Cancer Res，2015，5(2)：616-628.

[9]García-Román J，Zentella-Dehesa A.Vascular permeability changes involved in tumor metastasis〔J〕.Cancer Lett，2013，335(2)：259-269.

[10]Kaelin WG Jr.Treatment of kidney cancer：insights provided by the VHL tumor-suppressor protein〔J〕.Cancer，2009，115(10Suppl)：2262-2272.

[11]Shen C，Kaelin WG Jr.The VHL/HIF axis in clear cell renal carcinoma〔J〕.Semin Cancer Biol，2013，23(1)：18-25.

[12]Liu G，Yang G，Chang B，et al.Stanniocalcin 1 and ovarian tumorigenesis〔J〕.J Natl Cancer Inst，2010(11)：812-827.

[13]Pietras A，Johnsson AS，P?hlman S.The HIF-2α-driven ps-

eudo-hypoxic phenotype in tumor aggressiveness，differentiation，and vascularization〔J〕.Curr Top Microbiol Immunol，2010，345：1-20.

[14]Patel SA，Simon MC.Biology of hypoxia-inducible factor-2alpha in development and disease 〔J〕.Cell Death Differ，2008，15(4)：628-634.

(編輯：吳小紅)

Expression of Serum VHL，HIF-1α and HIF-2α in Renal Carcinoma and Clinical Significance

LIUJun，CUILong.

XiantaoFirstPeople'sHospital，Xiantao,433000

ObjectiveTo investigate relationship between expression of serum VHL，HIF-1α and HIF-2α and the clinicopathological features in renal carcinoma.Methods43 patients with renal cell carcinoma were the renal carcinoma group and 40 healthy examinees were the control group.Levels of serum VHL，HIF-1α and HIF-2α in the 2 groups were detected.The maximum diameters of carcinoma foci were detected.Studies are needed with follow up of 6 months to record relapse cases.Relationship between expression of serum VHL，HIF-1α and HIF-2α and the clinicopathological feature in renal carcinoma were analyzed.ResultsLevel of serum VHL in the renal carcinoma group was obviously lower than the control group，while levels of HIF-1α and HIF-2α were obviously higher(P<0.01).Expression of serum VHL，HIF-1α and HIF-2α was not related to age and sex in renal carcinoma(P>0.05)，while was significantly correlated with pathological grade，clinical stages，size of carcinoma and lymphatic metastasis(P<0.01).All patients of renal carcinoma were followed up by 6 months with 6 recurrent cases and 37 non-recurrent cases.Level of serum VHL in recurrent cases was obviously lower，while levels of HIF-1α and HIF-2α were obviously higher than non-recurrent cases，there had significant differences(P<0.05，P<0.01).ConclusionLevels of serum VHL，HIF-1α and HIF-2α are correlated significantly with pathological grade，clinical stages，size of carcinoma and lymphatic metastasis，which indicates indexes mentioned above could be important indicators of judging occurrence，development and recurrence of renal carcinoma.

Renal carcinoma；VHL；HIF-1α；HIF-2α

433000 湖北省仙桃市第一人民醫(yī)院(劉俊)；441021 湖北省襄陽(yáng)市中心醫(yī)院(崔龍)

崔龍

10.3969/j.issn.1001-5930.2016.06.008

R737.11

A

1001-5930(2016)06-0895-04

2015-07-21

2016-04-25)