沙吉坦穆·克依斯?fàn)?古麗皮艷·托乎提,努麗艷·阿不都米力克,迪麗努爾·依力哈木,努爾古麗·熱合曼

(新疆師范大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院,新疆烏魯木齊 830054)

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傳統(tǒng)發(fā)酵酸駝乳優(yōu)勢菌種糞腸球菌高密度培養(yǎng)技術(shù)的研究

沙吉坦穆·克依斯?fàn)?古麗皮艷·托乎提,努麗艷·阿不都米力克,迪麗努爾·依力哈木,努爾古麗·熱合曼*

(新疆師范大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院,新疆烏魯木齊 830054)

以從傳統(tǒng)發(fā)酵酸駝乳中優(yōu)勢菌種糞腸球菌作為濃縮型酸駝乳發(fā)酵劑的原料菌,制備糞腸球菌液芯微膠囊,以液芯微膠囊作為微反應(yīng)器,將乳清粉作為基礎(chǔ)培養(yǎng)基,補(bǔ)充適當(dāng)碳氮源、促生長因子、pH緩沖劑通過單因素實(shí)驗(yàn)和響應(yīng)曲面實(shí)驗(yàn)優(yōu)化高密度發(fā)酵培養(yǎng)的培養(yǎng)基配方。微囊化糞腸球菌的最佳培養(yǎng)基配方:乳清粉60 g/L,蔗糖18.22 g/L,蛋白胨35.94 g/L,胡蘿卜汁152.82 mL/L,CaCO39.21 g/L,MgSO40.28 g/L,MnSO40.18 g/L。按照此配方進(jìn)行增殖培養(yǎng)時(shí),糞腸球菌的菌體濃度可達(dá)到2.1×1014cfu/g。為濃縮型酸駝乳發(fā)酵劑提供依據(jù)。

液芯微膠囊,糞腸球菌,高密度培養(yǎng),響應(yīng)曲面法

酸駝乳,哈薩克語Shubat是利用新鮮駱駝奶經(jīng)過使用自然發(fā)酵劑和傳統(tǒng)發(fā)酵技術(shù)發(fā)酵而成的一種乳酸菌飲料[1-2]。酸駝乳是一種營養(yǎng)豐富、醫(yī)療和藥物價(jià)值高、具有抗菌活力的飲品[3-4]。

新疆傳統(tǒng)的發(fā)酵飲料酸駝乳,由于沒有專用的發(fā)酵劑,生產(chǎn)過程基本上停留在自然發(fā)酵水平,不僅發(fā)酵周期長而且產(chǎn)品質(zhì)量不穩(wěn)定,安全和衛(wèi)生難以得到保證[5-6]。濃縮發(fā)酵劑具有活力高、體積小、攜帶使用方便的特點(diǎn),可直接用于發(fā)酵制品生產(chǎn),省去擴(kuò)大培養(yǎng)的復(fù)雜操作過程,從而簡化產(chǎn)品生產(chǎn)工藝,有利于保持產(chǎn)品質(zhì)量的穩(wěn)定,防止菌種的退化和污染[7-8]。乳酸菌濃縮發(fā)酵劑制備的關(guān)鍵是要實(shí)現(xiàn)對其進(jìn)行高活性、高密度的培養(yǎng)[9]。

本研究首先采用細(xì)胞固定化技術(shù)對從酸駝乳中分離純化的糞腸球菌進(jìn)行液芯微囊化處理;然后考察液芯微膠囊作為微反應(yīng)器,通過單因素實(shí)驗(yàn),響應(yīng)曲面實(shí)驗(yàn)對微囊化乳酸菌進(jìn)行培養(yǎng)基的優(yōu)化,達(dá)到囊內(nèi)菌株的濃縮培養(yǎng)的目的,以更進(jìn)一步發(fā)展?jié)饪s型酸駝乳發(fā)酵劑提供依據(jù)為目標(biāo)。

1　材料與方法

1.1材料與儀器

糞腸球菌-從傳統(tǒng)發(fā)酵酸駝乳中分離純化的優(yōu)勢菌種。

MRS培養(yǎng)基(g/L)[10]:蛋白胨10 g,牛肉膏10 g,酵母膏5 g,葡萄糖20 g,K2HPO42 g,醋酸鈉5 g,檸檬酸二氨2 g,MgSO40.28 g,MnSO40.18 g,吐溫-80 1 mL,pH調(diào)節(jié)為7.0左右,121 ℃滅菌15 min,需要時(shí)加入20 g瓊脂。配制液體和固體MRS培養(yǎng)基,分別使用于活化菌種及其活菌計(jì)數(shù)。細(xì)胞增殖基礎(chǔ)培養(yǎng)基(g/L):乳清粉60 g,葡萄糖20 g,酵母粉20 g,MgSO40.28 g,MnSO40.18 g,CaCO35 g。

海藻酸鈉,殼聚糖,黃原膠食品級(jí) 日本新田公司;氯化鈣分析純;玉米漿北京索萊寶科技有限公司。

SW-CJ-1FD型超凈工作臺(tái)蘇凈集團(tuán);LRH-250電熱恒溫培養(yǎng)箱，JB-1B型磁力攪拌器上海一恒科技有限公司;LDZX-30KBS型高壓蒸汽滅菌鍋上海申安醫(yī)療器械廠;2-16P型高速低溫離心機(jī)SIGMA公司。

1.2實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1制備微囊化的糞腸球菌根據(jù)相關(guān)文獻(xiàn)[10],將甘油保藏的菌株以2%的接種量接種于MRS液體培養(yǎng)基中,在37 ℃培養(yǎng),傳代兩次。為了升高在微囊化過程中菌株的存活率,確定最佳收獲期。菌種活化培養(yǎng)后,按一定量接種于液體培養(yǎng)基中,在37 ℃恒溫條件下培養(yǎng)24 h,每隔2 h,以未接菌的培養(yǎng)基作對照,測定在600 nm處的OD值,以培養(yǎng)時(shí)間為橫坐標(biāo),OD600值為縱坐標(biāo),作出糞腸球菌在MRS培養(yǎng)基中的生長曲線。

保藏菌株接種于MRS液體培養(yǎng)基中,在37 ℃下兩次更新培養(yǎng)到穩(wěn)定期。把培養(yǎng)液倒入滅過菌的離心杯中,離心10 min,轉(zhuǎn)速為5000 r/min,放入少量生理鹽水,制備菌懸液。

液芯微膠囊的制備:將1.5%(w/v)CaCl2溶液與0.3%(w/v)黃原膠溶液的混合液倒入已制備好的糞腸球菌懸浮液中,混合均勻,把混合液到入滅過菌的10 mL注射針筒中,慢慢推動(dòng)注射器,使CaCl2,黃原膠及菌懸浮的混合液通過針尖,漸漸滴入不停磁力攪拌的0.8%(w/v)海藻酸鈉溶液中攪拌發(fā)生凝膠反應(yīng),形成具有一定大小的液芯微膠囊顆粒,繼續(xù)攪拌10 min。

外表面硬化處理:過濾液芯微膠囊,用生理鹽水沖洗,然后把它放到2%(w/v)CaCl2溶液中,對它進(jìn)行硬化處理1 h。

殼聚糖包覆處理:過濾液芯微膠囊,用生理鹽水沖洗,把它放在0.3%(w/v)殼聚糖溶液中,在搖床上輕輕搖動(dòng)30 min,然后用生理鹽水沖洗,最后收集微膠囊。

1.2.2胡蘿卜汁的制備首先洗干凈500 g新鮮胡蘿卜,切碎,然后加入500 mL水煮沸20～30 min,離心收集上清[11]。

1.2.3囊內(nèi)細(xì)胞計(jì)數(shù)在無菌條件下稱取1 g糞腸球菌微膠囊,把它置入99 mL滅過菌的檸檬酸鈉溶液中(1%(w/v),pH6.0)溶解,微膠囊全部溶解后,使用滅過菌的生理鹽水逐步地稀釋,吸取0.5 mL稀釋液倒入滅過菌的平板中,然后倒入冷卻至45～50 ℃的MRS固體培養(yǎng)基,混合均勻。在37 ℃恒溫培養(yǎng)48 h后,對它進(jìn)行菌落計(jì)數(shù)。

1.2.4單因素實(shí)驗(yàn) 按照相關(guān)文獻(xiàn)[12-13],將不同的碳源,氮源,促生長因子及不同濃度的pH緩沖劑 CaCO3分別添加到基礎(chǔ)培養(yǎng)基中,按1%的接種量接種1.2.1中制備的微囊化糞腸球菌,調(diào)節(jié)起始pH,在一定溫度下培養(yǎng)一定的時(shí)間,進(jìn)行囊內(nèi)細(xì)胞計(jì)數(shù)。

1.3響應(yīng)曲面法優(yōu)化增殖培養(yǎng)基

按照單因素實(shí)驗(yàn)結(jié)果,確定微囊化糞腸球菌增殖的生長強(qiáng)化因子(蔗糖,蛋白胨,胡蘿卜汁以及 CaCO3),使用旋轉(zhuǎn)中心組合設(shè)計(jì)(Central Composite Rotatable Design,CCRD)法,以四種生長強(qiáng)化因子作為研究對象,以菌體濃度為響應(yīng)值,設(shè)計(jì)旋轉(zhuǎn)中心組合實(shí)驗(yàn),各自變量及其實(shí)驗(yàn)水平編碼見表1。

表1　旋轉(zhuǎn)中心組合設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)因素水平及其編碼Table 1　Level and code of variables chosen for CCRD experiments

依據(jù)旋轉(zhuǎn)中心組合實(shí)驗(yàn)結(jié)果,建立二次多項(xiàng)回歸模型方程并對它進(jìn)行方差分析,對模型的系數(shù)進(jìn)行顯著性檢驗(yàn),分析各因素的線性效應(yīng)和交互效應(yīng),最后在一定水平范圍內(nèi)求取最佳值,最后優(yōu)化得到適合糞腸球菌菌體增殖的最佳培養(yǎng)基配方。

2　結(jié)果與分析

2.1糞腸球菌的生長特性

由圖1生長曲線可知,糞腸球菌進(jìn)入對數(shù)期后,在8 h的OD值最高,之后進(jìn)入穩(wěn)定期。穩(wěn)定期初期收獲菌株能提高菌株在微囊化過程中的存活率,因此,選擇培養(yǎng)8 h收獲。

圖1　糞腸球菌的生長曲線Fig.1　Grown curve of Enterococcus faecalis

2.2碳源對微囊化糞腸球菌增殖培養(yǎng)的影響

本實(shí)驗(yàn)研究了蔗糖,葡萄糖,乳糖,麥芽糖對微囊化糞腸球菌增殖的影響。實(shí)驗(yàn)結(jié)果如圖2所示。由圖2可知,當(dāng)蔗糖為碳源時(shí),菌體濃度比使用其他碳源要高。因此,選蔗糖為微囊化糞腸球菌增殖培養(yǎng)基的最佳碳源。

圖2　不同碳源對糞腸球菌生長的影響Fig.2　Effect of carbon source on culture of Enterococcus faecalis

2.3蔗糖濃度對微囊化類腸球菌增殖培養(yǎng)的影響

培養(yǎng)中微生物的生長直接受到蔗糖濃度的影響:如果蔗糖的濃度過低,就不能滿足菌體得生長需求,如果蔗糖的濃度太高,反而因?yàn)槭節(jié)B透壓過高導(dǎo)致微生物的生長被受到抑制,至極還會(huì)導(dǎo)致菌體的死亡[12]。因此,有必要對蔗糖濃度進(jìn)行進(jìn)一步的確認(rèn)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果如圖3所示。由圖3可知,蔗糖濃度20 g/L的實(shí)驗(yàn)組菌體濃度最高,因此培養(yǎng)基中蔗糖的濃度選20 g/L。

圖3　蔗糖濃度對糞腸球菌生長的影響Fig.3　Effect of Sucrose concentration on culture of Enterococcus faecalis

2.4氮源對微囊化糞腸球菌增殖的影響

本實(shí)驗(yàn)對蛋白胨,牛肉膏,酵母粉及胰蛋白胨對增殖培養(yǎng)的影響進(jìn)行了研究。實(shí)驗(yàn)結(jié)果如圖4所示。從圖4可知,蛋白胨為氮源時(shí),菌體濃度比采用其他氮源的實(shí)驗(yàn)組要高得多,因此,選蛋白胨為微囊化糞腸球菌增殖培養(yǎng)的最佳氮源。

圖4　不同氮源對糞腸球菌生長的影響Fig.4　Effect of nitrogen source on culture of Enterococcus faecalis

2.5蛋白胨濃度對增殖培養(yǎng)的影響

確定培養(yǎng)基中最佳氮源物質(zhì)以后,進(jìn)一步研究蛋白胨濃度對菌體增殖的影響。實(shí)驗(yàn)結(jié)果如圖5所示。由圖5可知,蛋白胨濃度35 g/L時(shí)菌體濃度最大,增殖培養(yǎng)基中蛋白胨的濃度確定35 g/L。

圖5　蛋白胨濃度對糞腸球菌的影響Fig.5　Effect of Peptone concentration of Enterococcus faecalis

2.6促生長因子微囊化糞腸球菌增殖的影響

添加胡蘿卜汁,番茄汁,玉米漿這些營養(yǎng)物質(zhì)可以促進(jìn)乳酸菌的生長繁殖[13-14]。向培養(yǎng)基中分別添加不同濃度(50,100,150 g/L)的玉米漿,胡蘿卜汁和番茄汁,在37 ℃條件下培養(yǎng)20 h后,分別測量菌體密度,確定最佳的促生長因子。實(shí)驗(yàn)結(jié)果如圖6所示。

圖6　不同促生長因子對糞腸球菌生長的影響Fig.6　Effect of various factors on growth on culture of Enterococcus faecalis

由圖6可知,三種物質(zhì)都不同程度地提高了菌體的濃度,在相同的條件下,培養(yǎng)20 h后添加胡蘿卜汁的實(shí)驗(yàn)組菌體濃度最高,由此選擇胡蘿卜汁為最佳促生長因子。由圖6可知,不能確定胡蘿卜汁的最高濃度,因此,進(jìn)一步研究了胡蘿卜汁濃度的確定實(shí)驗(yàn)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果如圖7所示。由圖7可知,胡蘿卜汁濃度150 g/L 時(shí)菌體的密度最大。

圖7　胡蘿卜汁濃度對糞腸球菌生長的影響Fig.7　Effect of carrot juice concentration culture of Enterococcus faecalis

2.7CaCO3濃度對增殖培養(yǎng)的影響

培養(yǎng)過程中乳酸的逐漸聚集,使pH下降,因此乳酸菌的繁殖受到抑制。因此,液芯微膠囊增殖培養(yǎng)基中添加適量的CaCO3,可以增強(qiáng)微膠囊的機(jī)械強(qiáng)度,緩沖環(huán)境pH的作用。實(shí)驗(yàn)結(jié)果如圖8所示。由圖8可知,當(dāng)加入的CaCO3的濃度為10 g/L時(shí),菌體的濃度最高,繼續(xù)增高CaCO3的濃度,菌體濃度反而下降,因此,增殖培養(yǎng)基中CaCO3的濃度選為10 g/L。

圖8　CaCO3濃度對糞腸球菌的影響Fig.8　Effect of CaCO3 concentration on culture of Enterococcus faecalis

2.8向應(yīng)曲面法優(yōu)化糞腸球菌增殖培養(yǎng)基

2.8.1建立多元二次模型方程和回歸分析為了多元二次模型方程各項(xiàng)系數(shù)的最優(yōu)擬合,按照旋轉(zhuǎn)中心組合設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)因素水平及其編碼表通過Design Expert軟件進(jìn)行了30組實(shí)驗(yàn),其結(jié)果見表2。通過對表2中實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)二次多項(xiàng)進(jìn)行回歸擬合得到糞腸球菌菌體濃度對蛋白胨,胡蘿卜汁,蔗糖和CaCO3的二次多項(xiàng)式的回歸方程式:Y=14.34-0.042A+0.11B-0.029C-0.047D-0.049AB-0.031AC+0.043AD+0.043BC-0.036BD-0.019CD-0.12A2-0.15B2-0.033C2-0.10D2

方程式中,糞腸球菌菌體濃度的預(yù)測值為Y,蔗糖,蛋白胨,胡蘿卜汁以及CaCO3的編碼值分別為A,B,C,D。從上方程得出的糞腸球菌的菌體濃度及其預(yù)測值見表2。

表2　中心組合設(shè)計(jì)及其實(shí)驗(yàn)結(jié)果Table 2　Expermental design and results of the CCRD

表3　二次多項(xiàng)模型的方差分析Table 3　ANOVA for the fitted quadratic polynomial model

對二次多項(xiàng)回歸模型方程進(jìn)行方差分析,分析的結(jié)果見表3。對模型系數(shù)顯著性檢驗(yàn)見表4。

表4　回歸方程系數(shù)顯著性檢驗(yàn)Tablel 4　Test of significance for regression coefficients

從表4回歸方程系數(shù)的顯著性檢驗(yàn)可以知道:各實(shí)驗(yàn)因素對糞腸球菌菌體密度的線性效應(yīng)全顯著;并其對糞腸球菌菌體濃度的曲面效應(yīng)也全顯著;AB,AC,AD,BC和BD的交互用顯著,而CD的交互的作用不顯著。

2.8.2糞腸球菌濃度的響應(yīng)面交互作用與優(yōu)化響應(yīng)面圖9是根據(jù)多元二次方程所得到的,通過該組圖可以直觀看出來各因素交互作用對響應(yīng)值的影響。

圖9　兩因素交互影響的曲面圖Fig.9　Response surface of two factors on the cell population of Enterococcus faecalis

由圖9可知,蛋白胨,蔗糖,胡蘿卜汁及CaCO3添加量的取值范圍分別在15～25 g/L,33～37 g/L,130～170 mL/L,8～12 g/L并將菌體密度確定為目標(biāo)最大值,采用軟件分析得到的最佳的組合為:蔗糖18.22 g/L,蛋白胨35.94 g/L,胡蘿卜汁152.82 mL/L,CaCO39.21 g/L。此時(shí)模型預(yù)測菌體濃度為14.38(log cfu/g)。在此條件下再次進(jìn)行驗(yàn)證實(shí)驗(yàn),得出的菌體濃度(log cfu/g)為14.32(也就是2.1×1014cfu/g),接近于軟件的預(yù)測值14.38(log cfu/g)。這證明了用響應(yīng)曲面法得到的此模型能有效地對所選的影響因子進(jìn)行優(yōu)化。

3　結(jié)論

根據(jù)單因素實(shí)驗(yàn),確定了蔗糖為微囊化糞腸球菌的最佳的碳源,培養(yǎng)基中蔗糖的最適濃度確定為20 g/L;蛋白胨為最佳的氮源,培養(yǎng)基中蛋白胨的最適濃度確定為35 g/L;胡蘿卜汁為最佳的促生長因子,培養(yǎng)基中最適的添加量確定為150 mL/L;pH緩沖劑CaCO3的最佳濃度為10 g/L。

采用設(shè)計(jì)軟件(Design-Expert 8.0.6)以蛋白胨,蔗糖,胡蘿卜汁及CaCO3四個(gè)因子作為研究對象,以菌體的濃度為響應(yīng)值進(jìn)行旋轉(zhuǎn)中心組合(Central Composite)實(shí)驗(yàn)。最后優(yōu)化的培養(yǎng)基配方:乳清粉60 g/L,蔗糖18.22 g/L,蛋白胨35.94 g/L,胡蘿卜汁152.82 mL/L,CaCO39.21 g/L,MgSO40.28 g/L,MnSO40.18 g/L。再次按照此配方進(jìn)行驗(yàn)證實(shí)驗(yàn),得出的菌體濃度(log cfu/g)為14.32(也就是2.1×1014cfu/g),接近于軟件的預(yù)測值14.38(log cfu/g)。最后按照此配方進(jìn)行增殖培養(yǎng)時(shí)糞腸球菌的菌體濃度可到達(dá)2.1×1014cfu/g。

4　討論

濃縮型發(fā)酵劑要求有較高的菌體濃度,一般要達(dá)到1010～1011cfu/g。但傳統(tǒng)的懸浮細(xì)胞培養(yǎng),細(xì)胞密度很難超過1010cfu/mL,需要進(jìn)行昂貴的分離,濃縮方法才能達(dá)到所需的細(xì)胞密度。近年來有些人使用固定化細(xì)胞技術(shù)制備高效濃縮型發(fā)酵劑,這種方法克服了傳統(tǒng)懸浮培養(yǎng)的限制和缺點(diǎn),降低了培養(yǎng)過程中細(xì)胞的損傷和損失,可以得到較大的細(xì)胞密度,很大程度上提高了培養(yǎng)效率[15-16]。

高密度培養(yǎng)是制備濃縮型發(fā)酵劑的技術(shù)難點(diǎn)之一。經(jīng)過培養(yǎng)基的優(yōu)化可以得到濃度高的菌體。培養(yǎng)基的組分對乳酸菌的生長有很大地影響,在實(shí)行濃縮培養(yǎng)時(shí),除了要供應(yīng)微生物生長所必需的碳源,氮源,生長因子等外,還需要進(jìn)一步地優(yōu)化培養(yǎng)基,目的為得到最高的生物量[17]。乳酸菌對培養(yǎng)基營養(yǎng)需求高,在實(shí)驗(yàn)室往往使用MRS培養(yǎng)基,這種培養(yǎng)基的價(jià)格比較高,不適合大規(guī)模培養(yǎng)。

目前國外已有不少采用便宜的乳清底質(zhì)培養(yǎng)基生產(chǎn)乳酸菌濃縮型發(fā)酵劑的成功先例[18-20]。國內(nèi),李艾黎[21],劉振民[22]等研制了緩沖能力強(qiáng),增殖效果很好的新型pH內(nèi)控型乳清培養(yǎng)基。該培養(yǎng)基勝于牛乳培養(yǎng)基和MRS培養(yǎng)基,其乳酸菌的生長速度較大。本研究的糞腸球菌在培養(yǎng)基優(yōu)化前將MRS培養(yǎng)基作為增殖培養(yǎng)基進(jìn)行了對照實(shí)驗(yàn),增殖培養(yǎng)后得到的菌體濃度為1.25×1010fu/g。

在高密度培養(yǎng)過程中微生物的培養(yǎng)基具有非常重要的地位。本實(shí)驗(yàn)利用響應(yīng)曲面法優(yōu)化了適用于微囊化糞腸球菌高密度培養(yǎng)的培養(yǎng)基配方:乳清粉60 g/L,蔗糖18.22 g/L,蛋白胨35.94 g/L,胡蘿卜汁152.82 mL/L,CaCO39.21 g/L,MgSO40.28 g/L,MnSO40.18 g/L。按照配方進(jìn)行增殖培養(yǎng)時(shí)糞腸球菌的菌體濃度可到達(dá)2.1×1014cfu/g,達(dá)到了囊內(nèi)菌株的高效濃縮培養(yǎng)的目的。此研究結(jié)果數(shù)據(jù)以更進(jìn)一步發(fā)展?jié)饪s型酸駝乳發(fā)酵劑提供依據(jù)及可靠的數(shù)據(jù)。

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Research of the high-density cultivation technology ofEnterococcusfaecalisdominated in traditional fermented camel milk

Sajidam·KAYSER,Gulpiya·TOHTI,Nurye·ABDUMILIK,Dilnur·ELHAM,Nurgul·RAHMAN*

(School of Life Sciences,Xinjiang Normal University,Urumqi 830054,China)

In order to get high-density cultural,the dominant bacteriaEnterococcusfaecalisisolated from traditional fermented camel milk was studied as initial bacteria under different cultural conditions to make liquid-core microcapsules. Used whey powder as basal medium,the appropriate carbon and nitrogen sources,somatomedin,pH buffers was carried out on the basis of single-factor experiments,and the optimal fermentation medium formula was determined by Response surface methodology. The best cultural medium for microencapsulatatedEnterococcusfaecaliswas designed as follow:whey powder 60 g/L,sucrose 18.22 g/L,peptone 35.94 g/L,carrot juice 152.82 mL/L,CaCO39.21 g/L,MgSO40.28 g/L,MnSO40.18 g/L. Under above-mentioned recipe,the viable cell concentration reached to 2.1×1014cfu/g.

liquid-core microcapsules;Enterococcusfaecalis;high-density cultivation;Response surface methodology

2016-01-12

沙吉坦穆·克依斯?fàn)?1989-)，女，碩士研究生，研究方向：應(yīng)用微生物，E-mail：sajida1026@163.com。

努爾古麗·熱合曼(1972-)，女，博士，副教授,研究方向：傳統(tǒng)發(fā)酵食品、益生菌資源，E-mail：nurgulum@163.com。

國家自然科學(xué)基金地區(qū)基金項(xiàng)目(31160333)。

TS201.3

A

1002-0306(2016)15-0159-06

10.13386/j.issn1002-0306.2016.15.023