張　穎,郭　盛,朱邵晴,徐　璐,嚴(yán)　輝,錢大瑋,段金廒

(南京中醫(yī)藥大學(xué),江蘇省中藥資源產(chǎn)業(yè)化過(guò)程協(xié)同創(chuàng)新中心/中藥資源產(chǎn)業(yè)化與方劑創(chuàng)新藥物國(guó)家地方聯(lián)合工程研究中心,江蘇南京 210023)

?

不同干燥方法對(duì)酸棗葉中核苷類、氨基酸類及黃酮類成分的影響

張穎,郭盛*,朱邵晴,徐璐,嚴(yán)輝,錢大瑋,段金廒*

(南京中醫(yī)藥大學(xué),江蘇省中藥資源產(chǎn)業(yè)化過(guò)程協(xié)同創(chuàng)新中心/中藥資源產(chǎn)業(yè)化與方劑創(chuàng)新藥物國(guó)家地方聯(lián)合工程研究中心,江蘇南京 210023)

為研究不同干燥方法對(duì)酸棗葉干燥過(guò)程中內(nèi)在質(zhì)量的影響,采用UPLC-TQ MS法和HPLC法分別建立酸棗葉中20種核苷類和23種氨基酸類,以及黃酮類成分蘆丁的分析方法,并探索不同干燥方法對(duì)酸棗葉中上述組分組成及含量的影響。研究結(jié)果表明本研究所建立的分析方法簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確可靠;所有樣品均富含核苷類、游離氨基酸類及黃酮類成分蘆丁,其中核苷類成分以磷酸化產(chǎn)物如胞苷-5′-單磷酸、腺苷-5′-單磷酸、鳥苷-5′-單磷酸含量相對(duì)較高,游離氨基酸類成分以脯氨酸、酪氨酸、γ-氨基丁酸含量相對(duì)較高;且所有干燥加工后樣品其上述成分含量均總體高于新鮮樣品。依據(jù)各樣品中所測(cè)定成分的含量,采用TOPSIS分析法,對(duì)不同干燥方法干燥樣品的內(nèi)在質(zhì)量進(jìn)行了綜合評(píng)價(jià),結(jié)果顯示以自然曬干樣品和40 ℃熱風(fēng)干燥樣品品質(zhì)較優(yōu),而新鮮樣品及70 ℃熱風(fēng)干燥樣品品質(zhì)較差。以上研究結(jié)果為酸棗葉產(chǎn)地干燥加工過(guò)程適宜干燥工藝的確定提供了數(shù)據(jù)支撐,也為葉類藥材的干燥加工提供了借鑒。

酸棗葉,干燥加工,核苷類,氨基酸類,黃酮類

酸棗[Ziziphusjujubavar.spinosa(Bunge)Hu ex H.F.Chow]系鼠李科棗屬植物,廣泛分布于我國(guó)北方廣大地區(qū),其中尤以河北、山西、陜西、河南、山東等地的低山丘陵區(qū)為多。其干燥成熟種子酸棗仁為中醫(yī)臨床常用寧心安神藥物,具養(yǎng)心補(bǔ)肝、寧心安神、斂汗、生津之功效。此外,本草尚記載酸棗果肉、花、葉、棘刺、樹皮及根均可藥用。其中,酸棗葉又名棘葉,具斂瘡解毒之功,可用于臁瘡的治療[1]。除作藥用外,近年來(lái)酸棗葉已被開(kāi)發(fā)為功能性茶飲,具調(diào)節(jié)神經(jīng)衰弱之心神不安、失眠多夢(mèng),改善心肌缺血,降血壓,降血脂等保健作用。此外,酸棗葉在伊朗等地還常用于甜味抑制劑[2-3]。近年來(lái),國(guó)內(nèi)外圍繞酸棗葉已開(kāi)展了廣泛的基礎(chǔ)研究,結(jié)果表明酸棗葉中含有三萜酸及其皂苷類[2,4]、黃酮類[5]、酚酸類[6]、核苷類[7]、氨基酸類等多種類型活性成分,為其保健功效物質(zhì)基礎(chǔ)的闡明提供了支撐。但迄今,尚未見(jiàn)關(guān)于酸棗葉在采摘后干燥加工過(guò)程中其化學(xué)成分的變化趨勢(shì)及不同干燥方法對(duì)其多類型活性成分影響的報(bào)道。據(jù)此,本研究以酸棗葉中含有的與其營(yíng)養(yǎng)保健功效密切相關(guān)的核苷類、氨基酸類、黃酮類化學(xué)成分為指標(biāo),考察其干燥過(guò)程中多元化學(xué)成分的變化趨勢(shì),以及不同干燥方法對(duì)其變化程度的影響,以期為酸棗葉產(chǎn)地適宜干燥加工方法的建立提供參考。

1　材料與方法

1.1材料與儀器

氨基酸類化學(xué)對(duì)照品亮氨酸、苯丙氨酸、異亮氨酸、色氨酸、γ-氨基丁酸、甲硫氨酸、脯氨酸、纈氨酸、牛磺酸、酪氨酸、丙氨酸、4-羥基脯氨酸、蘇氨酸、谷氨酸、賴氨酸、谷氨酰胺、絲氨酸、天冬酰胺、瓜氨酸、精氨酸、組氨酸、鳥氨酸、天冬氨酸,核苷類化學(xué)對(duì)照品胸腺嘧啶、胸苷、2′-脫氧腺苷、腺嘌呤、尿苷、腺苷、2′-脫氧肌苷、肌苷、胞嘧啶、胞苷、鳥苷、2′-脫氧腺苷-5′-單磷酸、腺苷-5′-單磷酸、鳥苷-5′-單磷酸、胞苷-5′-單磷酸、2′-脫氧尿苷、肌苷-5′-單磷酸、環(huán)磷酸鳥苷(cGMP)、環(huán)磷酸腺苷(cAMP)、2′-脫氧鳥苷均購(gòu)自Sigma公司;黃酮類化學(xué)對(duì)照品蘆丁購(gòu)自中國(guó)食品藥品檢定研究院;以上化學(xué)對(duì)照品純度經(jīng)HPLC檢測(cè)均大于98%。

乙腈(色譜純)購(gòu)自德國(guó)默克公司;超純水(18.2 MΩ·cm)經(jīng)EPED超純水系統(tǒng)自制;其它化學(xué)試劑(分析純)購(gòu)自上海國(guó)藥化學(xué)試劑公司。

酸棗葉樣品于2015年7月采自南京中醫(yī)藥大學(xué)藥用植物園,經(jīng)南京中醫(yī)藥大學(xué)段金廒教授鑒定為鼠李科植物酸棗Ziziphusjujubavar.spinosa(Bunge)Hu ex H.F.Chow的葉。藥材標(biāo)本存放于南京中醫(yī)藥大學(xué)標(biāo)本館。樣品采集后,去離子水清洗表面,4 ℃貯存?zhèn)溆谩?/p>

電熱鼓風(fēng)干燥機(jī)上海一恒科學(xué)儀器有限公司;中短波紅外干燥機(jī)江蘇泰州圣泰科紅外科技有限公司;隧道式微波干燥機(jī)南京研正微波設(shè)備廠;LabconcoFreeZone 2.5L冷凍干燥機(jī)美國(guó)Labconco公司;Waters 2695 HPLC及Waters ACQUITY UPLC系統(tǒng)(包括四元泵溶劑系統(tǒng),在線脫氣機(jī)和自動(dòng)進(jìn)樣器)、Xevo TQ檢測(cè)器、MassLynxTM質(zhì)譜工作站軟件美國(guó)Waters公司;BT125型電子天平賽多利斯科學(xué)儀器有限公司;EPED超純水系統(tǒng)南京易普易達(dá)科技發(fā)展有限公司;KQ-250E型超聲波清洗器昆山禾創(chuàng)超聲儀器有限公司;Anke GL-16GII型離心機(jī)上海安亭科學(xué)儀器廠。

1.2實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1樣品處理及干燥方法取新鮮酸棗葉,去除雜質(zhì),混合均勻,隨機(jī)分為質(zhì)量相近的10組,按表1所示干燥方法進(jìn)行干燥,至含水率達(dá)10%時(shí)停止干燥。

表1　酸棗葉干燥加工信息表Table 1　Information of drying methods carried out on the leaves of Ziziphus jujuba var.spionsa

1.2.2氨基酸及核苷類成分測(cè)定本課題組此前采用UPLC-TQ/MS法已建立了分別用于測(cè)定棗屬植物中核苷類[7]、氨基酸類[8]化學(xué)成分的定性定量分析方法。為縮短分析時(shí)間、減少樣品溶液制備次數(shù),本研究在前期研究的基礎(chǔ)上,參考文獻(xiàn)[9]建立了同時(shí)測(cè)定20種核苷類成分、23種氨基酸類成分的UPLC-MS/MS分析方法。

1.2.2.1供試品溶液的制備取樣品粉末1.0 g,精密稱定,置100 mL具塞錐形瓶中,精密加入超純水50 mL,稱重,靜置30 min后,超聲(100 Hz,50 ℃)60 min,冷卻后加超純水補(bǔ)足減失重量,搖勻,13000 r/min離心10 min,取上清液過(guò)0.22 μm濾膜,取續(xù)濾液,即得。

1.2.2.2對(duì)照品溶液的制備取干燥至恒重的各核苷與氨基酸對(duì)照品適量,精密稱定,以少量10%甲醇溶解,置10 mL容量瓶中,定容至刻度,搖勻,配成混合核苷與氨基酸對(duì)照品溶液。

1.2.2.3色譜及質(zhì)譜條件色譜條件同文獻(xiàn)[9]。

質(zhì)譜檢測(cè)方式:多反應(yīng)檢測(cè)(MRM);毛細(xì)管電壓:3.0 kV;離子源溫度:150 ℃;脫溶劑氣溫度:550 ℃;脫溶劑氣流量:1000 L/h;錐孔氣流量:50 L/h;碰撞氣流量:0.15 mL/min;取樣錐孔電壓:4 V;碰撞能量:18 eV。

表2　各化合物的主要質(zhì)譜檢測(cè)參數(shù)Table 2　Precursor/product ion pairs and parameters for MRM of compounds used in this study

本研究基于文獻(xiàn)[9]報(bào)道的化合物質(zhì)譜檢測(cè)條件外,新增加了尿苷等10個(gè)化合物的MS/MS檢測(cè),具體質(zhì)譜檢測(cè)參數(shù)見(jiàn)表2。

1.2.2.4方法學(xué)考察為考察所建立方法的適用性及可靠性,分別對(duì)其線性關(guān)系、精密度、重復(fù)性、穩(wěn)定性、加樣回收率進(jìn)行了考察。

線性關(guān)系考察:按1.2.2.2步驟配制混合對(duì)照品系列標(biāo)準(zhǔn)溶液,按1.2.2.3色譜及質(zhì)譜條件進(jìn)樣分析,評(píng)價(jià)方法的線性關(guān)系。

精密度、重復(fù)性及穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn):取混合對(duì)照品溶液按“1.2.2.3”項(xiàng)下方法重復(fù)測(cè)定6次,記錄峰面積并計(jì)算RSD值,得精密度實(shí)驗(yàn)結(jié)果;取樣品S9,按“1.2.2.1”項(xiàng)下方法分別制備供試品溶液,按“1.2.2.3”項(xiàng)下方法測(cè)定各待測(cè)成分質(zhì)量分?jǐn)?shù),計(jì)算RSD值,得重復(fù)性實(shí)驗(yàn)結(jié)果;取重復(fù)性實(shí)驗(yàn)中的任一供試品溶液,室溫貯存,并分別于0、2、4、6、8、12 h分別進(jìn)樣測(cè)定,記錄峰面積并計(jì)算RSD值,得穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)結(jié)果。

加樣回收率實(shí)驗(yàn):取樣品S9,采用標(biāo)準(zhǔn)加入法進(jìn)行加樣回收率實(shí)驗(yàn)。準(zhǔn)確稱取6份樣品各0.5 g,分別加入適量已知質(zhì)量濃度的對(duì)照品溶液。按“1.2.2.1”項(xiàng)下方法分別制備供試品溶液,按“1.2.2.3”項(xiàng)下方法測(cè)定各待測(cè)成分質(zhì)量分?jǐn)?shù),計(jì)算其加樣回收率。

1.2.3黃酮類成分的測(cè)定

1.2.3.1供試品溶液的制備取酸棗葉干燥品,粉碎,過(guò)篩(40目),取粉末約1 g,精密稱定,置50 mL具塞錐形瓶中,精密加入70%甲醇20 mL,稱重,超聲30 min,取出放冷,稱重后補(bǔ)足失重,取上清液,離心(13000 r/min)10 min,經(jīng)0.22 μm濾膜濾過(guò),取續(xù)濾液,即得。

1.2.3.2對(duì)照品溶液的制備精密稱取蘆丁對(duì)照品1.27 mg,至5 mL量瓶中,加70%甲醇適量,超聲溶解,放冷,加70%甲醇至刻度,渦旋混勻,即得蘆丁對(duì)照品儲(chǔ)備液。精密吸取適量?jī)?chǔ)備液,稀釋成系列不同濃度的對(duì)照品溶液,用于考察線性關(guān)系。

1.2.3.3色譜條件AlltimaTMC18(4.6 mm×250 mm,5 μm)色譜柱;柱溫30 ℃;流動(dòng)相為0.2%甲酸水(A)和乙腈(B);流速1.0 mL/min;梯度洗脫(0～15 min,15% B;15～20 min,15%～17% B;20～25 min,17% B;25～35 min,17%～22% B;35～40 min,22%～90% B;40～45 min,90%～15% B;45～50 min,15% B)。檢測(cè)波長(zhǎng)354 nm,進(jìn)樣體積10 μL。代表性色譜圖見(jiàn)圖2。

圖1　酸棗葉中核苷及氨基酸類成分UPLC-TQ MS圖Fig.1　UPLC-TQ MS of nucleosides and amino acids in the leaves of Ziziphus jujuba var.spinosa

圖2　酸棗葉中蘆丁HPLC圖Fig.2　HPLC of rutin in the leaves of Ziziphus jujuba var.spinosa注：A:對(duì)照品溶液,B:樣品溶液。

1.2.3.4方法學(xué)考察按1.2.3.2步驟配制蘆丁對(duì)照品系列標(biāo)準(zhǔn)溶液,按1.2.3.3色譜條件進(jìn)樣分析,評(píng)價(jià)方法的線性關(guān)系。取混合對(duì)照品溶液按“1.2.3.3”項(xiàng)下方法重復(fù)測(cè)定6次,記錄峰面積并計(jì)算RSD值,得精密度實(shí)驗(yàn)結(jié)果;以樣品S9為供試品,稱定6份,分別按“1.2.3.1”項(xiàng)下方法分別制備供試品溶液,按“1.2.3.3”項(xiàng)下方法測(cè)定蘆丁成分質(zhì)量分?jǐn)?shù),計(jì)算得其RSD值得重復(fù)性實(shí)驗(yàn)結(jié)果;取重復(fù)性實(shí)驗(yàn)中的任一供試品溶液,室溫貯存,并分別于0、2、4、6、8、12 h分別進(jìn)樣測(cè)定,記錄峰面積并計(jì)算RSD值,得穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)結(jié)果。取樣品S9,采用標(biāo)準(zhǔn)加入法進(jìn)行加樣回收率實(shí)驗(yàn)。準(zhǔn)確稱取6份樣品各0.5 g,分別加入適量已知質(zhì)量濃度的對(duì)照品溶液,按“1.2.3.1”項(xiàng)下方法分別制備供試品溶液,按“1.2.3.3”項(xiàng)下方法測(cè)定待測(cè)成分質(zhì)量分?jǐn)?shù),計(jì)算其加樣回收率。

1.3數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析

測(cè)定結(jié)果采用平均值±標(biāo)準(zhǔn)差表示。所有數(shù)據(jù)采用SPSS18.0統(tǒng)計(jì)軟件包進(jìn)行單因素方差分析,顯著性檢驗(yàn)(p<0.05)以LSD檢驗(yàn)方法進(jìn)行。不同干燥方法酸棗葉樣品營(yíng)養(yǎng)及保健價(jià)值綜合評(píng)價(jià)采用DPS數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)逼近理想值的排序方法(Technique for Order Preference by Similarity to Ideal Solution,TOPSIS)進(jìn)行分析。

2　結(jié)果與分析

2.1氨基酸及核苷類成分的測(cè)定

2.1.1方法學(xué)考察結(jié)果方法學(xué)考察測(cè)定結(jié)果見(jiàn)表3,結(jié)果顯示43種待測(cè)成分在其相應(yīng)的線性范圍內(nèi)線性相關(guān)系數(shù)為0.9952～1.0000,表明該方法線性關(guān)系均良好。精密度實(shí)驗(yàn)RSD值在1.36%～3.49%,重復(fù)性實(shí)驗(yàn)RSD值在1.94%～3.83%,穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)RSD值在1.39%～3.33%。表明該方法精密度及重復(fù)性均良好,供試品溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定,可滿足測(cè)定要求。加樣回收率實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示43種待測(cè)成分加樣回收率為95.18%～103.43%,RSD<4%,表明該方法準(zhǔn)確可靠。

2.1.2樣品中核苷及氨基酸類成分的測(cè)定結(jié)果在上述方法學(xué)考察的基礎(chǔ)上,按照選定的最佳儀器測(cè)試參數(shù),采用外標(biāo)一點(diǎn)法測(cè)定各樣品溶液中待測(cè)成分的含量,結(jié)果見(jiàn)表4。比較酸棗葉新鮮樣品及不同干燥方法干燥后樣品中待測(cè)成分含量,結(jié)果顯示:酸棗葉樣品中均富含核苷類及氨基酸類成分,其中氨基酸類成分含量較為豐富,其總量最高可達(dá)2.0%。在核苷類成分中,以磷酸化的核苷類成分如胞苷-5′-單磷酸、腺苷-5′-單磷酸、鳥苷-5′-單磷酸,以及尿苷含量相對(duì)較高。在游離氨基酸中以脯氨酸含量最高,平均含量達(dá)1.90 mg/g,其次為酪氨酸(1.03 mg/g)、γ-氨基丁酸(0.97 mg/g)、丙氨酸(0.96 mg/g)。其中,γ-氨基丁酸是一種天然存在的非蛋白組成氨基酸,是目前研究較為深入的一種重要的抑制性神經(jīng)遞質(zhì),可參與多種代謝活動(dòng),具有健腦益智、促進(jìn)睡眠、延緩腦衰老機(jī)能、降血壓等作用。酪氨酸是酪氨酸酶單酚酶功能的催化底物,是最終形成優(yōu)黑素和褐黑素的主要原料,應(yīng)用于美白化妝品中,可有效地抑制黑素的生成,此外尚具有抗抑郁作用。8種必需氨基酸中,除未檢測(cè)到甲硫氨酸外,其余均存在于多數(shù)樣品中,表明酸棗葉具有較高的營(yíng)養(yǎng)保健價(jià)值。

經(jīng)不同干燥方法干燥后樣品中核苷類及氨基酸類成分總量均高于新鮮樣品。40 ℃熱風(fēng)干燥(S2)、紅外干燥(S6)、曬干(S9)、微波干燥(S7)所得樣品總核苷類成分含量相對(duì)較高?？傆坞x氨基酸含量以曬干(S9)、35 ℃熱風(fēng)干燥(S1)含量相對(duì)較高。其中,脯氨酸、天冬酰胺在上述二樣品中含量遠(yuǎn)高于其他干燥樣品。有研究顯示,植物在干旱脅迫下,脯氨酸、天冬酰胺可大量積累,植物體內(nèi)脯氨酸及天冬酰胺的含量在一定程度上反映了植物的抗逆性。本研究中,新鮮酸棗葉采用35 ℃條件下熱風(fēng)干燥或曬干的處理方法,其過(guò)程與干旱脅迫類似,推測(cè)在此過(guò)程中脯氨酸及天冬酰胺相關(guān)合成酶活性增強(qiáng),從而表現(xiàn)為所得樣品中脯氨酸和天冬酰胺含量顯著高于新鮮樣品及其他干燥方法所得樣品。而冷凍干燥是指物料經(jīng)完全凍結(jié),中心溫度降至-18 ℃以下,并通過(guò)低溫真空使冰晶升華,從而達(dá)到低溫脫水干燥的目的,其可最大限度地保留新鮮樣品中的活性成分,本研究顯示凍干樣品中脯氨酸及天冬酰胺含量與新鮮樣品未見(jiàn)顯著性差異,證實(shí)了干燥加工過(guò)程中脯氨酸及天冬酰胺含量的升高與單純脫水無(wú)關(guān)。此外,本研究也顯示與脯氨酸及天冬酰胺合成相關(guān)的酶系熱穩(wěn)定性差,故而在溫度高于40 ℃條件下干燥時(shí),隨干燥溫度升高其含量整體呈現(xiàn)下降趨勢(shì)。以上研究結(jié)果進(jìn)一步驗(yàn)證了脯氨酸及天冬酰胺含量的升高與模擬干旱脅迫相關(guān)。

表3　核苷及氨基酸類成分測(cè)定方法學(xué)考察實(shí)驗(yàn)結(jié)果Table 3　Validation of the method for determination of nucleosides and amino acids

表4　不同樣品中核苷類、氨基酸類及黃酮類成分分析結(jié)果(n=3)Table 4　The analysis results of the investigated nucleosides,amino acids and flavonoids in samples(n=3)

續(xù)表

注:樣品序號(hào)同表1;nd:未檢測(cè)到;tr:低于定量限;同一行中兩組數(shù)據(jù)標(biāo)識(shí)字母不同表明其具有顯著性差異(p<0.05)。

2.2黃酮類成分蘆丁的測(cè)定

2.2.1方法學(xué)考察結(jié)果線性關(guān)系考察結(jié)果顯示蘆丁對(duì)照品工作曲線回歸方程為y=1695521 x+36757,在濃度2.54～254 μg/mL范圍內(nèi)相關(guān)系數(shù)(r)為0.9999,表明該方法線性關(guān)系良好。精密度、重復(fù)性、穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示其RSD值分別為0.77%、1.44%、1.41%。以上實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明該方法精密度及重復(fù)性均良好,供試品溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定,可滿足測(cè)定要求。加樣回收率實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示其平均回收率為98.5%,RSD值0.84%,表明該方法準(zhǔn)確可靠。

2.2.2樣品中黃酮類成分蘆丁的測(cè)定結(jié)果供試樣品中蘆丁含量測(cè)定結(jié)果見(jiàn)表4。結(jié)果顯示,所有干燥樣品中蘆丁含量均顯著高于新鮮樣品。不同溫度熱風(fēng)干燥樣品中,蘆丁含量隨著干燥溫度的升高呈現(xiàn)上升趨勢(shì),50 ℃干燥樣品中蘆丁含量最高(8.61 mg/g),之后隨著干燥溫度的升高蘆丁含量漸趨下降。相同干燥溫度(50 ℃)經(jīng)不同干燥方法干燥樣品,以熱風(fēng)干燥法蘆丁含量最高,微波干燥法與紅外干燥法所干燥樣品其蘆丁含量無(wú)顯著差異。研究顯示,蘆丁具有抗氧化、抗衰老、保護(hù)心腦血管等多重生物活性。本研究結(jié)果顯示酸棗葉中蘆丁含量豐富,表明酸棗葉具有重要的營(yíng)養(yǎng)保健價(jià)值。

2.3不同干燥方法酸棗葉樣品營(yíng)養(yǎng)及保健價(jià)值綜合評(píng)價(jià)

本研究所測(cè)定酸棗葉中各指標(biāo)成分含量在不同干燥方法中變化趨勢(shì)不同,且在數(shù)量級(jí)上也存在較大差異,因此采用簡(jiǎn)單加和法顯然不能客觀全面反映各樣品的內(nèi)在質(zhì)量。TOPSIS分析方法是目前一種較為理想的基于多指標(biāo)變量進(jìn)行綜合排序的常用統(tǒng)計(jì)方法,其中心思想是首先確定各項(xiàng)指標(biāo)的正理想值A(chǔ)+和負(fù)理想值A(chǔ)-,然后求出各干燥方法與正、負(fù)理想值之間的加權(quán)歐式距離D+和D-,從而求出各干燥方法與理想方案的接近程度Ci,作為評(píng)價(jià)方案優(yōu)劣的標(biāo)準(zhǔn)[10]。據(jù)此,本研究為揭示不同干燥方法干燥酸棗葉樣品的保健功效及營(yíng)養(yǎng)價(jià)值差異,以10批次酸棗葉樣品中含有的23種氨基酸、20種核苷以及蘆丁的含量組成10×44矩陣,采用DPS數(shù)據(jù)處理系統(tǒng),對(duì)酸棗葉樣品測(cè)定結(jié)果進(jìn)行TOPSIS分析,結(jié)果見(jiàn)表5。

表5　TOPSIS綜合評(píng)價(jià)結(jié)果Table 5　Results of the TOPSIS evaluation

TOPSIS評(píng)價(jià)結(jié)果顯示,自然曬干樣品(S9)、40 ℃熱風(fēng)干燥樣品(S2)綜合排序分列1、2位,而新鮮樣品(S10)及70 ℃熱風(fēng)干燥樣品(S5)綜合排序分列9、10位,表明就以上所測(cè)定核苷類、氨基酸類及黃酮類成分蘆丁而言,以自然曬干樣品和40 ℃熱風(fēng)干燥樣品品質(zhì)較優(yōu),而新鮮樣品及70 ℃熱風(fēng)干燥樣品品質(zhì)較差。以上研究結(jié)果提示酸棗葉在產(chǎn)地干燥加工過(guò)程中應(yīng)以傳統(tǒng)曬干法或40 ℃熱風(fēng)干燥為其最佳干燥方法。

3　結(jié)論

本文分別采用UPLC-TQ MS、HPLC法建立了酸棗葉中20種核苷類、23種游離氨基酸類,以及黃酮類成分蘆丁的分析方法,并通過(guò)10批次樣品驗(yàn)證表明本研究所建立的方法簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確可靠。所有樣品均富含氨基酸類、核苷類及黃酮類成分蘆丁,其中氨基酸類成分中以脯氨酸、酪氨酸、γ-氨基丁酸含量相對(duì)較高,核苷類成分以磷酸化產(chǎn)物如胞苷-5′-單磷酸、腺苷-5′-單磷酸、鳥苷-5′-單磷酸含量相對(duì)較高,表明酸棗葉具有較高的營(yíng)養(yǎng)保健價(jià)值?；赥OPSIS分析法,建立了基于酸棗葉中含有的多類型營(yíng)養(yǎng)成分角度的客觀評(píng)價(jià)酸棗葉保健營(yíng)養(yǎng)價(jià)值的綜合評(píng)價(jià)方法。評(píng)價(jià)結(jié)果顯示酸棗葉在產(chǎn)地干燥加工過(guò)程中應(yīng)以傳統(tǒng)曬干法或40 ℃熱風(fēng)干燥法為其適宜干燥方法,為酸棗葉產(chǎn)地干燥加工方法的選擇提供了數(shù)據(jù)支撐。

[1]國(guó)家中醫(yī)藥管理局《中華本草》編委會(huì).中華本草(第五冊(cè))[M].上海:上?？茖W(xué)技術(shù)出版社,1999,260,267.

[2]郭盛,段金廒,錢大瑋,等.棗屬植物化學(xué)成分研究進(jìn)展[J].國(guó)際藥學(xué)研究雜志,2013,40(6):702-710.

[3]Yoshikawa K,Shimono N,Arihara S.Antisweet substances,jujubasaponins I-III fromZizyphusjujubarevised structure of ziziphin[J]. Tetrahedron Lett,1991,32(48):7059-7062.

[4]Guo S,Duan JA,Tang YP,et al.Simultaneous qualitative and quantitative analysis of triterpenic acids,saponins and flavonoids in the leaves of two Ziziphus species by HPLC-PDA-MS/ELSD[J].Journal of Pharmaceutical and Biomedical Analysis, 2011,56(2):264-270.

[5]李喜悅,高哲,崔璨,等.棗葉黃酮類成分的分離鑒定及其抗氧化活性研究[J].食品工業(yè)科技,2015,36(10):135-138.

[6]徐變娜,王敏,曹靜,等.不同時(shí)期梨棗葉茶抗氧化成分組成及活性差異的分析[J].食品科學(xué),2013,34(13):34-38.

[7]Guo S,Duan JA,Qian DW,et al.Hydrophilic interaction ultra-high performance liquid chromatography coupled with triple quadrupole mass spectrometry for determination of nucleotides,nucleosides and nucleobases in Ziziphus plants[J].Journal of Chromatography A,2013,1301:147-155.

[8]Guo S,Duan JA,Qian DW,et al.Rapid determination of amino acids in fruits ofZiziphusjujubaby hydrophilic interaction ultra-high performance liquid chromatography coupled with triple quadrupole mass spectrometry[J].Jouranl of Agricultural and Food Chemistry,2013,61(16):2709-2719.

[9]Zhang LL,Bai YL,Su SL,et al.Simultaneous quantitation of nucleosides,nucleobases,amino acids,and alkaloids in mulberry leaf by ultra high performance liquid chromatography with triple quadrupole tandem mass spectrometry[J].Journal of Separation Science,2014,37:1265-1275.

[10]Sun YF,Liang ZS,Shan CJ,et al.Comprehensive evaluation of natural antioxidants and antioxidant potentials inZiziphusjujubaMill.var.spinosa(Bunge)Hu ex HF Chou fruits based on geographical origin by TOPSIS method[J].Food Chemistry,2011,124(4):1612-1619.

Effect of different drying methods on nucleoside,amino acids and flavonoids in the leaves ofZiziphusjujubavar.spinosa

ZHANG Ying,GUO Sheng*,ZHU Shao-qing,XU Lu,YAN Hui,QIAN Da-wei,DUAN Jin-ao*

(Jiangsu Collaborative Innovation Center of Chinese Medicinal Resources Industrialization,and National and Local Collaborative Engineering Center of Chinese Medicinal Resources Industrialization and Formulae Innovative Medicine,Nanjing University of Chinese Medicine,Nanjing 210023,China)

To explore the effects of different drying methods on the quality ofZiziphusjujubavar.spinosa leaf(ZSL),the methods for determination of 20 nucleoside and 23 amino acids as well as rutin in ZSL were established by UPLC-TQ MS and HPLC method.Based on the results,the effects of different drying methods on the above constituents in the samples were evaluated.The results showed that the analysis method established in this study was simple,accurate and reliable.All samples were rich in nucleosides,free amino acids and rutin.The contents of phosphorylating products,such as cytidine 5′-monophosphate,adenosine 5′-monophosphate monophosphate and guanosine 5′-monophosphate were relative high in the nucleosides.For the free amino acids,high contents were found for proline,tyrosine andγ-aminobutyric acid in the samples.Also,the contents of these compounds determined in the samples after drying process were generally higher than those of fresh sample.Based on the contents of the compounds analyzed in the samples,TOPSIS analysis method was performed for evaluating the intrinsic quality of the samples dried by different methods.The results showed that the samples dried by the sun or hot air at 40 ℃ displayed better quality,while poor qualities were found for the fresh samples and the product dried at 70 ℃ with hot air.The above results provided the data for selecting the suitable drying process method of ZSL,and also could provide a reference for the drying process of leafy herbs.

Ziziphusjujubavar spinosa leaf;drying process;nucleosides;amino acids;flavonoids

2015-09-20

張穎(1995-)，女，本科，研究方向：中藥資源學(xué)，E-mail：nzyzyb@163.com。

郭盛(1977-)，男，博士，研究方向：中藥資源化學(xué)，E-mail：guosheng@njucm.edu.cn。

段金廒(1956-)，男，教授，博導(dǎo)，研究方向：中藥資源學(xué)及資源化學(xué)，E-mail：dja@njucm.edu.cn。

國(guó)家自然科學(xué)基金面上項(xiàng)目(81473538)；教育部霍英東教育基金會(huì)高等院校青年教師基金項(xiàng)目(141040)；國(guó)家中醫(yī)藥行業(yè)科研專項(xiàng)(201407005)；江蘇高校優(yōu)勢(shì)學(xué)科建設(shè)工程資助項(xiàng)目(ysxk-2014)。

TS207.3

A

1002-0306(2016)09-0296-08

10.13386/j.issn1002-0306.2016.09.049