馬建忠，蒲　明（新疆昌吉州畜產(chǎn)品質(zhì)量檢測(cè)中心，新疆　昌吉　831100）

棉殼和棉桿作為肉羊育肥飼料安全性的研究

馬建忠，蒲明
（新疆昌吉州畜產(chǎn)品質(zhì)量檢測(cè)中心，新疆昌吉831100）

試驗(yàn)旨在研究含棉飼料是否會(huì)對(duì)育肥羊肉品質(zhì)量產(chǎn)生影響及危害，為生產(chǎn)中含棉育肥羊飼料提供理論依據(jù)。本實(shí)驗(yàn)在肉羊育肥飼料中分別添加了不同比例（10%、20%、30%、40%）的棉籽殼、棉桿、脫毒棉籽殼，并分別對(duì)飼喂30 d、60 d、90 d與120 d后的肉羊組織器官進(jìn)行游離棉酚殘留量的測(cè)定。結(jié)果表明：肉羊的腎臟、脾臟、心臟、羊肉及其脂肪中均未檢測(cè)到游離棉酚，僅在飼喂90 d及120 d肉羊肝臟中測(cè)得最高游離棉酚殘留量6.4 mg/kg，其值遠(yuǎn)低于國(guó)內(nèi)外飼料游離棉酚殘留標(biāo)準(zhǔn)。將低于40%棉殼、棉桿添加到肉羊育肥飼料不會(huì)對(duì)畜產(chǎn)品質(zhì)量帶來(lái)影響，是安全可行的。

肉羊；育肥飼料；游離棉酚；安全性

10.16863/j.cnki.1003-6377.2016.04.003

新疆是我國(guó)最大棉花生產(chǎn)地和加工產(chǎn)區(qū)，其中棉花秸稈、棉殼等棉副產(chǎn)品產(chǎn)量大，價(jià)格低。近幾年來(lái)，隨著畜牧業(yè)的快速發(fā)展，草料供應(yīng)日顯緊張，棉籽、棉殼等棉副產(chǎn)品已在許多地區(qū)成為了動(dòng)物飼料的蛋白質(zhì)來(lái)源，并被廣泛的應(yīng)用在牲畜飼料中。

棉籽、棉殼等棉副產(chǎn)品是一種高脂肪、高能量、高蛋白的飼料，且含有動(dòng)物體必需脂肪酸及對(duì)動(dòng)物有益的多不飽和脂肪酸，尤其在目前優(yōu)質(zhì)蛋白飼料資源短缺、價(jià)格昂貴的情況下，棉籽與棉殼已逐步成為動(dòng)物日糧設(shè)計(jì)中的首選蛋白質(zhì)飼料。但棉籽、棉殼等棉副產(chǎn)品中含有游離棉酚這一有低毒物質(zhì)，其毒性主要由活性醛基和活性羥基引起，易在動(dòng)物體內(nèi)形成蓄積。當(dāng)肉羊攝入棉副產(chǎn)品后，大部分會(huì)在消化道中形成結(jié)合棉酚，從糞便中直接排出，只有小部分會(huì)被吸收，且棉酚在體內(nèi)各器官中的分布是不均勻的，肝臟含量最多，其次是膽汁、血清和腎，而淋巴結(jié)、脾、心、肺、隔肌和胰中的含量較低，人食用含有游離棉酚的畜產(chǎn)品也會(huì)存在一定的安全隱患，從而嚴(yán)重地影響了棉副產(chǎn)品在畜禽飼料中應(yīng)用的安全性。本文對(duì)不同飼喂時(shí)間的羊肉組織器官進(jìn)行游離棉酚殘留量的測(cè)定，以確定含棉酚飼料是否會(huì)對(duì)羊畜產(chǎn)品質(zhì)量帶來(lái)危害，同時(shí)對(duì)樣品前處理的凈化效果進(jìn)行了優(yōu)化，提高了測(cè)定的穩(wěn)定性和準(zhǔn)確性。

1　試驗(yàn)材料與方法

1.1試驗(yàn)材料

試驗(yàn)用肉羊取自新疆昌吉州呼圖壁縣吉祥源農(nóng)牧科技開發(fā)有限公司；試驗(yàn)用棉籽桿、棉籽殼主要為天山北坡地區(qū)產(chǎn)低酚棉副產(chǎn)品。

1.1.1儀器與試劑

Aglient 1200高效液相色譜儀，G1314B紫外檢測(cè)器，7725i進(jìn)樣器，高速勻漿機(jī)，離心機(jī)，氮吹儀，乙腈（色譜純）、甲醇（色譜純）、甲酸（色譜純）、Sepax-UCT SSH2P 60mg/3mL固相萃取柱（相當(dāng)于Waters Oasis HLB固相萃取柱）。

棉酚標(biāo)準(zhǔn)品為Sigma-Aldrich公司提供，標(biāo)準(zhǔn)溶液：用色譜純乙腈配制成質(zhì)量濃度為100mg/L的棉酚標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液，再分別稀釋成0.5mg/L，1mg/L，2mg/L，4mg/L，8mg/L，16mg/L的標(biāo)準(zhǔn)工作液。

1.2試驗(yàn)方法

1.2.1分組方法

將200只實(shí)驗(yàn)用羊分別用含有不同添加量的棉籽殼、棉桿、脫毒棉籽殼飼料進(jìn)行喂養(yǎng)，其中棉籽殼、棉桿與脫毒棉籽殼按添加比例均設(shè)為四個(gè)小組，添加量分別為10%、20%、30%、40%。并設(shè)立不含游離棉酚的飼料為空白對(duì)照組。

1.2.2飼喂及飼喂含量的確定

各實(shí)驗(yàn)組在同等條件下進(jìn)行獨(dú)立編號(hào)飼養(yǎng)，飼養(yǎng)時(shí)間分別為30 d、60 d、90 d和120 d。試驗(yàn)前對(duì)試驗(yàn)用棉桿、棉籽殼及脫毒棉籽殼中游離棉酚的含量進(jìn)行了測(cè)定，經(jīng)測(cè)定：其中棉籽殼里的游離棉酚為281 mg/kg，棉桿里的游離棉酚含量為345 mg/kg，脫毒棉籽殼里的游離棉酚含量為103 mg/kg。每個(gè)飼喂組中攝入游離棉酚含量理論值見表1。

表1　飼喂飼料中游離棉酚飼喂量Table 1 The amount of feed free gossypol

1.2.3肉羊的屠宰與樣品數(shù)量

13個(gè)小組，實(shí)驗(yàn)組每組隨機(jī)選4只，對(duì)照組每組隨機(jī)選2只，進(jìn)行取樣屠宰，屠宰后取肌肉、肝、脾、腎進(jìn)行檢測(cè)。

試驗(yàn)共檢測(cè)13個(gè)小組飼喂30 d、60 d、90 d和120 d樣品251批次，其中羊肉40批次，肝臟51批次，腎臟40批次，脾臟40批次，心臟40批次，脂肪40批次。詳見表2。

表2　樣品采集數(shù)量Table 2 The number of samples collected

1.2.4樣品前處理

取2 g樣品，加乙腈10 mL，渦旋混勻，振蕩10 min，5 000 r/min離心5 min，上清液轉(zhuǎn)移至另一離心管中，重復(fù)提取1次，合并上清液，40℃氮?dú)獯蹈?，用乙?0.1%甲酸水溶液（1:1）5 mL溶解，備用。

HLB固相萃取小柱用3 mL甲醇，3 mL水活化，取備用液全部過柱，用5%甲醇3 mL淋洗，5 mL乙腈洗脫，40℃氮?dú)獯蹈?，用流?dòng)相0.5ml溶解（0.1%甲酸乙腈:0.1%甲酸水=90:10）。

1.2.5色譜條件

流動(dòng)相：0.1%甲酸乙腈，0.1%甲酸水，梯度洗脫

色譜柱：安捷倫ZORBAX SB-C18 4.6X250 mm，5-micron

檢測(cè)波長(zhǎng)：235 nm

柱溫：25℃

流速：1.0 mL/min

進(jìn)樣量：20 L

2　結(jié)果與分析

2.1前處理?xiàng)l件的優(yōu)化

2.1.1游離棉酚提取液的選擇

采用2%抗壞血酸-乙腈水溶液、純乙腈、純丙酮、70%丙酮水溶液、1%檸檬酸丙酮五種溶液進(jìn)行游離棉酚提取效率比較試驗(yàn)，測(cè)得純乙腈、純丙酮的提取對(duì)游離棉酚的提取效率較好且易于濃縮。

2.1.2流動(dòng)相的選擇

使用乙腈、甲醇同磷酸、甲酸、乙酸，按不同配比分別進(jìn)行了研究，結(jié)果表明：乙腈-甲酸體系峰形對(duì)稱，分離度較高且響應(yīng)值大，故而選擇乙腈同0.1%甲酸做為流動(dòng)相。

對(duì)流動(dòng)相的配比做了研究，選擇85:15，80:20，90:10等比例和梯度洗脫，其中等比例洗脫的分離效果不理想，而梯度洗脫的游離棉酚峰與雜質(zhì)峰分離效果較好。

2.1.3檢測(cè)波長(zhǎng)的選擇

游離棉酚在235 nm、254 nm、290 nm處均有較大吸收，但樣品測(cè)定時(shí)290 nm的雜質(zhì)干擾峰較多，254 nm的響應(yīng)較低，故確定235 nm為最佳檢測(cè)波長(zhǎng)。

2.1.4方法的檢出限

空白樣品中添加0.1 mg/kg，0.5 mg/kg，1 mg/kg，2 mg/kg，4 mg/kg的游離棉酚標(biāo)準(zhǔn)品，全過程按照上述前處理方法處理，按照檢出限的定義：在樣品中能檢出游離棉酚的最低濃度，即檢出游離棉酚的峰高為基準(zhǔn)噪音峰高的3倍時(shí)的添加游離棉酚的濃度。確定本方法的最低檢測(cè)限為1 mg/kg。（基準(zhǔn)噪音峰高為1.2～2.1，峰面積為28～38。

2.2肉羊組織器官游離棉酚檢測(cè)結(jié)果

2.2.1羊肉中游離棉酚檢測(cè)結(jié)果

40批次羊肉中均未檢出游離棉酚。

2.2.2肝臟中游離棉酚檢測(cè)結(jié)果

51批次肝臟中有24批次檢出游離棉酚，其中飼喂30 d和60 d各試驗(yàn)組均未檢出游離棉酚，飼喂90 d有3個(gè)組檢出了游離棉酚，飼喂120 d所有組的樣品均檢出了游離棉酚。詳見表3。

表3　不同含棉飼料飼喂肉羊肝臟中游離棉酚的含量Table 1.The effects of cotton containing feed on the contents of free gossypol in sheep liver

2.2.3腎臟中游離棉酚檢測(cè)結(jié)果

40批次腎臟中均未檢出游離棉酚。

2.2.4心臟中游離棉酚檢測(cè)結(jié)果

40批次心臟中均未檢出游離棉酚。

2.2.5脾臟中游離棉酚檢測(cè)結(jié)果

40批次脾臟中均未檢出游離棉酚。

2.2.6脂肪中游離棉酚檢測(cè)結(jié)果

40批次脂肪中均未檢出游離棉酚。

3討論

本實(shí)驗(yàn)是以天山北坡育肥羊生產(chǎn)實(shí)際的飼養(yǎng)方式和日糧中棉副產(chǎn)品的添加量為基礎(chǔ)進(jìn)行實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)，經(jīng)檢測(cè)，實(shí)驗(yàn)用棉籽殼、棉桿和脫毒棉籽殼里的游離棉酚含量分別為281 mg/kg、345 mg/kg和103 mg/kg，我國(guó)現(xiàn)行飼料衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)(GB13078-2001)對(duì)于飼料中游離棉酚允許量規(guī)定為棉籽餅粕原料≤1200 mg/kg，實(shí)驗(yàn)用原料游離棉酚允許量低于國(guó)家現(xiàn)行標(biāo)準(zhǔn)。在游離棉酚日飼喂量方面，實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)的最高添加組的日飼喂量為207 mg/kg，由于我國(guó)的現(xiàn)行標(biāo)準(zhǔn)中沒有對(duì)反芻動(dòng)物日糧中游離棉酚允許量作出規(guī)定，只能參考國(guó)外的相關(guān)規(guī)定，如歐盟規(guī)定其成年牛、山羊、綿羊≤500 mg/kg，本實(shí)驗(yàn)的日飼喂量也低于國(guó)外的相關(guān)規(guī)定。從上述實(shí)驗(yàn)結(jié)果可以看出，天山北坡地區(qū)在育肥羊生產(chǎn)實(shí)際中棉副產(chǎn)品的添加量和日飼喂量都是符合相關(guān)規(guī)定的。

我國(guó)的現(xiàn)行標(biāo)準(zhǔn)中沒有對(duì)動(dòng)物內(nèi)臟、肉、蛋、奶等畜產(chǎn)品中棉酚殘留量作出規(guī)定，僅規(guī)定了食用油中的游離棉酚最高殘留限量為200 mg/kg。世界衛(wèi)生組織、聯(lián)合國(guó)兒童基金會(huì)蛋白質(zhì)顧問小組建議食用棉籽制品中游離棉酚含量不超過500 mg/kg，總棉酚含量不超過1 200 mg/kg，美國(guó)食品及藥物管理局規(guī)定游離棉酚殘留不超過450 mg/kg，俄羅斯國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)為不超過100 mg/kg。而從本實(shí)驗(yàn)的檢測(cè)結(jié)果來(lái)看，已檢測(cè)出的最高殘留量為6.4 mg/kg，遠(yuǎn)低于國(guó)內(nèi)食用油的標(biāo)準(zhǔn)和國(guó)外的相關(guān)規(guī)定。因此，在育肥羊飼料中添加棉籽殼、棉桿、脫毒棉籽殼等棉副產(chǎn)品，不會(huì)對(duì)畜產(chǎn)品質(zhì)量安全帶來(lái)影響以及對(duì)人體產(chǎn)生危害，將棉殼和棉桿作為肉羊育肥飼料是安全的。

本實(shí)驗(yàn)使用的棉籽桿、棉籽殼主要為天山北坡地區(qū)產(chǎn)低酚棉副產(chǎn)品，在實(shí)際推廣應(yīng)用過程中，應(yīng)首先確定當(dāng)?shù)孛藁ㄆ贩N及棉酚含量后，才能作為肉羊育肥飼料。

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Study on afety of Cotton Shell and Cotton Stalks as Sheep Feed

MA Jian-zhong1,PU Ming
(Animal Products Quality Testing Center of Changji Hui Autonomous Prefecture,Chingji 831100，China）

The Test aims at studying whether cotton-containing feed can affect or damage the quality of sheep productsand providing a theoretical basis for production of cotton-containing sheep feed.In this test,a different proportion of cotton seed hulls,cotton stalks and detoxification cotton seed hulls are added respectively(10%,20%,30%and 40%)into the feed,and use the HPLC to determine free gossypol in sheep tissues and organs which are fed for 30 days,60 days,90 or 120 days.The results showed that:free gossypol is not detected in sheep kidney,spleen,heart and fat mutton,except that the highest free gossypol at residual amount is 6.4 mg/k for the 90 or 120 days of feeding sheep liver which is much lower than the value of domestic and foreign feed free gossypol residue standards.The test shows that cotton shell and cotton stalks added into sheep feed will not impact on the livestock product quality,it is safe and feasible.

sheep;feed;free gossypol;safety.

S816.32

A

1003-6377（2016）04-0014-06

自治區(qū)科技廳科技支撐項(xiàng)目（201431127）

馬建忠（1969-），男，碩士，高級(jí)獸醫(yī)師，主要從事畜牧獸醫(yī)專業(yè)工作。E-mail：1377720181@qq.com

2016-04-20，

2016-04-25