孫小明，趙　鵬，丁延云，張宗清，張瑞智，陳　蓉，羅春學(xué)（.臨夏回族自治州公安局刑警支隊(duì)，甘肅 臨夏 700；.積石山保安族東鄉(xiāng)族撒拉族自治縣公安局，甘肅 積石山 7700；.東鄉(xiāng)族自治縣公安局，甘肅 東鄉(xiāng) 7400）

臨夏回族自治州保安族人群15個(gè)STR基因座的遺傳多態(tài)性

孫小明1，趙鵬1，丁延云2，張宗清2，張瑞智3，陳蓉1，羅春學(xué)1
（1.臨夏回族自治州公安局刑警支隊(duì)，甘肅 臨夏 731100；2.積石山保安族東鄉(xiāng)族撒拉族自治縣公安局，甘肅 積石山 731700；3.東鄉(xiāng)族自治縣公安局，甘肅 東鄉(xiāng) 731400）

法醫(yī)遺傳學(xué)；多態(tài)現(xiàn)象，遺傳；短串聯(lián)重復(fù)序列；臨夏回族自治州；保安族

短串聯(lián)重復(fù)序列（short tandem repeats，STR）是一類簡(jiǎn)單重復(fù)的DNA序列，其重復(fù)序列僅2～6bp，重復(fù)次數(shù)在10～60次，又稱為微衛(wèi)星DNA。STR分布廣，散布在整個(gè)基因組中，平均每20kb就有一個(gè)STR基因座，在人類基因組中約存在著5萬(wàn)～10萬(wàn)個(gè)STR。STR基因座具有極高的多態(tài)性，亦按孟德?tīng)柖蛇z傳［1］。

據(jù)全國(guó)第六次人口普查數(shù)據(jù)，我國(guó)共有保安族20074人［2］，主要聚居于甘肅省積石山保安族東鄉(xiāng)族撒拉族自治縣境內(nèi)。本研究應(yīng)用AmpFeSTR?Identifiler?Plus PCR擴(kuò)增試劑盒（美國(guó)AB公司）對(duì)聚居于甘肅省臨夏州積石山縣境內(nèi)聚居的301名保安族無(wú)關(guān)個(gè)體（占全國(guó)保安族總?cè)丝诘?.499%）15個(gè)STR基因座的遺傳多態(tài)性進(jìn)行調(diào)查，為我國(guó)西北地區(qū)少數(shù)民族人群法醫(yī)學(xué)個(gè)人識(shí)別和親權(quán)鑒定提供基礎(chǔ)數(shù)據(jù)。

1　材料與方法

1.1樣本

按照知情同意原則［3］，采集301名保安族無(wú)關(guān)個(gè)體口腔拭子（男156例，女145例）作為本研究的樣本。

1.2儀器及試劑

9700型 PCR擴(kuò)增儀、3130xl型遺傳分析儀、AmpFeSTR?Identifiler?Plus PCR擴(kuò)增試劑盒、POP4膠、去離子甲酰胺、人類標(biāo)準(zhǔn)品DNA（9947A）均采購(gòu)自美國(guó)AB公司。

1.3DNA提取

常規(guī)Chelex-100法［4］提取口腔拭子DNA。

1.4PCR擴(kuò)增

采用10 μL擴(kuò)增體系在9700型PCR擴(kuò)增儀上進(jìn)行擴(kuò)增，PCR反應(yīng)溫度設(shè)定參照試劑盒說(shuō)明書(shū)。

1.5基因座分型檢測(cè)

PCR產(chǎn)物變性后在3130xl型遺傳分析儀上進(jìn)行毛細(xì)管電泳，用GeneMapper ID v3.3軟件對(duì)15個(gè)STR基因座和性別基因座Amelogenin進(jìn)行分型。

采用人類標(biāo)準(zhǔn)品DNA（9947A）作為陽(yáng)性對(duì)照、超純水作為陰性對(duì)照。

1.6統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

用直接計(jì)數(shù)法計(jì)算各基因座的等位基因數(shù)和基因型數(shù)目，應(yīng)用Modified-Powerstates分析軟件［5］對(duì)群體數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)，得到15個(gè)STR基因座的等位基因頻率、雜合度（H）、個(gè)人識(shí)別率（DP）、匹配概率（Pm）、非父排除率（PE）和多態(tài)信息含量（PIC）等群體遺傳學(xué)參數(shù)。

2　結(jié)果

等位基因頻率分布和群體遺傳學(xué)參數(shù)見(jiàn)表1～2。

表1　臨夏回族自治州保安族人群15個(gè)STR基因座等位基因頻率?。╪=301）

表2　臨夏回族自治州保安族人群15個(gè)STR基因座群體遺傳學(xué)參數(shù)?。╪=301）

3　討　論

甘肅省臨夏回族自治州301名保安族無(wú)關(guān)個(gè)體15個(gè)STR基因座共檢出150個(gè)等位基因和499個(gè)基因型，其基因頻率在0.002～0.527，基因型數(shù)目在14～61。經(jīng)χ2檢驗(yàn)，各基因座的基因型觀察值和期望值在所有基因座差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），符合Hardy-Weinberg平衡定律。

由表2可見(jiàn)，本研究中15個(gè)STR基因座的H值在 0.648（TOPX）～0.877（D2S1338），PIC值在 0.560 （TOPX）～0.850（D2S1338），Pm值在0.034（D2S1338）～0.217（TOPX），DP值在0.783（TOPX）～0.966（D2S1338），PE值在0.352（TOPX）～0.749（D2S1338）。根據(jù)文獻(xiàn)［1］計(jì)算15個(gè)STR基因座的累積匹配概率為7.924 27× 10-18，累積個(gè)人識(shí)別率為0.999999999999999992076，累積非父排除率為0.999998259。

本研究顯示，甘肅省臨夏回族自治州保安族群15個(gè)STR基因座中除CSF1PO、D3S1358、TH01、TOPX、D5S818這5個(gè)基因座的遺傳多態(tài)性稍低外，其余10個(gè)STR基因座均為高雜合度（H＞0.7）、高鑒別力（DP＞0.9）、高多態(tài)信息含量（PIC＞0.7）的高度多態(tài)性遺傳標(biāo)記基因座［6］，考慮出現(xiàn)這種結(jié)果的原因?yàn)檠芯繕颖玖枯^少。實(shí)驗(yàn)結(jié)果同時(shí)表明，15個(gè)STR基因座聯(lián)合應(yīng)用具有高度的個(gè)人識(shí)別和親權(quán)鑒定能力。在今后的調(diào)查研究工作中，本研究調(diào)查分析所得數(shù)據(jù)在樣本量進(jìn)一步增加、群體遺傳學(xué)參數(shù)進(jìn)一步完善并更加穩(wěn)定的基礎(chǔ)上，可以用于該地區(qū)保安族群體的法醫(yī)學(xué)個(gè)人識(shí)別、親權(quán)鑒定以及遺傳學(xué)分析。

［1］鄭秀芬.法醫(yī)DNA分析［M］.北京：中國(guó)人民公安大學(xué)出版社，2002：385-387.

［2］http://data.stats.gov.cn/search.htm？s=2010%20%20%20保安族.

［3］趙一鳴.醫(yī)學(xué)倫理學(xué)：醫(yī)學(xué)研究中不可回避的問(wèn)題［J］.中華醫(yī)學(xué)雜志，2005，85（6）：424-426.

［4］Walsh PS，Metzger DA，Higuchi R.Chelex 100 as a medium for simple extraction of DNA for PCR-based typing from forensic material［J］.Biotechniques，1991，10（4）：506-513.

［5］趙方，伍新堯，蔡貴慶，等.Modified-Powerstates軟件在法醫(yī)生物統(tǒng)計(jì)中應(yīng)用［J］.中國(guó)法醫(yī)學(xué)雜志，2003，18（5）：297-298，312.

［6］Gill P，Urquhart A，Millican E，et al.A new method of STR interpretation using inferential logic--development of a criminal intelligence database［J］.Int J Legal Med，1996，109（1）：14-22.

（本文編輯：李成濤）

DF795.2

B

10.3969/j.issn.1004-5619.2016.04.016

1004-5619（2016）04-0301-03

孫小明（1986—），男，回族，主檢法醫(yī)師，主要從事法醫(yī)臨床和法醫(yī)遺傳學(xué)的鑒定及研究；E-mail：76630593@qq.com

羅春學(xué)，男，主檢法醫(yī)師，主要從事法醫(yī)臨床和法醫(yī)遺傳學(xué)鑒定的及研究工作；E-mail：1442204979@qq.com

2015-03-24）