孫大鵬，閔涯鄰，連昌舟，俞衛(wèi)東（南京市公安局，江蘇 南京 210012）

·技術(shù)與應(yīng)用·

南京漢族人群24個(gè)Y-STR基因座的遺傳多態(tài)性

孫大鵬，閔涯鄰，連昌舟，俞衛(wèi)東
（南京市公安局，江蘇 南京 210012）

目的 調(diào)查DYS391等24個(gè)Y-STR基因座在南京漢族人群的遺傳多態(tài)性，考察其在法醫(yī)學(xué)中的應(yīng)用價(jià)值。方法 應(yīng)用AGCU Y-PLUS（24）PCR試劑盒對(duì)南京580名漢族無關(guān)男性個(gè)體進(jìn)行Y-STR基因座擴(kuò)增檢測分型，用軟件計(jì)算24個(gè)基因座的基因頻率等群體遺傳學(xué)參數(shù)，并與湖北、遼寧、廣東、北京、成都漢族人群數(shù)據(jù)進(jìn)行比較。結(jié)果 南京580名漢族無關(guān)男性個(gè)體在24個(gè)Y-STR基因座共發(fā)現(xiàn)580種單倍型，各基因座的基因多樣性（GD）為0.2946～0.9398，單倍型多樣性（HD）為0.9837。六地人群GD值的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)論 DYS391等24個(gè)Y-STR基因座在南京地區(qū)有法醫(yī)學(xué)價(jià)值，可用于案件檢驗(yàn)及家系排查。

法醫(yī)遺傳學(xué)；多態(tài)現(xiàn)象，遺傳；短串聯(lián)重復(fù)序列；Y染色體；漢族

人類23對(duì)染色體中，Y染色體不同于常染色體，在擬常染色體區(qū)之外的區(qū)域，在遺傳過程中不與X染色體發(fā)生交換重組，其DNA能穩(wěn)定地由父親遺傳給兒子（父系遺傳）。Y-STR基因座在個(gè)人識(shí)別、親權(quán)鑒定、混合斑檢測等方面都有很高的應(yīng)用價(jià)值，是常染色體檢驗(yàn)的重要補(bǔ)充。鄭秀芬［1］認(rèn)為Y-STR各基因座的遺傳有連鎖性，以等位基因單倍型表達(dá)遺傳差異性。本研究調(diào)查了DYS391等24個(gè)Y-STR基因座在南京漢族人群中的多態(tài)性，旨在為Y-STR基因座在南京地區(qū)的法醫(yī)學(xué)應(yīng)用及群體遺傳學(xué)研究提供基礎(chǔ)數(shù)據(jù)。

1　材料與方法

1.1樣本

選取南京市漢族無關(guān)男性個(gè)體580名，取其外周血，于血樣采集卡上陰干后保存。

1.2試劑與儀器

AGCU Y-PLUS（24）熒光檢測試劑盒（無錫中德美聯(lián)生物技術(shù)有限公司），DNA標(biāo)準(zhǔn)品007、POP-4TM聚合物、Hi-DiTMFormamide、9700型PCR擴(kuò)增儀、3130xl型遺傳分析儀（美國AB公司）。

1.3DNA提取與擴(kuò)增

根據(jù)AGCU Y-PLUS（24）熒光檢測試劑盒說明書，用直擴(kuò)法（免提取）對(duì)前述樣品進(jìn)行PCR擴(kuò)增。

擴(kuò)增條件：95℃ 5 min；94℃ 1 min，60℃ 1 min，72℃ 1min，10個(gè)循環(huán)；90℃ 1min，58℃ 1min，72℃1min，22個(gè)循環(huán)；60℃ 60min。

1.4檢測與分型

PCR產(chǎn)物變性后在3130xl型遺傳分析儀上進(jìn)行電泳，用GeneMapper?ID-X軟件（美國AB公司）對(duì)24個(gè)Y-STR基因座（DYS391、DYS389Ⅰ、DYS439、DYS389Ⅱ 、DYS438、DYS449、DYS456、DYS458、DYS437、DYS635、DYS448、DYS527a/b、Y-GATA-H4、DYS447、DYS19、DYS392、DYS522、DYS393、DYS388、DYS390、DYS385a/b、DYS444）進(jìn)行分型，用 DNA標(biāo)準(zhǔn)品007作為陽性對(duì)照。

1.5統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

用直接計(jì)數(shù)法［2］計(jì)算24個(gè)Y-STR基因座的等位基因頻率和單倍型頻率，用PowerMarker v3.25軟件計(jì)算基因多樣性（GD）。對(duì)于Y染色體而言，單倍型多樣性（HD）值即等于個(gè)人識(shí)別率（DP）和非父排除率（PE），可以描述群體Y染色體單倍型信息［3］。

1.6與其他地區(qū)的比較

查閱相關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道，獲得湖北［AGCU Y-PLUS（24）體系，包含24個(gè)基因座］［4］、遼寧（自合成引物包含20個(gè)基因座）［5］、廣東（AmpFeSTR?Yfiler體系，包含17個(gè)基因座）［6］、北京（AmpFeSTR?Yfiler體系，包含17個(gè)基因座）［7］、成都（AmpFeSTR?Yfiler體系，包含17個(gè)基因座）［8］等地域的漢族人群各基因座等位基因頻率及GD值，與本研究所得數(shù)據(jù)進(jìn)行比較，利用Arlequin軟件計(jì)算遺傳距離Rst矩陣，將計(jì)算得到的凈遺傳距離數(shù)據(jù)輸入SPSS Statistics 19軟件進(jìn)行多維尺度分析（MDS）。

2　結(jié)　果

580名個(gè)體樣本中共檢出580種單倍型，因檢測樣本有限，未發(fā)現(xiàn)相同的單倍型?；蜃l率分布見表1，GD值見表2。HD值為0.9837。其中檢出單倍型最多的是DYS385a/b基因座（52種），GD值最高的為DYS385a/b基因座（0.939 8），最低的為DYS391基因座（0.2946）。經(jīng)與湖北、遼寧、廣東、北京、成都漢族人群比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。

MDS距離模型見圖1，結(jié)果顯示，南京與其他地區(qū)遺傳距離均較遠(yuǎn)。

續(xù)表1

表2　24個(gè)Y-STR基因座的GD值?。╪=580）

3　討論

評(píng)估Y-STR鑒別能力的指標(biāo)是基因多樣性（GD），對(duì)于連鎖的遺傳標(biāo)記，不能采用乘積定律，需先計(jì)算單倍型頻率，再計(jì)算個(gè)人識(shí)別率。本研究所調(diào)查的YSTR基因座的GD值為0.294 6～0.939 8，在南京漢族群體中具有較好的遺傳多態(tài)性，適合法醫(yī)學(xué)應(yīng)用。

南京地區(qū)與湖北、遼寧、廣東、北京、成都五地相比較的結(jié)果表明，不同地域群體的Y-STR各基因座的GD值普遍存在差異，也有相關(guān)文獻(xiàn)［5］得出類似結(jié)論，差異的產(chǎn)生源于研究群體缺乏遷徙交流。MDS距離模型原理是通過輸入相似性程度矩陣，在低維度（本研究中使用二維）空間中找到相對(duì)位置坐標(biāo)，根據(jù)歐氏直線距離的長短判斷研究對(duì)象之間的相似程度。點(diǎn)與點(diǎn)之間距離較遠(yuǎn)、點(diǎn)與點(diǎn)和原點(diǎn)形成的夾角較大，說明各研究對(duì)象間有很強(qiáng)的差異性。本研究MDS距離模型顯示南京與其他五地遺傳距離均較遠(yuǎn)，說明南京漢族群體與這五地人口交流遷徙較少。在歷史上，南京城在梁“候景之亂”時(shí)因圍城斷糧，幾近空城。此后至民國初期人口穩(wěn)步緩慢上升，此階段主要是人口自然增長（出生），對(duì)外省沒有大量的人口流入或流出。因日軍入侵和南京大屠殺，人口降至戰(zhàn)前1/4［9］，建國后人口增長平穩(wěn)。自“十一五”以來人口主要為機(jī)械式增長（遷徙），流入人口主要來源于南京周邊的安徽及蘇南幾個(gè)城市，且安徽籍多于其他來源之總和。2013年人口自然增長重占主導(dǎo)地位［10］。人口史印證了南京與上述五地基本無人口遷徙。

綜上，DYS391等24個(gè)Y-STR基因座在南京漢族群體中有應(yīng)用價(jià)值，適用于個(gè)人識(shí)別、案件檢驗(yàn)及家系排查，本研究得到的數(shù)據(jù)對(duì)建立南京漢族群體Y－STR數(shù)據(jù)庫亦有重要意義。

［1］鄭秀芬.法醫(yī)DNA分析［M］.北京：中國人民公安大學(xué)出版社，2002：311-312，385-386.

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［7］魯滌，袁麗，楊雪.北京漢族群體17個(gè)Y-STR基因座遺傳多態(tài)性［J］.中國法醫(yī)學(xué)雜志，2010，25（6）：432-433.

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［9］ 李沛霖，經(jīng)盛鴻.淪陷時(shí)期南京的人口變遷和市民生活［J］.南京社會(huì)科學(xué)，2014，（10）：144-150.

［10］南京市人口發(fā)展工作領(lǐng)導(dǎo)小組辦公室.2013年度南京市人口發(fā)展報(bào)告［R］.人口資訊，2014，（5）.

（本文編輯：李莉）

讀者來信

編輯部老師你們好！貴刊2016年第3期刊出的《＜人體損傷致殘程度分級(jí)＞總體原則的把握與理解》一文經(jīng)仔細(xì)拜讀，感覺總體寫得不錯(cuò)。但有兩個(gè)地方我們?nèi)匀桓杏X困惑：

1.關(guān)于5.1（移植組織器官損傷的鑒定）第（1）節(jié)，在舉例說明時(shí)似乎沒有進(jìn)一步說明條款的適用問題。因?yàn)楦鶕?jù)標(biāo)準(zhǔn)5.5.4.3（腎移植術(shù)后，腎功能基本正常）就是五級(jí)殘，所以當(dāng)這個(gè)移植腎損毀摘除后，其傷殘等級(jí)應(yīng)該高于五級(jí)殘。作者的意思是否是想比照腎切除條款，傷后的級(jí)別要高于五級(jí)才合理，所以提出“可考慮按照一腎切除鑒定”。但一腎切除有兩個(gè)條款，即5.5.4.2（一側(cè)腎切除術(shù)后，另一側(cè)腎功能中度下降）和5.3.4.3（一側(cè)腎切除術(shù)后，另一側(cè)腎功能重度下降）。即要根據(jù)腎功能情況可以定五級(jí)，也可以定三級(jí)。實(shí)際操作中到底如何適用？

2.關(guān)于5.2（永久性植入式人工假體損壞的鑒定）中對(duì)于有些假體，如乳房填充物損壞是否能夠評(píng)殘？是否會(huì)有不同觀點(diǎn)？

本編輯部將特邀專家就以上問題進(jìn)行解釋，同時(shí)也歡迎廣大法醫(yī)學(xué)者來稿展開討論。

《法醫(yī)學(xué)雜志》編輯部

Genetic Polymorphisms of 24 Y-STR Loci in Nanjing Han Population

SUN Da-peng，MIN Ya-lin，LIAN Chang-zhou，YU Wei-dong
（Nanjing Public Security Bureau，Nanjing 210012，China）

Objective To investigate the genetic polymorphism of DYS391 and other 23 Y-STR loci and to explore its application value in forensic science.Methods Y-STRs loci of 580 unrelated Han males in Nanjing were amplified using AGCU Y-PLUS PCR（24）kit.The genetic parameters of 24 Y-STR loci such as gene frequency were calculated by software，and compared with the data of Hubei，Liaoning，Guangdong，Beijing and Chengdu Han population.Results Total 580 haplotypes were detected among 24 Y-STR loci in 580 unrelated Han males in Nanjing.The genetic diversity（GD）of each locus was from 0.2946 to 0.9398，and the haplotypes diversity（HD）was 0.9837.There was a significant difference between the GD of 6 areas.Conclusion The 24 Y-STR loci such as DYS391 in Nanjing Han population have an application value in forensic science.They can also be used for cases testing and pedigree investigation.

forensic genetics；polymorphism，genetic；tandem repeat sequences；Y chromosome；Han nationality

DF795.2

A

10.3969/j.issn.1004-5619.2016.04.009

1004-5619（2016）04-0269-04

孫大鵬（1980—），男，主檢法醫(yī)師，主要從事法醫(yī)DNA檢驗(yàn)和鑒定；E-mail：9397759@qq.com

2016-03-09）