張　揚(yáng),張　艷,楊秀東,劉　洋,周鴻立

(吉林化工學(xué)院化學(xué)與制藥工程學(xué)院,吉林吉林 132022)

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響應(yīng)面法優(yōu)化玉米苞葉多糖的提取工藝

張揚(yáng),張艷,楊秀東,劉洋,周鴻立*

(吉林化工學(xué)院化學(xué)與制藥工程學(xué)院,吉林吉林 132022)

應(yīng)用響應(yīng)面法優(yōu)化玉米苞葉多糖提取工藝。單因素實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)上,選擇提取時(shí)間、提取溫度、液料比、乙醇濃度為影響因子,多糖提取率為響應(yīng)值,利用Box-Behnken中心組合設(shè)計(jì)建立數(shù)學(xué)模型,進(jìn)行響應(yīng)面分析。研究結(jié)果顯示:玉米苞葉多糖的最佳提取工藝為:提取時(shí)間2.0 h、溫度83 ℃、液料比17∶1(mL/g)、乙醇濃度63%,此條件下的多糖提取率為0.552%。

玉米苞葉,多糖,響應(yīng)面法,提取

玉米(ZeamaysL.)為一年生禾本科(Gramineae)植物,是我國總產(chǎn)量最高的糧食作物之一,種植面積約有3億畝。玉米苞葉(Corn bract)為玉米的外苞葉,每公頃玉米可采集600 kg苞葉,資源非常豐富,是常見的農(nóng)業(yè)副產(chǎn)物。研究表明,玉米苞葉中富含黃酮、木糖醇、花色苷、花青素、微量元素等多種生理活性物質(zhì)[1]。具有調(diào)節(jié)血脂、預(yù)防動(dòng)脈粥樣硬化、抑制α-糖苷酶等藥理作用[2-4]。目前,玉米苞葉主要作為牲畜飼料使用,少數(shù)質(zhì)地優(yōu)良的苞葉用于編織工藝品,綜合利用率不高。因此,對(duì)玉米苞葉中的生物活性成分進(jìn)行深度發(fā)掘具有較大現(xiàn)實(shí)意義。

多糖是一類由單糖通過糖苷鍵鏈接而成的大分子有機(jī)化合物,廣泛存在于植物、微生物及動(dòng)物體內(nèi),在生命體生長(zhǎng)、發(fā)育過程中扮演著重要角色。很多植物來源的天然多糖具有廣泛的藥理作用,如免疫調(diào)節(jié)、抗氧化、抗腫瘤、抗病毒、抗炎等生物學(xué)活性[5]。研究表明,玉米須中富含多糖,且具有較高活性[6]。近年來,伴隨研究深入,開發(fā)了多種高效、快捷的植物多糖提取方法,如超聲波輔助提取法、微波輔助提取、超臨界流體萃取法、酶法等[7-8]。然而,超聲波和微波可能會(huì)破壞多糖結(jié)構(gòu),進(jìn)而降低活性[9];酶法和超臨界流體萃取法則成本較高,難以工業(yè)化。比較而言,經(jīng)典水提法具有成本低、操作簡(jiǎn)單、環(huán)境友好、對(duì)多糖結(jié)構(gòu)影響小等優(yōu)點(diǎn),廣泛應(yīng)用于植物多糖的提取研究中[10]。針對(duì)玉米苞葉提取多糖的研究較少,本文采用經(jīng)典水提醇沉法對(duì)玉米苞葉中的多糖類物質(zhì)進(jìn)行提取研究,為玉米苞葉資源的深入開發(fā)及相關(guān)功能性產(chǎn)品的研制提供實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)。

1　材料與方法

1.1材料和儀器

玉米苞葉采至吉林省吉林市郊區(qū);葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)品購自北京普凱瑞生物科技有限公司(純度:HPLC≥98%);乙醇、濃硫酸、苯酚購自安耐吉化學(xué);其他試劑均為國產(chǎn)分析純。

752N紫外可見分光光度計(jì)上海菁華科技儀器有限公司;HH-6數(shù)顯恒溫水浴鍋國華電器有限公司;RE-52A旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上海亞榮生化儀器廠;TGL-20M臺(tái)式高速冷凍離心機(jī)湖南湘儀實(shí)驗(yàn)室儀器開發(fā)有限公司。

1.2實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1玉米苞葉多糖的提取采用水提醇沉法[11],流程為:苞葉的預(yù)處理(清洗、40～45 ℃烘干至恒重、粉碎、過40目篩備用)→提取→真空抽濾→減壓濃縮至原體積1/3～1/4→醇沉→4 ℃靜置過夜→3000×g離心10 min→無水乙醇洗滌→真空干燥→粗多糖。

1.2.2粗多糖含量及提取率測(cè)定以葡萄糖為對(duì)照品,采用苯酚-硫酸法測(cè)定粗多糖含量[12]。回歸方程為Y=7.3928X+0.0085,R2=0.9998。多糖提取率計(jì)算公式為:

式中,m為粗多糖質(zhì)量(g);M為玉米苞葉質(zhì)量(g);W為粗多糖含量(%)。

1.2.3提取工藝優(yōu)化

1.2.3.1單因素實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)設(shè)定提取時(shí)間、提取溫度、液料比、乙醇濃度為因素,考察四個(gè)因素對(duì)多糖提取率的影響。固定提取溫度80 ℃、液料比30∶1、乙醇濃度80%,提取時(shí)間為0.5、1.0、1.5、2.0、2.5 h;固定提取時(shí)間1.5 h、液料比30∶1、乙醇濃度80%,溫度為50、60、70、80、90 ℃;固定提取時(shí)間1.5 h、提取溫度80 ℃、乙醇濃度80%,液料比為10∶1、20∶1、30∶1、40∶1、50∶1(mL/g);固定提取時(shí)間1.5 h、提取溫度80 ℃、液料比30∶1,乙醇濃度50%、60%、70%、80%、90%。

1.2.3.2響應(yīng)面實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)根據(jù)BOX-Behnken Design(BBD)實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)原理,綜合單因素結(jié)果,選取提取時(shí)間、提取溫度、液料比、乙醇濃度作為考察因素。在單因素基礎(chǔ)上采用四因素三水平的響應(yīng)面分析進(jìn)行實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)(表1)。

表1　BBD方案設(shè)計(jì)的因素和水平編碼值表Table 1　The coded factors and levels in the Box-Behnken design

1.3數(shù)據(jù)處理

應(yīng)用Design-Expert V 8.0.6.1軟件進(jìn)行四因素三水平Box-Behnken實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)。

2　結(jié)果與討論

2.1單因素實(shí)驗(yàn)結(jié)果及分析

2.1.1提取時(shí)間對(duì)多糖提取率的影響如圖1所示,一定范圍內(nèi),隨提取時(shí)間延長(zhǎng),多糖提取率先增大后減小,當(dāng)提取時(shí)間為2.0 h時(shí),多糖提取率最高?？赡苡捎谔崛r(shí)間短,苞葉中多糖溶解不充分;提取時(shí)間過長(zhǎng)則會(huì)使大分子多糖分子降解為低分子量的寡糖或單糖[13],影響提取率。因此,提取時(shí)間以2.0 h為宜。

圖1　提取時(shí)間對(duì)多糖提取率的影響Fig.1　Effect of extraction time on PCB yield

2.1.2提取溫度對(duì)多糖提取率的影響由圖2可知,50～80 ℃范圍內(nèi),隨溫度升高,多糖提取率增加。超過80 ℃,多糖提取率開始下降。可能因?yàn)橐欢ǚ秶鷥?nèi),隨溫度升高,多糖在提取液中溶解度增大,提取率升高;而當(dāng)溫度太高時(shí),提取液中的多糖會(huì)有損失,也會(huì)使蛋白質(zhì)等雜質(zhì)析出,進(jìn)而影響提取率。故提取溫度以80 ℃為宜。

圖2　提取溫度對(duì)多糖提取率的影響Fig.2　Effect of extraction temperature on PCB yield

2.1.3液料比對(duì)多糖提取率的影響由圖3可見,當(dāng)液料比(mL/g)在20∶1時(shí),提取率最高。此后,隨溶劑量增加,多糖提取率下降?？赡芤?yàn)橐毫媳刃r(shí),溶劑過少,苞葉中多糖溶出不充分;而液料比過大時(shí),則溶劑過多,濃縮耗時(shí)長(zhǎng),進(jìn)而導(dǎo)致多糖損失,降低提取率。故液料比以20∶1(mL/g)為宜。

圖3　液料比對(duì)多糖提取率的影響Fig.3　Effect of liquid to solid ratio on PCB yield

2.1.4乙醇濃度對(duì)多糖提取率的影響由圖4可知,乙醇濃度在60%時(shí),多糖提取率最大。此后,隨乙醇濃度增加,提取率增加幅度不大,基本趨于平穩(wěn)。說明一定濃度乙醇能降低多糖溶解度,利于沉淀多糖;高濃度乙醇則會(huì)使某些雜質(zhì)一起沉淀析出,降低多糖純度[14],進(jìn)而影響提取率。因此,選擇60%為醇沉濃度為宜。

圖4　乙醇濃度對(duì)多糖提取率的影響Fig.4　Effect of ethanol concentration on PCB yield

2.2響應(yīng)面實(shí)驗(yàn)結(jié)果與分析

2.2.1Box-Behnken設(shè)計(jì)方案及結(jié)果如表2所示,共29個(gè)實(shí)驗(yàn)點(diǎn),其中24個(gè)為析因點(diǎn),5個(gè)為零點(diǎn),析因點(diǎn)為自變量取值在X1、X2、X3、X4所構(gòu)成的三維頂點(diǎn);零點(diǎn)為區(qū)域的中心點(diǎn),其中零點(diǎn)實(shí)驗(yàn)重復(fù)5次,用以估計(jì)實(shí)驗(yàn)誤差。

表2　響應(yīng)面實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)的因素、水平與實(shí)驗(yàn)結(jié)果Table 2　Factors and levels in the response surface design and experimental results

2.2.2模型的建立與顯著性檢驗(yàn)對(duì)表2實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行多元回歸擬合,得玉米苞葉多糖提取率(Y)對(duì)提取時(shí)間(X1)、提取溫度(X2)、液料比(X3)、乙醇濃度(X4)的二次多項(xiàng)回歸模型為:

Y=0.56+0.0095X1+0.064X2-0.026X3+0.066X4+0.043X1X2+0.026X1X3-0.00275X1X4-0.055X2X3+0.00375X2X4-0.00875X3X4-0.13X12-0.13X22-0.08X32-0.13X42

對(duì)該模型進(jìn)行顯著性檢驗(yàn)和回歸模型系數(shù)顯著性檢驗(yàn),結(jié)果見表3。

由表3中的二次回歸模型的方差分析結(jié)果可知,該模型能較好解釋數(shù)據(jù)變異性。X1X4、X2X4、X3X4的影響不顯著，X1的影響顯著，其余因子均為極顯著。

2.2.3多糖提取工藝的響應(yīng)面分析與優(yōu)化響應(yīng)面分析的圖形是特定的響應(yīng)值對(duì)應(yīng)自變量構(gòu)成的一個(gè)三維空間圖,可以直觀地反映出各自變量對(duì)響應(yīng)值的影響。根據(jù)回歸模型做出相應(yīng)的響應(yīng)曲面,見圖5～圖7。

當(dāng)液料比(mL/g)20∶1、乙醇濃度60%時(shí),提取時(shí)間和提取溫度對(duì)多糖提取率的影響見圖5。由圖5可知,在1.5～2.5 h范圍內(nèi)多糖提取率先增大后減小。在溫度為70～90 ℃的范圍內(nèi),提取率不斷增加,之后隨提取時(shí)間延長(zhǎng),多糖提取率有下降趨勢(shì),表明提取時(shí)間和溫度對(duì)提取率的交互作用極顯著。

圖5　提取時(shí)間和提取溫度對(duì)多糖提取率的響應(yīng)曲面圖Fig.5　Response surface plot of extraction time and temperature on PCB yield

表3　回歸模型的方差分析結(jié)果Table 3　ANOVA of the regression model

注：**，極顯著；*，顯著，p<0.05。

當(dāng)提取溫度80 ℃、乙醇濃度60%時(shí),提取時(shí)間和液料比對(duì)多糖提取率的影響見圖6。由圖6可知,當(dāng)液料比一定時(shí),隨提取時(shí)間延長(zhǎng),多糖提取率先增加后降低。時(shí)間1.5～2.5 h范圍內(nèi),隨液料比增加多糖提取率先上升后下降,對(duì)多糖提取率的影響極顯著。

圖6　提取時(shí)間和液料比對(duì)多糖提取率的響應(yīng)曲面圖Fig.6　Response surface plot of extraction time and liquid to solid ratio on PCB yield

提取時(shí)間2.0 h、乙醇濃度60%時(shí),提取溫度和液料比對(duì)多糖提取率的影響見圖7。由圖7可知,提取溫度對(duì)多糖提取率的影響較大,且響應(yīng)面顯示坡度較陡,表明提取溫度和液料比的交互作用極顯著。

圖7　提取溫度和液料比對(duì)多糖提取率的響應(yīng)曲面圖Fig.7　Response surface plot of extraction temperature and liquid to solid ratio on PCB yield

軟件分析得玉米苞葉多糖提取的最佳條件為:提取時(shí)間2.03 h、提取溫度83.16 ℃、液料比17.22∶1、乙醇濃度62.79%。此條件下,多糖提取率理論值為0.579%。為檢驗(yàn)響應(yīng)曲面法所得結(jié)果的可靠性,采用上述優(yōu)化提取條件進(jìn)行玉米苞葉多糖提取,考慮到實(shí)際操作的便利,將提取工藝參數(shù)修正為:提取時(shí)間為2.0 h、提取溫度83 ℃、液料比17∶1、乙醇濃度63%。實(shí)際測(cè)得的平均提取率為0.552%,與理論預(yù)測(cè)相比,其相對(duì)誤差約為4.7%,因此,基于響應(yīng)曲面法所得的優(yōu)化提取工藝參數(shù)準(zhǔn)確可靠,具有實(shí)用價(jià)值。

3　結(jié)論

本文采用經(jīng)典水提醇沉法制備玉米苞葉多糖,在單因素實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)上,結(jié)合實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)軟件Design-Expert.V8.0.6.1,通過二次回歸得到玉米苞葉多糖提取率與提取時(shí)間、溫度、液料比、乙醇濃度的回歸模型,經(jīng)檢驗(yàn)證明該模型合理、可靠,能較好預(yù)測(cè)多糖提取率。在對(duì)影響多糖提取率的關(guān)鍵因素及相互作用進(jìn)行探討后,優(yōu)化出玉米苞葉多糖提取工藝的最佳條件為:提取時(shí)間2.0 h、提取溫度83 ℃、液料比17∶1、乙醇濃度63%,多糖實(shí)際提取率為0.552%,與理論預(yù)測(cè)相比,其相對(duì)誤差約為4.7%,理論預(yù)測(cè)與實(shí)測(cè)結(jié)果相差較小,結(jié)果可靠,適合于玉米苞葉多糖的提取。

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Optimization of extraction process of polysaccharides from corn bract by response surface methodology

ZHANG Yang,ZHANG Yan,YANG Xiu-dong,LIU Yang,ZHOU Hong-li*

(School of Chemistry and Pharmaceutical Engineering,Jilin Institute of Chemical Technology,Jilin 132022,China)

In this study,optimization of extraction process of polysaccharides from corn bract(PCB)by response surface methodology was investigated. Based on the results of single factor experiment,four factors,including extraction time,extraction temperature,the ratio of liquid to raw material,and ethanol concentration were selected as impacting factors,and PCB yield as the response value. Mathematical model was established to analyze response surface using Box-Behnken central composite design. The optimal extraction process was as follows:extraction time 2.0 h,extraction temperature 83 ℃,liquid to solid ratio 17∶1(mL/g),and alcohol precipitation concentration 63%. Under these conditions,the yield of PCB was 0.552%.

corn bract;polysaccharides;response surface methodology;extraction

2015-12-18

張揚(yáng)(1982-)，男，博士，副教授，主要從事天然產(chǎn)物化學(xué)方面的研究，E-mail:zhangyhappy@126.com。

周鴻立(1967-)，女，博士，教授，主要從事活性天然產(chǎn)物研究與功能性食品方面的研究，E-mail:zhl67@126.com。

吉林省科技廳科研項(xiàng)目(20150311044YY)；吉林化工學(xué)院博士啟動(dòng)資金(15001)。

TS254.4

B

1002-0306(2016)14-0267-05

10.13386/j.issn1002-0306.2016.14.045