韓艷平，王佑民

代謝正常肥胖人群中K lotho蛋白與氧化應激相關性研究

韓艷平1，王佑民2

目的 探討代謝正常肥胖（MHO）人群中抗衰老蛋白（Klotho蛋白）與氧化應激的相關性。方法 選擇的資料，共180例納入研究，其中正常組60例、MHO組60例、肥胖伴代謝綜合征組60例，記錄測量對象空腹血糖（FBG）、餐后2 h血糖（2 hBG）、三酰甘油（TG）、高密度脂蛋白-膽固醇（HDL-C）、收縮壓、舒張壓、腰圍、身高、體重、體質(zhì)指數(shù)（BMI），ELISA法測定血清丙二醛（MDA）的含量，血清超氧化物歧化酶（SOD）、總抗氧化能力（TAOC）的活性及 Klotho蛋白水平。采用協(xié)方差分析校正其他影響因素比較各組間臨床生化指標、氧化應激水平及Klotho蛋白水平的差異，Pearson相關分析和多元逐步回歸分析了解Klotho蛋白水平與氧化應激的相關性。結(jié)果 與正常組比較，MHO組和肥胖伴代謝綜合征組MDA含量均升高（P＜0.05），TAOC、SOD、Klotho蛋白活性均降低（P＜0.05）。與MHO組比較，肥胖伴代謝綜合征組血清TAOC、Klotho蛋白含量降低（P＜0.05）。經(jīng)相關分析，Klotho蛋白與SOD、TAOC呈正相關性（r=0.654、0.557，P＜0.05），與腰圍、BMI、2 hBG、FBG、收縮壓呈負相關性（r=-0.182、-0.225、-0.221、-0.202、-0.188，P＜0.05），SOD、TAOC是Klotho蛋白的主要影響因素。結(jié)論 MHO人群存氧化-抗氧化紊亂狀態(tài)，Klotho蛋白可能通過調(diào)節(jié)機體的氧化應激維持機體的正常代謝狀態(tài)。

代謝正常肥胖；氧化應激；Klotho蛋白

網(wǎng)絡出版時間：2016-4-19 11：04：48 網(wǎng)絡出版地址：http：//www.cnki.net/kcms/detail/34.1065.R.20160419.1104.030.html

隨著人們對肥胖研究的深入，代謝正常肥胖（metabolically healthy obese，MHO）這一特殊亞群被提出。目前，MHO以肥胖且有高胰島素敏感性為特征，無其他代謝異常［1］。當機體氧化與抗氧化系統(tǒng)失衡，氧自由基過量產(chǎn)生及其代謝產(chǎn)物過量積聚就出現(xiàn)了氧化應激。氧化應激參與了心血管疾病、代謝綜合征（metabolic syndrome，MS）等疾病的病理過程?？顾ダ系鞍祝↘lotho蛋白）基因是一組與衰老有關的基因，可通過調(diào)節(jié)維生素K和鈣、磷代謝，保護心血管系統(tǒng)，影響機體免疫功能，減少氧化應激等多種途徑對動脈硬化、骨質(zhì)疏松等衰老及衰老相關性疾病進行調(diào)節(jié)［2］。該研究旨探討MHO人群的氧化抗氧化狀態(tài)及與 Klotho蛋白的相關性，為MHO人群的防治提供依據(jù)。

1　材料與方法

1.1病例資料 選擇2011年1月～12月在安徽醫(yī)科大學第一附屬醫(yī)院體檢人群資料，共180例納入研究，其中男90例，女90例，年齡35～83（53.61 ±10.22）歲，研究獲得受試者的知情同意。其中正常組60例，MHO組60例，肥胖伴代謝綜合征組60人，各組男女比例1∶1。

1.2入組標準 代謝綜合征診斷標準：按照2007年《中國成人血脂異常防治指南》診斷標準［3］，即有以下3項或3項以上者：①腰圍：男性＞90 cm，女性＞85 cm；②血三酰甘油（triglyceride，TG）≥1.70 mmol/L；③高密度脂蛋白-膽固醇（high density lipoprotein cholesterol，HDL-C）＜1.04 mmol/L；④血壓≥17.29/11.31 kPa；⑤ 空腹血糖（fasting blood glucose，F(xiàn)BG）≥6.1 mmol/L或餐后2小時血糖（2 h blood glucose，2 hBG）≥7.8 mmol/L或有糖尿病史。肥胖伴代謝綜合征組診斷標準：體質(zhì)指數(shù)（body mass index，BMI）≥25.0 kg/m2且合并代謝綜合征。正常組診斷標準：體重正常且未合并代謝指標異常者，即符合以下全部者：①體重正常：18.5 kg/m2≤BMI＜23.0 kg/m2；②腰圍：男性≤90 cm，女性≤85 cm；③既往無高脂血癥病史，未使用任何調(diào)脂藥物，血TG＜1.70 mmol/L；④HDL-C≥1.04 mmol/L；⑤既往無高血壓病病史，未使用任何降壓藥物，血壓＜17.29/11.31 kPa；⑥既往無糖尿病病史，未使用任何降糖藥物，F(xiàn)BG＜6.1 mmol/L，2 hBG＜7.8 mmol/ L。MHO組診斷標準［4-5］：肥胖且未合并代謝指標異常者，即符合以下全部者：①肥胖：BMI≥25.0 kg/m2；②既往無高脂血癥病史，未使用任何調(diào)脂藥物，血TG＜1.70mmol/L；③HDL-C≥1.04 mmol/L；④既往無高血壓病病史，未使用任何降壓藥物，血壓＜17.29/11.31 kPa；⑤既往無糖尿病病史，未使用任何降糖藥物，F(xiàn)BG＜6.1 mmol/L，2 hBG＜7.8 mmol/L。

表1　各組間一般資料及臨床生化指標比較

表1　各組間一般資料及臨床生化指標比較

與正常組比較：**P＜0.01；與MHO組比較：##P＜0.01

指標正常組　MHO組肥胖伴代謝綜合征組　F值11.825 BMI（kg/m2）　21.48±1.45　27.42±2.13**　27.43±2.36**　185.807腰圍（cm）　76.59±5.87　94.21±5.93**　92.91±5.53**##　173.093收縮壓（kPa）　15.05±1.35　15.38±1.36　19.60±2.54**##　114.303舒張壓（kPa）　9.61±1.03　10.15±1.09　10.60±1.51**##　9.796 FBG（mmol/L）　5.07±0.38　5.03±0.40　7.19±2.71**##　36.301 2 hBG（mmol/L）　5.77±1.07　5.66±1.13　10.58±4.33**##　66.564 TG（mmol/L）　0.97±0.26　0.96±0.27　2.71±1.81**##　53.616 HDL-C（mmol/L）　1.32±0.26　1.39±0.28　1.13±0.27**##年齡（歲）　51.57±10.43　50.73±8.86　58.53±9.59**##15.013

1.3排除標準 排除代謝組分資料缺失、乙型肝炎標志物陽性、過量吸煙或飲酒、合并嚴重感染性疾病者，甲狀腺功能亢進癥、甲狀腺功能減退及其他系統(tǒng)疾病，嚴重肝、腎、呼吸道、心臟疾病及惡性腫瘤者。

1.4方法 體檢者一般指標如身高、體重、腰圍、收縮壓、舒張壓分別由體檢中心固定的3名醫(yī)務人員進行檢測，BMI=體重/身高（kg/m2）。血液及生化指標的檢測：測定 TG、HDL-C、FBG、2 hBG，統(tǒng)一由瑞士羅氏公司的MODULP800全自動生化分析儀檢測，由同一組專業(yè)檢驗室操作。血清丙二醛（malondialdehyde，MDA）、超氧化物歧化酶（superoxide dismutase，SOD）、總抗氧化能力（total antioxidation capacity，TAOC）、Klotho蛋白的測定：選用上海源葉生物科技有限公司提供的ELISA試劑盒，采用雙抗體夾心法測定血清MDA、SOD、TAOC、Klotho蛋白水平。

1.5統(tǒng)計學處理 采用SPSS 17.0統(tǒng)計軟件進行分析，計量資料以ˉx±s表示；多樣本均數(shù)比較采用單因素方差分析，采用協(xié)方差分析校正混雜因素的影響。各因素間的相關關系用Pearson相關分析和多元逐步回歸分析。

2　結(jié)果

2.1一般資料及臨床指標比較 3組間年齡比例差異有統(tǒng)計學意義，經(jīng)協(xié)方差分析排除年齡的影響后，進行3組間臨床及生化指標的比較。MHO組BMI、腰圍均明顯高于正常組（P＜0.01），與肥胖伴代謝綜合征組比較差異無統(tǒng)計學意義。收縮壓、舒張壓、FBG、2 hBG、TG、HDL-C在MHO組及正常組差異無統(tǒng)計學意義，與肥胖伴代謝綜合征組差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.01）。見表1。

2.2機體血清氧化應激及抗氧化酶水平及K lotho蛋白水平 與正常組比較，MHO組MDA含量升高（P＜0.05），TAOC、SOD、Klotho蛋白活性降低（P＜0.05），肥胖伴代謝綜合征組MDA升高（P＜0.01），TAOC、SOD、Klotho蛋白降低（P＜0.05，P＜0.01）。與MHO組比較，肥胖伴代謝綜合征組TAOC、Klotho蛋白活性降低（P＜0.05），MDA、SOD在兩組間差異無統(tǒng)計學意義。見表2。

表2　各組血清MDA、SOD、TAOC、K lotho蛋白水平比較

表2　各組血清MDA、SOD、TAOC、K lotho蛋白水平比較

與正常組比較：*P＜0.05，**P＜0.01；與MHO組比較：#P＜0.05

指標正常組　MHO組肥胖伴代謝綜合征組　F值MDA（pg/ml）　2.30±1.22　2.99±1.73*　3.26±1.27**7.309 SOD（mU/L）　86.25±26.00 77.36±23.71*71.77±21.08*　5.709 TAOC（U/ml）　4.45±1.66　4.08±1.74*　3.23±1.60**#　8.398 Klotho（U/L）　50.49±14.97 46.75±16.66*39.08±15.72**#8.135

2.3Pearson相關分析 血清Klotho蛋白與SOD、TAOC呈正相關性（r=0.654、0.557，P＜0.05），與腰圍、BMI、2 hBG、FBG、收縮壓呈負相關性（r=-0.182、-0.225、-0.221、-0.202、-0.188，P＜0. 05），MDA與BMI、腰圍、TG、收縮壓呈正相關性（r= 0.223、0.261、0.194、0.170，P＜0.05）。SOD與TAOC成正相關性（r=0.586，P＜0.05），與腰圍、BMI、2 hBG、收縮壓呈負相關性（r=-0.191、-0.200、-0.158、-0.175，P＜0.05）。TAOC與2 hBG、FBG、收縮壓呈負相關性（r=-0.252、-0.182、-0.243，P＜0.05）。

2.4多元逐步回歸分析 運用多元逐步回歸分析，對性別、年齡、腰圍、BMI、2 hBG、FBG、收縮壓、舒張壓、TG、HDL-C和血清Klotho蛋白、MDA、SOD、TAOC進行分析，見表3～6。

表3　K lotho蛋白與各因素的多元逐步回歸分析

表4　MDA與各因素的多元逐步回歸分析

表5　SOD與各因素的多元逐步回歸分析

表6　TAOC與各因素的多元逐步回歸分析

3　討論

肥胖已成為威脅人類健康的世界性公共衛(wèi)生問題。MHO這一特殊肥胖亞群逐漸引起人們的關注，MHO個體肥胖但代謝指標處于正常范圍，是否有特殊的保護機制能長期處于代謝正常狀態(tài)，還是肥胖早期尚未發(fā)展到代謝異常狀態(tài)與其體內(nèi)的氧化應激狀態(tài)密切相關。近年來，研究［6］提示 Klotho蛋白有抗氧化的作用，那么，探討代謝正常肥胖人群中氧化應激的狀態(tài)及與Klotho蛋白的相關性對于MHO亞群的發(fā)生代謝異常風險的預測及其治療有重大意義。

Hwang et al［7］發(fā)現(xiàn)中國臺灣MHO個體較正常人有較高的糖尿病及高血壓的發(fā)生風險，MHO并不是無害的健康狀態(tài)。但是 Karelis et al［8］發(fā)現(xiàn)MHO有較高的胰島素敏感性，在炎癥因子譜、體脂分布、發(fā)生心血管疾病的風險及減重療效上均與代謝異常的“高?！狈逝置黠@不同。本研究結(jié)果顯示MHO組收縮壓、舒張壓、FBG、2 hBG、TG、HDL-C與正常組差異無統(tǒng)計學意義，與肥胖伴代謝綜合征組差異有統(tǒng)計學意義。

研究［9］顯示肥胖與氧化應激之間存在明顯的正相關性，肥胖可能通過多種途徑介導氧化應激。在本研究中，與正常組比較，MHO組MDA明顯升高，SOD、TAOC明顯降低，雖然MHO組與肥胖伴代謝綜合征組MDA、SOD差異無統(tǒng)計學意義，但肥胖伴代謝綜合征組總體抗氧化能力還是降低的，說明MHO雖然血糖、血壓、血脂處于正常范圍，但可能是介于正常體重正常代謝與MS之間的狀態(tài)，屬于肥胖早期，尚未出現(xiàn)代謝異常狀態(tài)，已經(jīng)處于氧化抗氧化系統(tǒng)失衡狀態(tài)。Pearson相關分析表明MDA與BMI、腰圍、TG、收縮壓呈正相關性，SOD與BMI、腰圍呈負相關性；多元回歸分析顯示腰圍、TG是MDA的危險因素，所以對于MHO患者，及時的減重至關重要，可能有助于機體保持正常代謝狀態(tài)。研究［10-11］提示MHO人群氧化應激水平較正常人群高，抗氧化水平較正常人群降低，與本研究結(jié)論一致。而Brown et al［12］發(fā)現(xiàn)MHO人群與正常人群比較，脂質(zhì)過氧化物水平升高，SOD差異無統(tǒng)計學意義，可能與研究對象處于不同的肥胖水平及個體差異有關。

Klotho基因主要在腎臟和腦組織中表達，可通過多種途徑發(fā)揮抗氧化作用，如促進多種抗氧化基因如過氧化氫酶、SOD等的表達，進而發(fā)揮抗氧化的作用［6］。Klotho蛋白有抗氧化的作用的同時，氧化應激也可通過多種途徑下調(diào)Klotho基因的表達。研究［13-14］表明，Klotho蛋白在糖尿病、高血壓、腎臟病等疾病中含量明顯降低，而氧化應激在這些疾病的發(fā)生發(fā)展中起著重要的作用。Amitani et al［15］發(fā)現(xiàn)Klotho蛋白在肥胖人群中較正常人群中減低。本資料顯示，與正常組比較，Klotho蛋白在MHO組及肥胖伴代謝綜合征組明顯降低，且與腰圍、BMI、2 hBG、FBG、收縮壓呈負相關性，與上述研究結(jié)論一致。隨著氧化應激程度的加重及機體抗氧化能力的減弱，Klotho蛋白的水平逐漸降低，可能與氧化應激水平的升高抑制Klotho基因的表達有關。

綜上所述，代謝正常肥胖人群存在氧化抗氧化紊亂狀態(tài)，對于肥胖人群來說，減重對預防和治療代謝異常性疾病有著重要意義。Klotho蛋白可能通過調(diào)節(jié)機體的氧化應激維持機體的正常代謝狀態(tài)，隨著人們對Klotho蛋白研究的不斷深入，Klotho蛋白有望成為治療及預防肥胖及代謝異常疾病的新靶點。

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Association between serum K lotho and oxidative stress in metabolically healthy obese individuals

Han Yanping1，Wang Youmin2
（1The Second Clinical Medical College of Anhui Medical University，Hefei 230032；2Dept of Endocrinology，The First Affiliated Hospital of AnhuiMedical University，Hefei 230022）

Objective To investigate the association between serum Klotho and oxidative stress in metabolically healthy obese individuals.Methods 180 physicalexamination subjectswere investigated.They were devided into 3 groups：60 cases of normal weight and metabolic normality，60 cases ofmetabolically healthy but obese（MHO），60 cases of obesity with metabolic syndrome.Fasting blood glucose（FBG），2 h blood glucose（2 hBG），triglyceride（TG），high densitylipoprotein cholesterol（HDL-C），systolic blood pressure，diastolic blood pressure，body height，body weight，waist circumference，bodymass index（BMI）were recorded.Malondialdehyde（MDA），superoxide dismutase（SOD），total antioxidation capacity（TAOC），Klotho were detected by ELISA.The difference of clinical parameters，metabolic parameters，oxidative stress and Klotho among these three groups was compared by themethods of covariance analysis.Regression analysis and pearson correlation were used to evaluate the relationship of Klotho with oxidative stress.Results Compared with the control group，TAOC，SOD，Klothowere decreased significantly while MDA elevated significantly in both MHO group and obesity withmetabolic syndrome group（P＜0.05）.Compared with MHO group，TAOC，Klotho were significantly lower in obesity with metabolic syndrome（P＜0.05）. Klotho protein was significantly positively associated with SOD，TAOC，negatively associated with waist circumference，BMI，F(xiàn)BG，2 hBG（r=-0.182，-0.225，-0.221，-0.202，-0.188，P＜0.05）.SOD，TAOC were determinants for Klotho.Conclusion The balancebetween oxidative and antioxidative system is disturbed in subjects with MHO.Klotho protein maymaintain the normalmetabolism of thebody by regulating the oxidative stress.

metabolically healthy obese；oxidative stress；Klotho protein

R 589.2

A

1000-1492（2016）05-0678-04

2016-03-04接收

安徽省科技攻關項目（編號：1206c0805034）

1安徽醫(yī)科大學第二臨床學院，合肥 230032

2安徽醫(yī)科大學第一附屬醫(yī)院內(nèi)分泌科、安徽省內(nèi)分泌代謝病省級實驗室，合肥 230022

韓艷平，女，碩士研究生；

王佑民，男，教授，主任醫(yī)師，博士生導師，責任作者，E-mail：youminwang@21cn.com