盧曄芬，黃躍金，黃慧芬，曾婷婷，程偉進(jìn)，余琳玲，陳建軍，饒 杰

遲發(fā)型放射性腦病患者外周血CD4＋CD28－T細(xì)胞的變化

盧曄芬，黃躍金，黃慧芬，曾婷婷，程偉進(jìn)，余琳玲，陳建軍，饒 杰

目的 探討遲發(fā)型放射性腦?。≧EP）患者外周血CD4＋CD28－T細(xì)胞亞群的變化及意義。方法 選擇遲發(fā)型REP患者45例（遲發(fā)型REP組），另選取因腦瘤及鼻咽癌接受放射治療患者45例（放射對照組）及未接受放射治療正常對照45例（正常對照組）。均采用流式細(xì)胞儀檢測外周血CD4＋CD28－T細(xì)胞占CD4 T細(xì)胞比例。結(jié)果 遲發(fā)型REP組CD4＋CD28－T/CD4T細(xì)胞比例明顯高于放射對照組及正常對照組（均＜0.05），放射對照組與正常對照組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（＜0.05）。結(jié)論 遲發(fā)型REP患者外周血CD4＋CD28－T細(xì)胞升高，可能在遲發(fā)型REP發(fā)生、發(fā)展中起重要作用。調(diào)節(jié)T淋巴細(xì)胞亞群可能是遲發(fā)型REP潛在治療靶點(diǎn)。

遲發(fā)型放射性腦??；T淋巴細(xì)胞亞群；抗原，CD4；抗原，CD28

惡性腫瘤是當(dāng)前威脅我國居民健康的主要疾病之一。近年來，隨著放射治療技術(shù)的進(jìn)步，腫瘤控制率增高，患者生存時間延長，但遲發(fā)型放射性腦?。≧EP）發(fā)生率逐年增多。遲發(fā)型REP癥狀往往較重，治療困難，嚴(yán)重影響患者生存質(zhì)量，甚至導(dǎo)致死亡，已引起臨床醫(yī)生的廣泛重視。隨著對其研究機(jī)制的不斷深入，免疫炎癥機(jī)制在其病理損害中的作用逐漸受到人們的關(guān)注和認(rèn)可[1]。既往研究表明，CD4＋CD28－T細(xì)胞是一種促炎性反應(yīng)細(xì)胞。本研究通過觀察遲發(fā)型REP患者外周血CD4＋CD28－T細(xì)胞亞群表達(dá)情況，為免疫炎性反應(yīng)廣泛參與遲發(fā)REP的發(fā)生、發(fā)展提供了一定的理論依據(jù)?，F(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2011年6月至2015年6月在溫州醫(yī)科大學(xué)附屬第五醫(yī)院收治的遲發(fā)型REP患者45例（遲發(fā)型REP組），均經(jīng)顱腦CT、MRI或PET檢查證實(shí)，診斷參考郭韜等[2]提出的標(biāo)準(zhǔn)：（1）有頭頸部放射治療史，放射耐受量（TD）≥50 GY；（2）放療6個月后發(fā)生，放射性腦壞死及嚴(yán)重的神經(jīng)功能障礙，表現(xiàn)為定向力障礙，進(jìn)行性認(rèn)知功能障礙，甚至出現(xiàn)癡呆、癲癇發(fā)作、人格改變及精神異常等，腦功能區(qū)損傷可造成相應(yīng)的神經(jīng)功能缺失，如偏癱、失語及失認(rèn)等；（3）影像學(xué)檢查顯示病變部位與照射野的范圍基本一致，病灶主要分布在顳葉、腦干及小腦；（4）有典型的影像學(xué)表現(xiàn)；（5）除外新生腫瘤或腫瘤復(fù)發(fā)。所有研究對象近期內(nèi)未應(yīng)用免疫調(diào)節(jié)劑，并排除炎癥、自身免疫性疾病。每例患者均簽知情同意書。其中男25例，女20例；平均年齡（47.62±12.75）歲。另選同期因腦瘤及鼻咽癌接受放射治療患者45例（放射對照組）及未接受放射治療正常對照45例（正常對照組）。放射對照組男23例，女22例；平均年齡（49.78±13.83）歲。正常對照組男20例，女25例；平均年齡（52.24±10.29）歲。3組性別、年齡差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均＞0.05）。

1.2 主要試劑和設(shè)備 熒光素偶聯(lián)抗體：CD3-硫氰酸熒光素（FITC）抗體，CD-ALEXA700抗體，MS IgG1 APC，CD28-藻紅蛋白（PE）抗體，MS IgG 1 PE，紅細(xì)胞裂解液（BD公司）；流式細(xì)胞儀：FACS CantoII。

1.3 標(biāo)本的采集和檢測 受試者采集空腹肘靜脈血12ml，其中10 ml全血樣本進(jìn)行常規(guī)檢查；另2 ml全血樣本采用乙二胺四乙酸（EDTA）抗凝備檢。流式細(xì)胞儀四色熒光標(biāo)記技術(shù)檢測外周血CD4＋CD28－T細(xì)胞占CD4 T細(xì)胞比例。每例受試者標(biāo)本取 2份新鮮全血100 l分別加入流式管，標(biāo)記為實(shí)驗(yàn)管和對照管。實(shí)驗(yàn)管和對照管均加入 20 l CD3-FITC抗體，5 lCD4-ALEXA700抗體；實(shí)驗(yàn)管再加入20l CD28-PE抗體；對照管則加入20 lCD28同型對照抗體；混勻、室溫避光孵育30 min，加入紅細(xì)胞裂解液1 ml，混勻室溫避光15 min，PBS洗滌離心2次，去上清后加入磷酸鹽緩沖液（PBS）300l，混勻后用流式細(xì)胞儀檢測。以對照管設(shè)門圈定CD4＋CD28－T細(xì)胞，測定其占CD4T細(xì)胞比例。

1.4 統(tǒng)計(jì)方法 采用SPSS 16.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行分析，計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，多組比較采用方差分析，兩組比較采用 檢驗(yàn)。＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

3組CD4＋CD28－T/CD4T比例差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（=26.56，＜0.05）。遲發(fā)型REP組CD4＋CD28－T/CD4T比例明顯高于正常對照組及接受放射治療組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（=6.13、4.76，均＜0.05）。放射對照組 CD4＋CD28－T細(xì)胞/CD4T細(xì)胞比例與正常對照組相比，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（=2.17，＜0.05）。見表1。

表1 各組外周血CD4＋CD28－T細(xì)胞/CD4T比例 %

3 討論

遲發(fā)型REP患者存在免疫系統(tǒng)的異常。研究發(fā)現(xiàn)，T細(xì)胞參與機(jī)體體液免疫和細(xì)胞免疫的調(diào)節(jié)。并且T細(xì)胞亞群的相對比例可能與患者的免疫功能狀態(tài)和病情進(jìn)展密切相關(guān)[3]。既往研究表明，CD4＋CD28－T細(xì)胞亞群數(shù)量增多與多種自身免疫性和慢性炎癥疾病相關(guān)。近年來，在類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、自身免疫性血管炎、動脈粥樣硬化、腦梗死及不穩(wěn)定心絞痛患者中，發(fā)現(xiàn)CD4＋CD28－T細(xì)胞顯著升高，引起了人們的極大關(guān)注。CD4＋CD28－T細(xì)胞是一群高度促炎的T細(xì)胞亞群，與一般輔助T細(xì)胞不同，CD4＋CD28－T細(xì)胞的激活不需要B7/CD28協(xié)同刺激信號，該T細(xì)胞亞群CD28表達(dá)缺失，不但沒有表現(xiàn)出細(xì)胞免疫功能的抑制，反而具有細(xì)胞毒性效應(yīng)，能產(chǎn)生穿孔素且大量分泌干擾素-r、白介素-2，進(jìn)而激活巨噬細(xì)胞。同時，由于CD4＋CD28－T細(xì)胞缺乏細(xì)胞毒T淋巴細(xì)胞相關(guān)抗原-4分子的表達(dá)，對凋亡具有抵抗作用，因此，能夠大量擴(kuò)增，長期存活，導(dǎo)致?lián)p傷組織慢性炎癥反應(yīng)。慢性炎癥時，CD28表達(dá)缺失，CD4＋CD28－T細(xì)胞數(shù)量明顯增多，從而使機(jī)體表現(xiàn)為以Th1細(xì)胞因子為主的免疫反應(yīng)[4]。

本研究發(fā)現(xiàn)，遲發(fā)型REP外周血中CD4＋CD28－T細(xì)胞表達(dá)明顯高于正常對照組及放射對照組，而放射對照組與正常對照組差異也有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。這提示 CD4＋CD28－T細(xì)胞介導(dǎo)的免疫失衡可能參與遲發(fā)型REP的發(fā)生、發(fā)展。本研究因受病例數(shù)少、時間等因素限制，未再進(jìn)一步進(jìn)行亞組分析。血脂、激素使用、頸動脈內(nèi)膜增生程度等對遲發(fā)型REP患者外周血T細(xì)胞亞群的影響有待深入研究。

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10.3969/j.issn.1671-0800.2016.06.052

R742

A

1671-0800(2016)06-0794-02

2015-08-10

（本文編輯：孫海兒）

麗水市科技局（麗水市醫(yī)學(xué)重點(diǎn)學(xué)科項(xiàng)目）、麗水市科技計(jì)劃項(xiàng)目（2012JYZB18）、浙江省醫(yī)藥衛(wèi)生科技計(jì)劃（2015120636）

323000浙江省麗水，溫州醫(yī)科大學(xué)附屬第五醫(yī)院

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