郭可盈,曾蘇婷,范偉,曹思源,王瑩,陸錦標(biāo),王東林
臨床研究
骨橋蛋白、caspase-3及突變型P53在膠質(zhì)瘤中的表達(dá)研究
郭可盈,曾蘇婷,范偉,曹思源,王瑩,陸錦標(biāo),王東林△
目的 研究膠質(zhì)瘤中骨橋蛋白(OPN)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(caspase-3)和突變型P53(mt-P53)蛋白的表達(dá)意義和相關(guān)性。方法 選取腦膠質(zhì)瘤(膠質(zhì)瘤組)患者的標(biāo)本70例,非腦膠質(zhì)瘤腦組織10例作為對照組。應(yīng)用免疫組織化學(xué)SP法檢測2組OPN、caspase-3及mt-P53蛋白的陽性表達(dá)率。蛋白免疫印跡法檢測腦膠質(zhì)瘤中OPN、caspase-3和mt-P53蛋白表達(dá)與腦膠質(zhì)瘤級別的關(guān)系。Spearman等級相關(guān)分析OPN、caspase-3和mt-P53表達(dá)陽性的關(guān)系。結(jié)果 腦膠質(zhì)瘤組OPN、mt-P53陽性表達(dá)率(64.29%和60%)均高于對照組(無陽性表達(dá)),caspase-3陽性率低于對照組(47.14%vs.90%),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P<0.05)。OPN、caspase-3和mt-P53在腦膠質(zhì)瘤不同性別、年齡、腫瘤大小及腫瘤部位組間的陽性表達(dá)率差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。膠質(zhì)瘤分級越高,OPN和mt-P53的陽性表達(dá)率越高,而caspase-3的陽性表達(dá)率越低(均P<0.001)。隨著腦膠質(zhì)瘤級別的增加,OPN和mt-P53蛋白表達(dá)水平上調(diào),而caspase-3的蛋白表達(dá)水平下降。OPN與caspase-3陽性表達(dá)呈負(fù)相關(guān),與mt-P53表達(dá)呈正相關(guān)(rs分別為-0.720和0.722,P<0.05),caspase-3和mt-P53表達(dá)呈負(fù)相關(guān)(rs=-0.556,P<0.05)。結(jié)論 膠質(zhì)瘤分級越高,OPN和mt-P53的陽性表達(dá)率越高,而caspase-3的陽性表達(dá)率越低;三者與膠質(zhì)瘤發(fā)生、發(fā)展均密切相關(guān),聯(lián)合檢測有助于對膠質(zhì)瘤生物學(xué)行為的判斷。
神經(jīng)膠質(zhì)瘤;骨橋蛋白質(zhì);半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3;基因,p53
腦膠質(zhì)瘤(glioma)是中樞神經(jīng)系統(tǒng)最常見的原發(fā)腫瘤,約占顱內(nèi)腫瘤的50%,其發(fā)生是多因素、多基因和多階段共同參與的結(jié)果[1]。骨橋蛋白(osteopontin,OPN)是細(xì)胞外基質(zhì)中一種重要的多功能分泌性蛋白,與腫瘤細(xì)胞的黏附、侵襲及轉(zhuǎn)移有關(guān)[2]。半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶(caspase)-3是細(xì)胞凋亡過程的關(guān)鍵效應(yīng)蛋白酶,在腫瘤細(xì)胞生長、凋亡和分化等過程中發(fā)揮重要作用[3]。突變型P53 (mutant type P53,mt-P53)可以直接引起細(xì)胞周期的紊亂,使相關(guān)基因處于不穩(wěn)定狀態(tài),促進(jìn)腫瘤的發(fā)生[4]。有研究發(fā)現(xiàn),OPN的C-末端裂解片段可使mt-P53轉(zhuǎn)錄活性和蛋白表達(dá)水平增強(qiáng),導(dǎo)致細(xì)胞的異常增殖[5];OPN的高表達(dá)可能會下調(diào)caspase-3的表達(dá),使之失去水解蛋白酶的活性,導(dǎo)致細(xì)胞凋亡或抑制[6]。有關(guān)OPN、caspase-3和mt-P53與腫瘤的關(guān)系已有一些報(bào)道,但同時(shí)檢測三者在腦膠質(zhì)瘤中的表達(dá)及相關(guān)性的研究少見。本研究旨在探討OPN、caspase-3和mt-P53在人腦膠質(zhì)瘤中的表達(dá)情況及可能作用,以期為腦膠質(zhì)瘤的靶向治療提供參考。
1.1 一般資料 (1)標(biāo)本。選取2006年12月—2009年12月于南通大學(xué)附屬醫(yī)院神經(jīng)外科行手術(shù)切除和病理確診的腦膠質(zhì)瘤(腦膠質(zhì)瘤組)患者的標(biāo)本70例,男38例,女32例,年齡7~74歲,中位年齡47.9歲,均有完整的臨床資料。按WHO 2007年神經(jīng)系統(tǒng)腫瘤病理學(xué)和遺傳學(xué)分級標(biāo)準(zhǔn)對所有腫瘤進(jìn)行組織學(xué)分級,Ⅱ級(彌漫性腦膠質(zhì)瘤)30例、Ⅲ級(間變性腦膠質(zhì)瘤)18例、Ⅳ級(多形性膠質(zhì)母細(xì)胞瘤)22例。另采用同期10例非腦膠質(zhì)瘤腦組織作為對照組,男5例,女5例,年齡8~74歲,中位年齡48.1歲,均來自南通大學(xué)附屬醫(yī)院神經(jīng)外科行腦外傷內(nèi)減壓術(shù)者。腦組織均于-80℃冰箱凍存。(2)主要試劑。APES濃縮液、抗體稀釋液購自北京中山生物技術(shù)有限公司;山羊血清購自上海華美生物工程公司;牛血清白蛋白(BSA)購自Sigma公司;兔抗人OPN多克隆抗體(sc-3044)、兔抗人caspase-3多克隆抗體(sc-7148)、兔抗人mt-P53單克隆抗體(sc-6143)、鼠抗人β-actin單克隆抗體(sc-47778)均購自Santa Cruz公司。
1.2 方法
1.2.1 免疫組織化學(xué)SP法檢測OPN、caspase-3及mt-P53蛋白的表達(dá) 所取組織均經(jīng)4%多聚甲醛固定,石蠟包埋,5 μm連續(xù)切片,貼于APES處理過的載玻片上;脫蠟、水化組織切片;抗原修復(fù):高壓鍋內(nèi)加適量的水置電爐上煮沸,將切片浸入裝有0.01 mol/L檸檬酸緩沖液(pH 6.0)的燒杯中,高壓鍋內(nèi)加熱至噴氣,維持3 min。取出切片使其自然冷卻至室溫,0.01 mol/L PBS沖洗3 min×3次。3%H2O2去離子水室溫下孵育10 min,以阻斷內(nèi)源性過氧化物酶的活性,0.01 mol/L PBS沖洗3 min×3次;甩去切片上的PBS,滴加一抗,各抗體稀釋度分別為OPN(1∶200),caspase-3(1∶50)及mt-P53(1∶100),室溫孵育1 h后4℃過夜。0.01 mol/L PBS沖洗3 min×3次;滴加試劑Polymer Helper:擦去多余水分,滴加試劑Polymer Helper,37℃孵育20 min。0.01 mol/L PBS沖洗3 min×3次;滴加HRP標(biāo)記的二抗;DAB顯色;蘇木素復(fù)染細(xì)胞核;乙醇梯度脫水;中性樹脂封片。以PBS代替一抗作為陰性對照,以已知陽性切片為陽性對照。
1.2.2 蛋白免疫印跡法檢測腦膠質(zhì)瘤中OPN、caspase-3和mt-P53蛋白表達(dá)與腦膠質(zhì)瘤級別的關(guān)系 從70例腦膠質(zhì)瘤標(biāo)本中抽取20例用于蛋白免疫印跡實(shí)驗(yàn)。將標(biāo)本從-80℃冰箱取出后放入冰水混合物中復(fù)溫30 min;稱質(zhì)量,放入離心管,按1 mL/100 mg加入蛋白裂解液;在冰浴的基礎(chǔ)上勻漿、打碎、離心,采用紫外分光光度儀測定上清液蛋白質(zhì)的含量,-80℃保存?zhèn)溆?。進(jìn)行SDS-PAGE凝膠電泳;將蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)移到PVDF膜;室溫條件下將取出的轉(zhuǎn)印膜置入含5%脫脂奶粉的TBST的封閉液中2 h;室溫1 h,4℃過夜的條件下用5%脫脂奶粉的TBST稀釋的一抗孵育轉(zhuǎn)印膜(各抗體稀釋度分別為OPN 1∶500,caspase-3 1∶500及mt-P53 1∶1 000);二抗(HRP偶聯(lián),1∶2 000)室溫孵育2 h;同體積混合Luminol Ecl Reagent A和B液,加入膜上,并于室溫1 min孵育;在暗室內(nèi)顯影和定影。以β-actin為內(nèi)參照。
1.2.3 結(jié)果判斷 OPN和caspase-3表達(dá)陽性為細(xì)胞質(zhì)內(nèi)出現(xiàn)棕黃色或棕褐色顆粒;mt-P53表達(dá)陽性為細(xì)胞核內(nèi)出現(xiàn)黃至棕褐色顆粒。在高倍(×400)視野下隨機(jī)讀取10個(gè)代表性腫瘤區(qū)域,避開出血壞死區(qū)域,參照Remmele等[7]提出的免疫反應(yīng)積分法(IRS)判斷OPN、caspase-3和mt-P53免疫組化結(jié)果。(1)陽性細(xì)胞所占百分比(PP):無陽性細(xì)胞0分;陽性細(xì)胞<10%1分;10%~50%2分;>50%~<75%3分;≥75%4分。(2)陽性染色強(qiáng)度(SI):無染色0分,淡黃色1分,棕黃色2分,棕褐色3分。(3)IRS=PP×SI,IRS計(jì)0分為陰性表達(dá)“-”;計(jì)1~4分為“+”;計(jì)5~8分為“++”;計(jì)9~12分為“+++”?!?~+++”為陽性表達(dá)。
1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS 16.0軟件對數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)處理。計(jì)數(shù)資料以例(%)表示,組間比較采用χ2檢驗(yàn)。計(jì)量資料如滿足參數(shù)檢驗(yàn)的要求,2組比較用t檢驗(yàn),多組比較用方差分析;如不滿足參數(shù)檢驗(yàn)的要求,則采用秩和檢驗(yàn);OPN、caspase-3和mt-P53三者間陽性表達(dá)的關(guān)系采用分類變量的關(guān)聯(lián)性分析。檢驗(yàn)水準(zhǔn)α=0.05。
2.1 腦膠質(zhì)瘤組織中OPN、caspase-3和mt-P53的表達(dá) 腦膠質(zhì)瘤組OPN陽性表達(dá)率64.29%(45/70)高于對照組(0/10);caspase-3陽性表達(dá)率47.14% (33/70)低于對照組90%(9/10);mt-P53陽性表達(dá)率60%(42/70)高于對照組(0/10;χ2分別為42.003、37.638及32.127,均P<0.001),見圖1。
2.2 腦膠質(zhì)瘤中OPN、caspase-3、mt-P53與臨床病理學(xué)指標(biāo)的關(guān)系 OPN、caspase-3和mt-P53在不同性別、年齡、腫瘤大小及腫瘤部位組間的陽性表達(dá)率差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。膠質(zhì)瘤分級越高,OPN和mt-P53的陽性表達(dá)率越高,而caspase-3的陽性表達(dá)率越低(均P<0.001),見表1。
Fig.1 The positive expressions of OPN,caspase-3 and mt-P53 in gliomas tissue(SP,×400)圖1 腦膠質(zhì)瘤組織OPN、caspase-3和mt-P53的陽性表達(dá)結(jié)果(SP,×400)
Tab.1 The expressions of OPN,caspase-3 and mt-P53 in patients with different clinical and pathological features表1 OPN、caspase-3和mt-P53在不同臨床病理特征中的表達(dá)情況比較 例(%)
2.3 腦膠質(zhì)瘤中OPN、caspase-3和mt-P53蛋白表達(dá)水平與腦膠質(zhì)瘤級別的關(guān)系 隨著腦膠質(zhì)瘤級別的增加,OPN和mt-P53蛋白表達(dá)水平上調(diào),而caspase-3的蛋白表達(dá)水平下降,見圖2、表2。
Fig.2 The protein expressions of OPN,caspase-3 and mt-P53 in gliomas of gradesⅡ,ⅢandⅣ圖2 Ⅱ~Ⅳ級腦膠質(zhì)瘤中OPN、caspase-3和mt-P53蛋白水平的表達(dá)
Tab.2 The protein expressions of OPN,caspase-3 and mt-P53 in gliomas of gradesⅡ,ⅢandⅣ表2 OPN、caspase-3和mt-P53在Ⅱ~Ⅳ級腦膠質(zhì)瘤中的蛋白表達(dá)情況 (±s)
Tab.2 The protein expressions of OPN,caspase-3 and mt-P53 in gliomas of gradesⅡ,ⅢandⅣ表2 OPN、caspase-3和mt-P53在Ⅱ~Ⅳ級腦膠質(zhì)瘤中的蛋白表達(dá)情況 (±s)
**P<0.01;a與Ⅱ,b與III比較,P<0.05
腫瘤分級Ⅱ級Ⅲ級Ⅳ級F n 30 18 22 OPN 4.114±0.291 6.094±0.454a7.707±0.285ab206.913**mt-P53 3.681±0.304 5.535±0.159a6.945±0.227ab761.906**caspase-3 7.833±0.369 7.153±0.202a3.031±0.224ab990.804**
2.4 OPN、caspase-3和mt-P53在腦膠質(zhì)瘤中陽性表達(dá)的相關(guān)性 OPN與caspase-3陽性表達(dá)呈負(fù)相關(guān),與mt-P53表達(dá)呈正相關(guān);caspase-3和mt-P53表達(dá)呈負(fù)相關(guān)(均P<0.05),見表3。
Tab.3 The positive expression rates of OPN,caspase-3 and mt-P53 in gliomas表3 腦膠質(zhì)瘤中OPN、caspase-3和mt-P53的陽性表達(dá)的關(guān)系
腦膠質(zhì)瘤是中樞神經(jīng)系統(tǒng)最常見的惡性腫瘤,多呈侵襲性生長,對腦組織有彌漫性的浸潤破壞作用;周圍組織受腫瘤的壓迫水腫,可產(chǎn)生明顯局部癥狀,造成神經(jīng)功能缺失;與周圍正常組織無明顯分界,導(dǎo)致手術(shù)時(shí)無法將腫瘤組織全切。
3.1 OPN與腦膠質(zhì)瘤的關(guān)系 人OPN基因是一個(gè)獨(dú)立編碼基因,位于染色體4q13,長8 kb,由7個(gè)外顯子和6個(gè)內(nèi)含子構(gòu)成。研究認(rèn)為,OPN在多種實(shí)體腫瘤如食管癌、肝癌、胃癌、結(jié)腸癌、肺癌、膀胱癌、卵巢癌等組織中表達(dá)普遍增高,與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展有關(guān)[8]。Jan等[9]研究顯示,OPN主要定位于神經(jīng)膠質(zhì)纖維酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein,GFAP)表達(dá)陽性的細(xì)胞,可通過調(diào)節(jié)維護(hù)腦組織細(xì)胞穩(wěn)定性的波形蛋白和GFAP的表達(dá),促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的增殖和侵襲;同時(shí),OPN表達(dá)水平與基質(zhì)金屬蛋白酶(MMP)-2、MMP-9的表達(dá)呈正相關(guān),OPN通過激活MMP-2、MMP-9等蛋白酶來降解細(xì)胞外基質(zhì)、促進(jìn)腫瘤血管生成,參與腫瘤生長、黏附和侵襲。Wang等[10]研究發(fā)現(xiàn),OPN在肺癌中較正常肺組織表達(dá)升高,通過RNA干擾技術(shù)下調(diào)OPN的表達(dá)后可以降低體內(nèi)、外腫瘤細(xì)胞的侵襲和轉(zhuǎn)移。Lu等[11]研究發(fā)現(xiàn),在腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞中OPN可以通過上調(diào)heme oxygenase-1基因的表達(dá),促進(jìn)細(xì)胞的遷移和侵襲。本研究結(jié)果顯示,非腦膠質(zhì)瘤組織不表達(dá)OPN,而腦膠質(zhì)瘤中OPN陽性表達(dá)率為64.29%,提示OPN可能參與了腦膠質(zhì)瘤的發(fā)生,與上述研究結(jié)果一致。同時(shí),本研究結(jié)果還顯示,隨著病理組織學(xué)分級增高腦膠質(zhì)瘤組織中OPN表達(dá)升高,Jin等[12]研究認(rèn)為OPN可能通過其氨基端(N-端)、整合素受體ανβ3結(jié)合激活黏著斑激酶(focal adhesion kinase,F(xiàn)AK)、磷脂酰肌醇-3-激酶(phosphatidylinositol-3-kinase,PI3K)和細(xì)胞核因子-κB等信號途徑,加速細(xì)胞增殖,促進(jìn)細(xì)胞外基質(zhì)降解和侵襲性生長。
3.2 caspase-3與腦膠質(zhì)瘤的關(guān)系 細(xì)胞凋亡異常在多種惡性腫瘤的發(fā)生、發(fā)展中起重要作用,caspase-3在凋亡過程中起樞紐作用,是介導(dǎo)細(xì)胞凋亡的關(guān)鍵執(zhí)行因子[13]。Ma等[14]研究發(fā)現(xiàn),caspase-3在乳頭狀瘤、導(dǎo)管內(nèi)癌和浸潤性導(dǎo)管癌等不同類型乳腺腫瘤中的表達(dá)逐漸減弱,其陽性表達(dá)與乳腺浸潤性導(dǎo)管癌病理分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、組織病理學(xué)分級有關(guān),與患者年齡、腫瘤大小無關(guān)。Bellini等[15]研究也發(fā)現(xiàn),正常食管黏膜、慢性食管炎、不典型增生和食管癌中caspase-3的表達(dá)水平逐漸下調(diào)。另有研究顯示,與正常組織相比,卵巢上皮性腫瘤、口腔鱗狀細(xì)胞癌、胃癌、結(jié)腸癌、胰腺癌、肝癌等腫瘤組織中caspase-3表達(dá)降低[16]。本研究結(jié)果顯示,腦膠質(zhì)瘤腦組織中caspase-3陽性表達(dá)率低于非腦膠質(zhì)瘤組織,且隨著腦膠質(zhì)瘤分級增高caspase-3表達(dá)降低,此結(jié)果與上述報(bào)道一致,表明caspase-3低表達(dá)與腦膠質(zhì)瘤的發(fā)生及侵襲有關(guān)。
3.3 P53與腦膠質(zhì)瘤的關(guān)系 P53基因分野生型P53基因(wt-P53)和mt-P53,wt-P53是抑癌基因,mt-P53則失去了抑制腫瘤的作用,可使基因組處于不穩(wěn)定狀態(tài),被激活后許多下游靶基因會出現(xiàn)表達(dá)水平改變[17]。蘇曉路等[18]研究發(fā)現(xiàn),mt-P53在大腸癌組織中的陽性表達(dá)率(57%)高于癌旁組織(20%)和正常大腸組織(0),mt-P53在腫瘤細(xì)胞的陽性表達(dá)率與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和Duke’s分期有關(guān)。Walerych等[19]研究認(rèn)為,mt-P53在乳腺癌的發(fā)生、發(fā)展中起致癌因子的作用。Vaughan等[20]研究發(fā)現(xiàn),70%的肺癌有P53突變,mt-P53過表達(dá)可以上調(diào)Axl,進(jìn)而促進(jìn)肺癌細(xì)胞的侵襲。Muller等[21]發(fā)現(xiàn),mt-P53可增強(qiáng)MET信號通路,進(jìn)而促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的分散和侵襲。本研究發(fā)現(xiàn),mt-P53在腦膠質(zhì)瘤中的陽性表達(dá)率為60%,隨著腦膠質(zhì)瘤級別的增加,mt-P53表達(dá)增加,與上述文獻(xiàn)報(bào)道一致,提示P53基因突變后,受損細(xì)胞可能進(jìn)入S期并將突變的DNA序列傳給子代,使正常細(xì)胞發(fā)生惡性轉(zhuǎn)化和增殖。
3.4 OPN、caspase-3、P53對腦膠質(zhì)瘤的共同影響 本研究結(jié)果顯示,70例腦膠質(zhì)瘤中OPN、mt-P53陽性表達(dá)均與caspase-3陽性表達(dá)呈負(fù)相關(guān),OPN與mt-P53表達(dá)呈正相關(guān),提示三者在腦膠質(zhì)瘤的發(fā)生、發(fā)展中可能具有協(xié)同作用,使腫瘤細(xì)胞凋亡減少,不斷增殖,從而導(dǎo)致腫瘤的侵襲性生長。
綜上所述,OPN、mt-P53與caspase-3三者在腦膠質(zhì)瘤的表達(dá)情況具有較大的關(guān)聯(lián),對它們進(jìn)行聯(lián)合檢測,有助于對腦膠質(zhì)瘤生物學(xué)行為的判斷,為進(jìn)一步研究腦膠質(zhì)瘤發(fā)生發(fā)展的分子機(jī)制及治療方案的選擇提供參考。
[1]Xu GZ,Du H,Gao BC,et al.Factors related to more malignant glioma prognosis[J].Chinese Journal of Neurosurgery,2011,27 (10):1040-1044.[徐國政,杜浩,高寶成,等.惡性腦膠質(zhì)瘤預(yù)后相關(guān)多因素分析[J].中華神經(jīng)外科雜志,2011,27(10):1040-1044].
[2]Yang G,Zhang S,Zhang Y,et al.The inhibitory effects of extracellular ATP on the growth of nasopharyngeal carcinoma cells via P2Y2 receptor and osteopontin[J].J Exp Clin Cancer Res,2014,33(1):53.doi:10.1186/1756-9966-33-53.
[3]Li CL,Chang L,Guo L,et al.β-elemene induces caspasedependent apoptosis in human glioma cells in vitro through the upregulation of bax and fas/fasL and downregulation of Bcl-2[J]. Asian Pac J Cancer Prev,2014,15(23):10407-10412.
[4]Dong P,Karaayvaz M,Jia N,et al.Mutant p53 gain-of-function induces epithelial-mesenchymal transition through modulation of the miR-1306-ZEB1 axis[J].Oncogene,2013,32(27):3286-3295.doi:10.1038/onc.2012.334.
[5]Li J,Yang GZ,Zhu ZM,et al.Osteopontin is overexpressed in colorectal carcinoma and is correlated with P53 by immunohistochemistry[J].Exp Ther Med,2012,3(4):621-624.
[6]Huang H,Zhang XF,Zhou HJ,et al.Expression and prognostic significance of osteopontin and caspase-3 in hepatocellular carcinoma patients after curative resection[J].Cancer Sci,2010,101(5):1314-1319.
[7]Remmele W,Stegner HE.Recommendation for uniform definition ofan immunoreactivescore(IRS) forimmunohistochemical estrogen receptor detection(ER-ICA)in breast cancer tissue[J]. Pathology,1987,8(3):138-140.
[8]Maeda N,Ohashi T,Chagan-Yasutan H,et al.Osteopontinintegrin interaction as a novel molecular target for antibodymediated immunotherapy in adult T- cell leukemia[J]. Retrovirology,2015,12(1):99-104.
[9]Jan HJ,Lee CC,Shih YL,et al.Osteopontin regulates human glioma cell invasiveness and tumor growth in mice[J].Neuro Oncol,2010,12(1):58-70.doi:10.1093/neuonc/nop013.
[10]Wang XM,Li J,Yan MX,et al.Integrative analyses identify osteopontin,LAMB3 and ITGB1 as critical pro-metastatic genes for lung cancer[J].PLoS One,2013,8(2):e55714.doi:10.1371/ journal.pone.0055714.
[11]Lu DY,Yeh WL,Huang SM,et al.Osteopontin increases heme oxygenase-1 expression and subsequently induces cell migration and invasion in glioma cells[J].Neuro Oncol,2012,14(11):1367-1378.doi:10.1093/neuonc/nos262.
[12]Jin Y,Tong DY,Tang LY,et al.Expressions of osteopontin (OPN),ανβ3 and Pim-1 associated with poor prognosis in nonsmall cell lung cancer(NSCLC)[J].Chin J Cancer Res,2012,24 (2):103-108.doi:10.1007/s11670-012-0103-1.
[13]Simpson KL,Cawthorne C,Zhou C,et al.A caspase-3‘deathswitch’in colorectal cancer cells for induced and synchronous tumor apoptosis in vitro and in vivo facilitates the development of minimally invasive cell death biomarkers[J].Cell Death Dis,2013,4:e613.
[14]Ma ZS,Dai YC,Xie BJ,et al.Expression and significance of HIF-1α and Caspase-3 in breast cancer[J].Modern Oncology,2011,19(11):2216-2219.[馬兆生,戴岳楚,謝伯劍,等.HIF-1α與Caspase-3在乳腺癌中的表達(dá)及臨床病理意義[J].現(xiàn)代腫瘤醫(yī)學(xué),2011,19(11):2216-2219].doi:10.3969/j.issn.1672-4992.2011.11.25.
[15]Bellini MF,Cury PM,Silva AE.Expression of Ki-67 antigen and caspase-3 protein in benign lesions and esophageal carcinoma[J]. Anticancer Res,2010,30(7):2845-2849.
[16]Wang JJ,Sun BC.The expression and significance of caspase-3 and caspase-9 in Breast cancer[J].Chinese Journal of Clinical and Experimental Pathology,2012,28(4):378-381.[王進(jìn)京,孫保存.乳腺癌中caspase-3和caspase-9的表達(dá)及其意義[J].臨床與實(shí)驗(yàn)病理學(xué)雜志,2012,28(4):378-381].
[17]Lane DP.The role of mutant P53 in human cancer[J].J Pathol,2011,223(2):116-126.doi:10.1002/path.2784.
[18]Su XL,Li XM,Tian WH,et al.The expression and significance of Aurora-A mt-P53 and c-myc in Colorectal cancer[J].Chinese Journal of Clinical Oncology,2014,41(3):170-174.[蘇曉路,李曉鳴,田衛(wèi)華,等.Aurora-A mt-P53和c-myc在大腸癌中的表達(dá)及意義[J].中國腫瘤臨床,2014,41(3):170-174].doi:10.3969/j.issn.1000-8179.20131265.
[19]Walerych D,Napoli M,Collavin L,et al.The rebel angel:mutant p53 as the driving oncogene in breast cancer[J].Carcinogenesis,2012,33(11):2007-2017.doi:10.1093/carcin/bgs232.
[20]Vaughan CA,Singh S,Windle B,et al.Gain-of-function activity of mutant p53 in lung cancer through up-regulation of receptor protein tyrosine kinase Axl[J].Genes Cancer,2012,3(7/8):491-502.
[21]Muller PA,Trinidad AG,Timpson P,et al.Mutant p53 enhances MET trafficking and signalling to drive cell scattering and invasion[J]. Oncogene,2013,32(10):1252-1265.doi:10.1038/onc.2012.148.
(2015-10-10收稿 2016-01-04修回)
(本文編輯 陸榮展)
The study on expressions of osteopontin,caspase-3 and mt-P53 in glioma
GUO Keying,ZENG Suting,F(xiàn)AN Wei,CAO Siyuan,WANG Ying,LU Jinbiao,WANG Donglin△Department of Pathology,School of Medicine,Nantong University,Nantong 226001,China△
Objective To study the expressions of osteopontin(OPN),caspase-3 and mt-P53 proteins,and their relationship in gliomas.Methods Seventy gliomas specimens of patients(glioma group)were selected,and 10 samples of non-glioma brain tissue were used as control group.The SP method was used to detect the positive rates of protein expressions of OPN,caspase-3 and mt-P53 between two groups.The relationship between protein expressions of OPN,caspase-3 and mt-P53 in gliomas and grade of gliomas were detected by Western blot assay.Spearman rank correlation was compared between the positive expression of OPN,caspase-3 and rate mt-P53.Results The positive expression rates of OPN and mt-P53 were significantly higher in glioma group(64.29%and 60%)than those of control group(no positive expression),but the positive expression rate of caspase-3 was significantly lower than that of control group(47.14%vs.90%,P<0.05).There were no significant differences in OPN,caspase-3 and mt-P53 expressions between different gender,age,tumor size and tumor position(P>0.05).The higher the WHO classification,the higher the positive expression rates of OPN and mt-P53(P<0.001),and the lower the positive expression rate of caspase-3(P<0.001).With the increased level of glioma grade,OPN and mt-P53 protein levels were increased,but caspase-3 protein expression level was decreased.There was a negatively correlation between OPN and the positive expression of caspase-3,but there was a positive correlation between OPN and the expression of mt-P53(rs=-0.720 and 0.722,P<0.05).There was a negative correlation between caspase-3 and mt-P53 expressions(rs=-0.556,P<0.05).Conclusion The higher the WHO classification,the higher the positive expression rates of OPN and mt-P53,while the lower the positive expression rate of caspase-3.The study reveals that OPN,caspase-3 and mt-P53 expressions are associated with the occurrence and the progress of gliomas. The combined detection of them can contribute to the judgment of biological behavior of gliomas.
glioma;osteopontin;caspase 3;genes,p53
R739.41
A
10.11958/20150213
國家自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目(81272789);南通大學(xué)大學(xué)生創(chuàng)新訓(xùn)練計(jì)劃項(xiàng)目(2014091)
南通大學(xué)醫(yī)學(xué)院病理學(xué)系(郵編226001)
郭可盈(1994),女,本科在讀,主要從事膠質(zhì)瘤研究
△通訊作者 E-mail:donglin@ntu.edu.cn