熊齊榮

目前各國(guó)對(duì)脫氫乙酸應(yīng)用有著嚴(yán)格的限制，如我國(guó)規(guī)定果汁、醬汁、糕點(diǎn)等食品中的最高用量不得超過(guò)0.5g/kg。對(duì)于脫氫乙酸含量的測(cè)定主要采用氣相色譜法和液相色譜法，其中，氣相色譜法的操作繁瑣且色譜峰易出現(xiàn)拖尾，因此現(xiàn)階段普遍采用操作更簡(jiǎn)單、靈敏度更高的高效液相色譜法。

材料與方法

儀器。戴安3000；旋渦混合器；離心機(jī)。

試劑。甲基氰（色譜純）；乙酸銨（分析純）；NaCl（分析純）；脫氫乙酸（99.9%）。

測(cè)定方法。①色譜條件：流動(dòng)相為15：85的甲基氰（0.02mol/ml）、乙酸銨溶液；流速為1.0 mL/min；進(jìn)樣量為10μL；柱溫為35℃。②實(shí)驗(yàn)方法：實(shí)驗(yàn)樣品為市售不同品牌的果汁、醬菜、糕點(diǎn)，分別做如下處理。果汁：準(zhǔn)確稱量5.00g于50mL離心管中；醬菜、糕點(diǎn)：預(yù)先均勻，稱取2～3g于50mL離心管中，加入飽和NaCl溶液5mL，1：1的鹽酸溶液1mL，在旋渦混合器中混合處理1min，精確添加甲基氰10 mL，再次混合處理3min，然后以3000轉(zhuǎn)/min的速度離心處理15min，取上清液，用0.45μm規(guī)格的過(guò)濾器進(jìn)行過(guò)濾，待用。③色譜分析：根據(jù)上述色譜條件，利用外標(biāo)法分析樣液，保留時(shí)間定性，根據(jù)峰面積定量，計(jì)算脫氫乙酸含量（mg/mL）。

結(jié)果與討論

檢測(cè)波長(zhǎng)的確定。由掃描結(jié)果得知，脫氫乙酸在230nm處出現(xiàn)強(qiáng)吸收，但基體干擾較多；在297nm處出現(xiàn)次強(qiáng)吸收，基體干擾較少，因此，選擇297nm作為檢測(cè)波長(zhǎng)。

流動(dòng)相的選擇。以甲基氰+水作為流動(dòng)相時(shí)，色譜峰出現(xiàn)拖尾，以0.02mol/L的乙酸銨替代水時(shí)，峰形明顯改善。甲基氰的比例對(duì)出峰時(shí)間和響應(yīng)有一定影響，比例較低時(shí)，保留時(shí)間長(zhǎng)，響應(yīng)也比較低，反之則出峰時(shí)間短，響應(yīng)較高。經(jīng)多次試驗(yàn)得出，當(dāng)甲基氰與乙酸銨（0.02mol/L）的比例為15：85時(shí)，可以取得較好的效果。

提取液的選擇。脫氫乙酸對(duì)水難溶，但脫氫乙酸鈉易溶，通常利用水、NaOH溶液、NaCO3溶液等作為提取液，但提取后需要先凈化后才能使用。本文研究中，以甲基氰作為提取液，原因是脫氫乙酸可以溶于甲基氰，且甲基氰的水溶性有助于將酸性樣液中的脫氫乙酸徹底溶解，而且甲基氰能夠沉淀蛋白質(zhì)，與脂肪不溶，通過(guò)離心即可獲得純度較高的提取液。

色譜分離。在上述色譜條件下，脫氫乙酸的保留時(shí)間為5.775min，峰形和組分的分離情況比較好，色譜圖如下：

標(biāo)準(zhǔn)曲線。將70%的甲基氰水溶液作為溶劑，制作不同濃度的脫氫乙酸標(biāo)準(zhǔn)液，得到若干測(cè)定結(jié)果（見(jiàn)表1）。利用峰面積對(duì)脫氫乙酸的濃度做回歸方程分析，得Y=2.39X×108-1.33×105，R=0.9997，線性結(jié)果良好。然后，對(duì)各濃度標(biāo)準(zhǔn)液連續(xù)進(jìn)樣5次，所得峰面積及保留時(shí)間的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差依次為0.35%和0.24，表明此測(cè)定方法具有較高的定性及定量準(zhǔn)確度。

回收率及精密度試驗(yàn)。取未添加脫氫乙酸的腐乳樣品3份，每份3g，分別加入0.1mg、0.2mg、0.4mg、0.6mg、1.0mg脫氫乙酸標(biāo)準(zhǔn)液，利用1.3所述方法及步驟進(jìn)行處理，最終測(cè)定結(jié)果顯示，加標(biāo)回收率為96.1～99.5%，平均回收率為98.5%。

取含有脫氫計(jì)算的腐乳樣品1份，以同樣的方法和步驟測(cè)定6次，得到下列測(cè)定值：0.192、0.195、0.194、0.198、0.195、0.193g/kg，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為1.08%。

樣品測(cè)定。利用該法對(duì)市售不同品牌的果汁、醬菜、糕點(diǎn)等食品中的脫氫乙酸含量進(jìn)行測(cè)定，共檢測(cè)10份，其中7份為未檢出，3份檢測(cè)出脫氫乙酸，濃度依次為0.052g/kg，0.131g/kg，0.088g/kg，與國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)氣相色譜法的測(cè)定結(jié)果相一致，表明該法測(cè)定結(jié)果良好，值得推廣使用。

（作者單位：畢節(jié)市質(zhì)量技術(shù)監(jiān)督檢測(cè)所）