湯衛(wèi)華，魏紀(jì)平，張樂（天津現(xiàn)代職業(yè)技術(shù)學(xué)院生物工程學(xué)院，天津300350）

蒸煮法提取玉米芯中木聚糖的條件研究

湯衛(wèi)華，魏紀(jì)平，張樂
（天津現(xiàn)代職業(yè)技術(shù)學(xué)院生物工程學(xué)院，天津300350）

基于玉米芯中木聚糖與纖維素和木質(zhì)素之間通過化學(xué)鍵緊密結(jié)合，為了從玉米芯中提取木聚糖，采用預(yù)處理與蒸煮相結(jié)合的方法。3種預(yù)處理液（H2SO4、NaOH和蒸餾水）中，NaOH預(yù)處理效果最好。堿液預(yù)處理可以使玉米芯充分溶脹，并去除部分雜質(zhì)。預(yù)處理結(jié)束后，對(duì)玉米芯進(jìn)行進(jìn)一步的蒸煮提取，對(duì)蒸煮條件進(jìn)行正交試驗(yàn)，確定木聚糖提取的最佳條件為蒸煮時(shí)間為40 min、蒸煮溫度為120℃和料液比為1∶10（g/mL）。在此條件下，木聚糖提取率、平均聚合度和色度分別是26.7%、2.8和0.85。

蒸煮法；木聚糖；預(yù)處理；平均聚合度

木聚糖是植物細(xì)胞中半纖維素的主要成分，也是生產(chǎn)低聚木糖和木糖的主要原料。常用的木聚糖提取原料有玉米芯、麩皮、甘蔗渣、玉米秸稈、花生殼、棉籽殼等。不同來源的農(nóng)業(yè)廢棄物其組成成分是不同的，其中玉米芯中的半纖維素含量較高，同時(shí)玉米芯的來源廣泛且價(jià)格低廉，是制備木聚糖的理想原料。

玉米芯的組成成分中半纖維素占35%～40%，纖維素占32%～36%，木質(zhì)素占25%以及少量灰分［1］。纖維素、半纖維素和木質(zhì)素分子之間存在不同的結(jié)合力，其中半纖維素與纖維素之間以氫鍵連接，而半纖維素與木質(zhì)素以醚鍵連接，形成半纖維素-酯-阿魏酸-醚-木素橋聯(lián)。同時(shí)木質(zhì)素和半纖維素相互交聯(lián)覆蓋于纖維素表面，形成了致密的保護(hù)層［2］。為了能從玉米芯中提取半纖維素木聚糖，必須破壞玉米芯細(xì)胞壁的結(jié)構(gòu)，分離出木聚糖。目前破壞細(xì)胞壁的方法有堿抽提、高溫蒸煮法和氣爆法等，同時(shí)還有研究者探討超聲波［3］和微波［4］處理方法，后兩種方法目前無法實(shí)現(xiàn)工業(yè)化。目前最常用的是堿抽提、高溫蒸煮法和氣爆法。

堿抽提法具有得率較高、提取純度高的優(yōu)點(diǎn)，但是堿性物質(zhì)的用量較大，容易引起設(shè)備腐蝕［5］。高溫蒸煮法是在130℃～170℃高溫下處理，其優(yōu)點(diǎn)是處理量大，得率較高。但是采用過高溫度處理會(huì)產(chǎn)生一系列副產(chǎn)物，包括可溶性木質(zhì)素、大量單糖及單糖裂解物，同時(shí)高溫蒸煮法需要特別的設(shè)備［6］。本研究采用化學(xué)物質(zhì)抽提法與蒸煮法相結(jié)合的方法，集兩種方法的優(yōu)點(diǎn)，以期制備較高濃度的木聚糖，同時(shí)盡量降低產(chǎn)品的副產(chǎn)物。

1　材料與方法

1.1材料與試劑

玉米芯：市售；苯酚、NaOH、H2SO4、3，5-二硝基水楊酸、酒石酸鉀鈉：分析純，天津市化學(xué)試劑一廠提供。

1.2儀器與設(shè)備

F2102型粉碎機(jī)：天津泰斯特儀器有限公司；DZKWD-6恒溫水浴鍋：北京市永光明醫(yī)療儀器廠；G154-TR全自動(dòng)立式高壓滅菌鍋：致微（廈門）儀器有限公司。

1.3方法

1.3.1玉米芯的粉碎

選擇風(fēng)干的、無發(fā)霉的玉米芯用粉碎機(jī)粉碎過80目篩，備用。

1.3.2不同預(yù)處理液對(duì)玉米芯中木聚糖得率和平均聚合度的影響

稱取1.0 g玉米芯3份，分別加入10倍體積預(yù)處理液（1.0%H2SO4、1.0%的NaOH和蒸餾水）。在60℃下預(yù)處理12 h，調(diào)節(jié)pH至中性。將該玉米芯液（固液比為1∶10 g/mL）置于高壓蒸汽滅菌鍋內(nèi)120℃下蒸煮60 min后，抽濾，測(cè)定上清液中木聚糖的含量。

1.3.3不同的蒸煮溫度對(duì)木聚糖提取率的影響

稱取1.0 g玉米芯4份，經(jīng)過預(yù)處理后，將玉米芯液（固液比1∶10 g/mL）置于高壓蒸汽滅菌鍋內(nèi)100、110、120、130℃下分別處理60 min后，抽濾，測(cè)定上清液中木聚糖的含量。

1.3.4不同的蒸煮時(shí)間對(duì)木聚糖提取率的影響

稱取1.0 g玉米芯4份，經(jīng)過預(yù)處理后，將玉米芯（固液比1∶10 g/mL）置于高壓蒸汽滅菌鍋內(nèi)120℃下分別處理30、60、90、120 min后，抽濾，測(cè)定上清液中木聚糖的含量。

1.3.5不同的固液比對(duì)木聚糖提取率的影響

稱取1.0 g玉米芯4份，將過預(yù)處理后，調(diào)整玉米芯的固液比為1∶5、1∶10、1∶15、1∶20（g/mL），將該玉米芯液置于高壓蒸汽滅菌鍋內(nèi)120℃下處理60 min后，抽濾，測(cè)定上清液中木聚糖的含量。

1.4測(cè)定方法

1.4.1總糖和還原糖的測(cè)定［7］

總糖含量測(cè)定采用苯酚硫酸法，還原糖含量測(cè)定采用DNS法。

1.4.2木聚糖含量和得率

木聚糖含量（g/L）=總糖含量（g/L）×0.88，0.88：校正系數(shù)。

木聚糖得率/%=玉米芯木聚糖含量（g/L）×濾液體積（L）/玉米芯質(zhì)量（g）

1.4.3平均聚合度

平均聚合度（D.P）=總糖濃度/還原糖濃度

1.4.4色度測(cè)定方法

將待測(cè)木聚糖液調(diào)至pH7.0左右，測(cè)定濾液稀釋10倍后420 nm處的吸光值［8］。

2　結(jié)果與討論

2.1不同預(yù)處理液對(duì)玉米芯中木聚糖得率和聚合度的影響

選擇3種常用的預(yù)處理液（1.0%H2SO4、1.0%NaOH和蒸餾水）處理玉米芯粉末，然后在同一條件下進(jìn)行蒸煮，蒸煮結(jié)束后，測(cè)定木聚糖含量，結(jié)果如圖1所示。

圖1　不同的預(yù)處理液對(duì)木聚糖提取率及平均聚合度的影響Fig.1　Effect of different pretreatment liquid on the extraction rate and the average degree of polymerization

從圖1可知，不同的預(yù)處理液中，NaOH預(yù)處理后木聚糖提取率高于H2SO4，蒸餾水預(yù)處理中木聚糖的提取率最低。這是因?yàn)閴A性物質(zhì)預(yù)處理玉米芯可以打斷木質(zhì)素與半纖維素之間的化學(xué)鍵，同時(shí)使位于細(xì)胞次生壁的木質(zhì)素優(yōu)先從細(xì)胞壁內(nèi)側(cè)脫除，有利于木聚糖的提?。?］。稀H2SO4預(yù)處理中，除了能脫除玉米芯的半纖維素和少量木質(zhì)素外，還會(huì)造成大分子物質(zhì)的降解。還可能會(huì)造成植物細(xì)胞的纖維結(jié)構(gòu)發(fā)生改變，其表面形成由木質(zhì)素降解產(chǎn)物與碳水化合物合成的球狀顆粒-假木素［10］，這些假木素可能會(huì)阻礙木聚糖的提取。而蒸餾水的預(yù)處理，僅能夠使纖維質(zhì)材料完全溶脹，能將少量半纖維素溶解，對(duì)植物細(xì)胞壁的結(jié)構(gòu)改變最小，因此木聚糖的提取率最低。3種預(yù)處理液中平均聚合度（D.P）值呈現(xiàn)不同，D.P值定性表示木聚糖主鏈的斷裂程度，D.P值越小表示斷裂程度越大［11］。蒸餾水預(yù)處理后D.P值達(dá)到3.4，而稀酸液處理后的玉米芯D.P值最低，為2.4?；谀揪厶翘崛÷屎虳.P值，選擇NaOH為預(yù)處理液。

2.2蒸煮溫度對(duì)玉米芯木聚糖得率和平均聚合度的影響

圖2　蒸煮溫度對(duì)木聚糖提取率、平均聚合度和色度的影響Fig.2　Effect of cooking temperature on the xylan extraction rate，average degree of polymerization and color value

玉米芯經(jīng)過堿液預(yù)處理后，分別考察不同的蒸煮溫度（100、110、120、130℃）對(duì)玉米芯木聚糖提取的影響，結(jié)果見圖2。由圖2可知，隨著提取溫度的提高，木聚糖提取率和D.P值都提高。這說明溫度越高，木聚糖的主鏈斷裂，越有利于木聚糖的溶出，由于木聚糖沒有進(jìn)一步降解，因此D.P值也隨著溫度提高而不斷升高。同時(shí)溫度越高，更多可溶性木質(zhì)素的溶出，同時(shí)包括成色反應(yīng)包括焦糖化反應(yīng)、美拉德反應(yīng)及木糖等還原糖的酸降解反應(yīng)［12］，造成溶液的色度越高，這對(duì)于后續(xù)的純化分離造成困難。因此綜合考慮木聚糖提取率、平均聚合度和色度值，選擇的蒸煮溫度為120℃。

2.3蒸煮時(shí)間對(duì)木聚糖提取率和平均聚合度的影響玉米芯經(jīng)堿液預(yù)處理后，分別考察不同的蒸煮時(shí)間（30、60、90、120 min）對(duì)玉米芯木聚糖提取率和平均聚合度的影響，結(jié)果見圖3。

圖3　蒸煮時(shí)間對(duì)木聚糖提取率、平均聚合度和色度的影響Fig.3　Effect of cooking time on the xylan extraction rate，average degree of polymerization and color value

在120℃下，隨著蒸煮時(shí)間的提高，木聚糖提取率和色度均提高，這說明蒸煮時(shí)間越長，更多的木聚糖從玉米芯中溶出，同時(shí)溶液中副反應(yīng)也增多，造成提取液的色度提高。而平均聚合度隨著蒸煮時(shí)間的延長反而下降，這是因?yàn)楦嗟哪揪厶欠纸鉃槟咎?。從圖3可以看出，蒸煮時(shí)間越長，木聚糖提取率提高，但是當(dāng)蒸煮時(shí)間達(dá)到60 min后，再提高蒸煮時(shí)間，其木聚糖的提取率增加緩慢，蒸煮60 min和120 min提取率僅相差0.7%。因此選擇的蒸煮時(shí)間是60 min。

2.4固液比對(duì)木聚糖提取率和平均聚合度的影響

玉米芯經(jīng)過堿液預(yù)處理后，考察固液比1∶5、1∶10、1∶15、1∶20（g/mL）條件下，木聚糖的提取率和平均聚合度，見圖4。

圖4　固液比對(duì)木聚糖提取率、平均聚合度和色度的影響Fig.4　Effect of solid to liquid ratio on the xylan extraction rate，average degree of polymerization and color value

從圖4可以得知，隨著固液比的提高，玉米芯中木聚糖的提取率具有先上升后下降的趨勢(shì)，當(dāng)固液比為1∶10（g/mL）時(shí)，木聚糖的提取率最高，為26.5%。這表明高壓蒸煮法提取木聚糖有一個(gè)最佳的固液比，當(dāng)固液比太低，會(huì)導(dǎo)致木聚糖提取不徹底；而當(dāng)固液比太高，會(huì)造成后續(xù)的分離純化及濃縮造成困難。不同的固液比下，木聚糖的D.P值呈現(xiàn)稍有下降的趨勢(shì)，但是D.P值差異不大，雖然隨著固液比的提高，木聚糖提取液的色度下降，但主要可能是被稀釋而導(dǎo)致的。綜合考慮木聚糖提取率和平均聚合度最終選擇固液比為1∶10（g/mL）。

2.5正交優(yōu)化提取條件

在單因素試驗(yàn)的基礎(chǔ)上進(jìn)行正交試驗(yàn)，以木聚糖提取率為考察指標(biāo)，進(jìn)一步優(yōu)化木聚糖提取條件，正交試驗(yàn)因素水平設(shè)計(jì)如表1所示，正交結(jié)果分析見表2。

表1　 正交試驗(yàn)因素水平Table 1　Factors and levels in orthogonal experiment

由正交結(jié)果分析可以得出蒸煮時(shí)間（A）、蒸煮溫度（B）、固液比（C）組合A1B2C2最好，即蒸煮時(shí)間為40 min，蒸煮溫度為120℃，固液比為1∶10（g/mL）。

采用以上的最優(yōu)提取處理玉米芯，測(cè)定木聚糖提取率、平均聚合度和色度分別是26.7%、2.8和0.85。與單獨(dú)的蒸煮法相比（圖5），木聚糖提取率提高了30.9%。

表2　 正交結(jié)果分析Table 2　Orthogonal Results

圖5　兩種提取方式下木聚糖提取率Fig.5　Differences in the extraction rate of the two methods

3　結(jié)論

采用預(yù)處理與蒸煮法處理玉米芯提取木聚糖，研究發(fā)現(xiàn)采用不同的預(yù)處理液（1.0%H2SO4、1.0%NaOH和蒸餾水）處理玉米芯時(shí)，1.0%NaOH的預(yù)處理效果最好。通過正交試驗(yàn)優(yōu)化蒸煮條件，蒸煮時(shí)間為40 min，蒸煮溫度為120℃，固液比為1∶10（g/mL）。該條件下，木聚糖提取率、平均聚合度和色度分別是26.7%、2.8 和0.85。與單一的蒸煮法相比，木聚糖的提取率提高了30.9%。

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Study on the Extraction Conditions of Xylan from Corncob by Steaming

TANG Wei-hua，WEI Ji-ping，ZHANG Le
（Department of Chemical Biology，Tianjin Modern Vocational Technology College，Tianjin 300350，China）

Xylan，cellulose and lignin in corncob were closely linked by chemical bond.In order to extract xylan from Corncob，the combination of the pretreatment liquids and cooking methods was used.Among three kinds of pretreatment fluids（NaOH，H2SO4and distilled water），the effect of NaOH was the best.Alkaline pretreatment of corncob can make full swelling，and remove some impurities.After the alkaline pretreatment，the corncob were further cooking extraction.Orthogonal experiments were carried out for cooking conditions，The optimum extraction conditions were as follow：cooking time was 40 min，cooking temperature was 120℃and ratio of solid to liquid was 1∶10（g/mL）.Under these conditions，the extraction rate，the average degree of polymerization and color value were 26.7%，2.8 and 0.85，respectively.

cookingmethod；xylan；pretreatment；averagedegreeofpolymerization

10.3969/j.issn.1005-6521.2016.15.020

天津市津南區(qū)科技計(jì)劃項(xiàng)目（20141201）

湯衛(wèi)華（1979—），女（漢），副教授，博士，研究方向：生物技術(shù)與生物合成。

2015-08-27