楊彩霞,張　冰,寧鵬飛,黃程程,孫　磊,高　雁,姜維勝,劉明春

(1.沈陽(yáng)農(nóng)業(yè)大學(xué)畜牧獸醫(yī)學(xué)院,遼寧沈陽(yáng)110866;2.遼寧農(nóng)牧業(yè)機(jī)械研究所有限公司,遼寧沈陽(yáng)110036;3.沈陽(yáng)禾豐反芻動(dòng)物飼料有限公司,遼寧沈陽(yáng)110164)

遼寧地區(qū)奶牛臨床型乳房炎大腸桿菌的血清型及耐藥性調(diào)查

楊彩霞1,張冰1,寧鵬飛1,黃程程1,孫磊1,高雁2,姜維勝3,劉明春1

(1.沈陽(yáng)農(nóng)業(yè)大學(xué)畜牧獸醫(yī)學(xué)院,遼寧沈陽(yáng)110866;2.遼寧農(nóng)牧業(yè)機(jī)械研究所有限公司,遼寧沈陽(yáng)110036;3.沈陽(yáng)禾豐反芻動(dòng)物飼料有限公司,遼寧沈陽(yáng)110164)

對(duì)遼寧地區(qū)16家規(guī)?；膛?chǎng)總計(jì)1 609頭泌乳期奶牛臨床型乳房炎進(jìn)行了調(diào)查,并對(duì)患病奶牛乳樣進(jìn)行大腸桿菌的分離、鑒定及藥物敏感性試驗(yàn).結(jié)果奶牛臨床型乳房炎頭發(fā)生率為6.96%,乳區(qū)發(fā)生率為2.35%;共分離鑒定出84株大腸桿菌,分離率為55.63%;血清型鑒定結(jié)果表明O51、O148、O60、O21、O77、O17、O6、O158、O101、O12510個(gè)血清型為優(yōu)勢(shì)血清型.采用肉湯微量稀釋法測(cè)定21種臨床常用抗菌藥物對(duì)84株大腸桿菌分離株的最小抑菌濃度(MICs),表明分離菌對(duì)磺胺間甲氧嘧啶、磺胺甲基異噁唑、甲砜霉素高度耐藥;對(duì)氧氟沙星、環(huán)丙沙星、慶大霉素較敏感.

奶牛乳房炎;大腸桿菌;血清型;耐藥性

乳房炎是由乳腺感染、外傷或化學(xué)刺激而引起的乳房炎性反應(yīng),乳腺感染在生產(chǎn)上比較常見(jiàn),即由某些病原微生物感染乳腺組織而導(dǎo)致的乳房炎癥.乳房炎分為臨床型和隱性型,是致使全世界牛場(chǎng)經(jīng)濟(jì)損失最嚴(yán)重的疾病.已發(fā)現(xiàn)約有150多種病原菌能夠引起奶牛乳房炎[1],其中主要是鏈球菌、金黃色葡萄球菌、大腸桿菌、隱秘桿菌和綠膿桿菌等.現(xiàn)階段國(guó)內(nèi)外仍主要采用抗菌藥物治療奶牛乳房炎.但是隨著抗菌藥物的廣泛及長(zhǎng)期的不合理應(yīng)用,使得病原菌產(chǎn)生了很強(qiáng)的耐藥性,耐藥菌株逐年增多,多藥耐藥現(xiàn)象越來(lái)越嚴(yán)重.本試驗(yàn)對(duì)遼寧地區(qū)奶牛進(jìn)行了臨床型大腸桿菌的分離、鑒定和藥物敏感性試驗(yàn),以期為遼寧地區(qū)奶牛乳房炎的有效防治提供理論依據(jù).

1　材料與方法

1.1材料營(yíng)養(yǎng)肉湯(NB)、營(yíng)養(yǎng)瓊脂、麥康凱瓊脂,均購(gòu)自北京奧博星生物技術(shù)責(zé)任有限公司;大腸桿菌ATCC25922,購(gòu)自中國(guó)獸醫(yī)藥品監(jiān)察所菌種保藏中心;腸桿菌科生化常規(guī)鑒定管,購(gòu)自杭州天和微生物試劑有限公司;藥敏試驗(yàn)用藥標(biāo)準(zhǔn)品和大腸桿菌"O"抗原定型血清,均購(gòu)自中國(guó)獸醫(yī)藥品監(jiān)察所.

1.2方法

1.2.1乳樣的采集分別采集遼寧省不同地區(qū)的16家奶牛場(chǎng)臨床型乳房炎奶牛的乳樣.牛只按常規(guī)擠奶消毒后,每個(gè)乳頭擠去頭2～3把乳后無(wú)菌采集乳樣3 mL左右于滅菌的塑料離心管中,做好標(biāo)記,放于含冰袋的保溫箱中,盡快運(yùn)至實(shí)驗(yàn)室待檢.

1.2.2大腸桿菌分離與鑒定將乳樣涂抹于麥康凱培養(yǎng)基中,置37℃恒溫箱培養(yǎng)24 h后觀察,根據(jù)菌落形態(tài)初步判定細(xì)菌類屬.將初步分離的病原菌接種于腸桿菌科生化常規(guī)鑒定管中,孵育18 h～24 h后觀察結(jié)果,根據(jù)鑒定結(jié)果編碼鑒定手冊(cè)判定細(xì)菌種類.

1.2.3血清型鑒定采用玻板凝集反應(yīng)和試管凝集反應(yīng),具體操作和判定按照大腸桿菌"O"抗原定型血清使用說(shuō)明書(shū)進(jìn)行.

1.2.4藥敏試驗(yàn)采用肉湯微量稀釋法測(cè)定21種藥物對(duì)大腸桿菌分離株的MICs,測(cè)定方法及判斷標(biāo)準(zhǔn)參照2013年美國(guó)臨床和實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)化研究所的標(biāo)準(zhǔn)[2].

2　結(jié)果與分析

2.1遼寧地區(qū)奶牛臨床型乳房炎調(diào)查結(jié)果對(duì)遼寧地區(qū)16家規(guī)模化奶牛場(chǎng)的1 609頭泌乳期奶牛進(jìn)行臨床型乳房炎流行病調(diào)查.共檢測(cè)出112個(gè)臨床型乳房炎病例,采集了臨床型乳房炎樣品151份進(jìn)行大腸桿菌病原分離鑒定,臨床型乳房炎頭發(fā)生率為6.96%,乳區(qū)發(fā)生率為2.35%.

2.2遼寧地區(qū)奶牛臨床型乳房炎大腸桿菌分離鑒定結(jié)果挑取在麥康凱鑒別培養(yǎng)基上呈粉紅色帶金屬光澤的菌落,經(jīng)過(guò)染色鏡檢、生化鑒定,共鑒定出84株大腸桿菌,分離率為55.63%.

用大腸桿菌"O"抗原定型血清對(duì)大腸桿菌分離株進(jìn)行"O"型鑒定,共鑒定出59株分離菌的血清型,占分離菌的70.2%.其中大部分菌株具有1～2種血清型,少數(shù)具有多種血清型,共鑒定出24種血清型.其中以O(shè)51、O148、O60、O21、O77、O17、O6、O158、O101、O12510個(gè)血清型為主,共35株,占已定型血清的59.3%.

2.3大腸桿菌分離株藥物敏感性試驗(yàn)結(jié)果21種抗菌藥物對(duì)84株奶牛乳房炎大腸桿菌的MIC值見(jiàn)表1.大腸桿菌分離株對(duì)磺胺類藥物耐藥率最高,其中對(duì)磺胺間甲氧嘧啶100.0%耐藥,對(duì)磺胺甲基異噁唑的耐藥率達(dá)98.8%;對(duì)甲砜霉素、土霉素的耐藥率也高達(dá)94.0%和80.9%;對(duì)阿莫西林、氨芐西林、乙酰甲喹、多西環(huán)素相對(duì)敏感;對(duì)喹諾酮類藥物敏感率最高,尤其對(duì)氧氟沙星的敏感率高達(dá)97.6%.

表1　奶牛乳房炎大腸桿菌分離株對(duì)21種抗菌藥物的耐藥情況

2.4遼寧地區(qū)奶牛臨床型乳房炎大腸桿菌耐藥譜分析進(jìn)行藥敏試驗(yàn)的21種抗菌藥物分屬10類,其中青霉素類2種,頭孢菌素類2種,四環(huán)素類3種,氨基糖苷類3種,酰胺醇類3種,喹諾酮類3種,磺胺類2種,大環(huán)內(nèi)酯類、多肽類和喹噁啉各1種.藥敏試驗(yàn)表明,同類藥物之間存在著不同程度的交叉耐藥現(xiàn)象.因此從每類藥物中選出一個(gè)代表,即氨芐西林(a)、頭孢噻呋(c)、四環(huán)素(t)、慶大霉素(g)、氟苯尼考(f)、恩諾沙星(e)、磺胺間甲氧嘧啶(s)、阿奇霉素(z)、多黏菌素(p)、乙酰甲喹(m),共計(jì)10類,分析統(tǒng)計(jì)遼寧地區(qū)奶牛臨床型乳房炎大腸桿菌對(duì)這10類抗菌藥物的耐藥情況(詳見(jiàn)表2).遼寧地區(qū)奶牛乳房炎大腸桿菌有46種耐藥譜,以s耐藥譜菌株最多,達(dá)16.7%.多藥耐藥情況嚴(yán)重,最多耐受8類抗菌藥物.

表2　遼寧地區(qū)奶牛乳房炎大腸桿菌對(duì)10類抗菌藥物的耐藥譜

3　討論

據(jù)報(bào)道,呼和浩特[3]、江蘇[4]、西安[5]地區(qū)奶牛臨床型乳房炎頭發(fā)生率分別為50.4%、7.2%、4.37%.從本試驗(yàn)調(diào)查結(jié)果得知,遼寧地區(qū)奶牛臨床型乳房炎頭發(fā)生率相對(duì)較低.本研究發(fā)現(xiàn),大腸桿菌為遼寧地區(qū)奶牛臨床型乳房炎的主要致病菌,其分離率(55.63%)與寧夏[6]地區(qū)大腸桿菌的分離率(65.3%)相近,高于長(zhǎng)春[7]、山東泰安[8]等地區(qū)大腸桿菌的分離率,也高于Su等[9]人的報(bào)道.本試驗(yàn)中分離鑒定的大腸桿菌以O(shè)51、O148及O60等10個(gè)血清型為主,占已定型血清的59.3%.已定型的59株菌包含了24種血清型,表明大腸桿菌血清型具有復(fù)雜性和多樣性.84株分離菌株對(duì)磺胺類藥物、甲砜霉素、土霉素等耐藥率較高,但對(duì)氨基糖苷類藥物敏感性相對(duì)較高,對(duì)喹諾酮類藥物敏感率最高.本研究結(jié)果與四川、內(nèi)蒙和上海地區(qū)的報(bào)道結(jié)果基本一致[10-11].

本試驗(yàn)采樣的16家奶牛場(chǎng)分屬于沈陽(yáng)、錦州、阜新、盤(pán)錦四個(gè)地區(qū).不同地區(qū)的奶牛乳房炎頭發(fā)生率有所不同,阜新較高(20.17%),沈陽(yáng)(7.30%)、錦州(3.45%)、盤(pán)錦(6.64%)較低;阜新地區(qū)的大腸桿菌分離率(62.5%)也最高.大腸桿菌血清型復(fù)雜,未見(jiàn)其分布規(guī)律.各個(gè)地區(qū)的耐藥表型沒(méi)有明顯差異,均對(duì)磺胺類藥物和甲砜霉素高度耐藥,對(duì)喹諾酮類100%耐藥,對(duì)氯霉素,慶大霉素高度敏感.說(shuō)明各地區(qū)可能存在相似的用藥習(xí)慣,建議加強(qiáng)對(duì)臨床用藥常識(shí)的普及,避免抗菌藥物的不合理使用,以避免新的耐藥菌株的產(chǎn)生,并根據(jù)藥敏試驗(yàn)結(jié)果指導(dǎo)臨床科學(xué)合理使用抗菌藥物.

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S852.61

B

0529-6005(2016)06-0092-02

2015-04-16

遼寧省科學(xué)技術(shù)廳科技特派、農(nóng)民技術(shù)員培訓(xùn)項(xiàng)目(2013030055-201)

楊彩霞(1989-),女,碩士生,主要從事獸醫(yī)藥理與毒理學(xué)的研究,E-mail:yang_chaixia@163.com

劉明春,E-mail:liumingchun@sina.com