康力

（甘肅省定西市安定區(qū)種子管理站，甘肅 定西 743000）

防治稻瘟菌藥劑的篩選

康力

（甘肅省定西市安定區(qū)種子管理站，甘肅 定西 743000）

對(duì)于稻瘟病的防治，在生產(chǎn)上仍然是以化學(xué)防治為主，本文通過(guò)室內(nèi)毒力測(cè)定方法，篩選對(duì)稻瘟病防效較好的藥劑。本試驗(yàn)選用六種防治稻瘟菌病害的主要化學(xué)藥劑：多菌靈、三環(huán)唑、苯醚甲環(huán)唑、咪鮮胺、嘧菌酯、稻瘟靈做為研究對(duì)象。對(duì)兩株稻瘟菌進(jìn)行毒力測(cè)定。研究的實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明：嘧菌酯對(duì)稻瘟菌的抑菌效果最好，其平均EC50值為0.0520μg/ml，稻瘟靈、咪鮮胺、多菌靈、苯醚甲環(huán)唑、三環(huán)唑的抑菌效果依次降低。嘧菌酯對(duì)于水稻的稻瘟病來(lái)說(shuō)防治效果好于其他的五種藥劑，可以在生產(chǎn)上廣泛推廣。

稻瘟菌；毒力測(cè)定；藥劑篩選

一、水稻稻瘟病防治情況綜述

（一）水稻稻瘟病介紹

1.癥狀識(shí)別。稻瘟病由半知菌亞門(mén)、稻梨抱屬病原真菌引起。破口抽穗初期最容易侵染穗頸、枝梗和谷粒。侵染穗頸時(shí)，常在第一節(jié)穗頸上發(fā)生淡褐色或墨綠色斑，形成白穗；侵染枝梗時(shí)，也在小枝頸節(jié)上發(fā)病，影響結(jié)實(shí)而形成癟粒；侵染谷粒時(shí)，表現(xiàn)為橢園形、邊緣暗褐色、中部灰白色的病斑，形成癟粒和空殼。稻瘟病是一種突發(fā)性、流行性，有時(shí)甚至為毀滅性的稻作病害，是我國(guó)水稻高產(chǎn)、穩(wěn)產(chǎn)的限制因素。該病一般造成減產(chǎn)10%-20%，重的可達(dá)40%-50%，甚至顆粒無(wú)收。

2.病原。PhyriculariagriseaSacc.稱(chēng)灰梨孢Pyriculariaoryae Cav.稱(chēng)稻梨孢，屬半知菌亞門(mén)真菌。有性態(tài)為Magnaporthe grisea HebertBarrnov.屬子囊菌亞門(mén)真菌。自然條件下尚未發(fā)現(xiàn)。分生孢子梗不分枝，3-5根叢生，從寄主表皮或氣孔伸出，具2-8個(gè)隔膜，基部稍膨大，淡褐色，向上色淡，頂端曲狀，上生分生孢子。分生孢子無(wú)色，洋梨形或棍棒形，常有1-3個(gè)隔膜，基部有腳胞，萌發(fā)時(shí)兩端細(xì)胞立生芽管，芽管頂端產(chǎn)生附著胞，近球形，深褐色，緊貼附于寄主，產(chǎn)生生侵入絲侵入寄主組織內(nèi)。該菌可分做7群，128個(gè)生理小種。

3.侵染循環(huán)。病菌以分生孢子和菌絲體在稻草和稻谷上越冬。翌年產(chǎn)生分生孢子借風(fēng)雨傳播到稻株上，萌發(fā)侵入寄主向鄰近細(xì)胞擴(kuò)展發(fā)病，形成中心病株。病部形成的分生孢子，借風(fēng)雨傳播進(jìn)行再侵染。播種帶菌種子可引起苗瘟。適溫高濕，有雨、霧、露存在條件下有利于發(fā)病。菌絲生長(zhǎng)溫限8～37℃，最適溫度26～28℃。孢子形成溫限10～35℃，以25～28℃最適，相對(duì)濕度90%以上。孢子萌發(fā)需有水存在并持續(xù)6～8小時(shí)。適宜溫度才能形成附著胞并產(chǎn)生侵入絲，穿透稻株表皮，在細(xì)胞間蔓延攝取養(yǎng)分。陰雨連綿，日照不足或時(shí)晴時(shí)雨，或早晚有云霧或結(jié)露條件，病情擴(kuò)展迅速。品種抗性因地區(qū)、季節(jié)、種植年限和生理小種不同而異。秈型品種一般優(yōu)于粳型品種。同一品種在不同生育期抗性表現(xiàn)也不同，秧苗4葉期、分蘗期和抽穗期易感病，圓稈期發(fā)病輕，同一器官或組織在組織幼嫩期發(fā)病重。穗期以始穗時(shí)抗病性弱。偏施過(guò)施氮肥有利發(fā)病。放水早或長(zhǎng)期深灌根系發(fā)育差，抗病力弱發(fā)病重。

（二）水稻稻瘟菌的化學(xué)防治

一直以來(lái)化學(xué)防治具有經(jīng)濟(jì)、高效、方便、迅速等優(yōu)點(diǎn)，一直是稻瘟菌綜合治理體系中重要的部分，在病害大流行或品種抗病性喪失期間更是最主要的、不可替代的防治手段。現(xiàn)在已不再常用的重金屬類(lèi)、抗生素類(lèi)、有機(jī)氯類(lèi)就不再介紹了?，F(xiàn)在應(yīng)用比較廣泛的有黑色素抑制劑、有機(jī)磷類(lèi)與稻瘟靈、多菌靈類(lèi)以及新興的甲氧丙烯酸酯類(lèi)等。

（三）治療水稻稻瘟病的藥劑的研究進(jìn)展

目前使用的防治稻瘟菌的藥劑都是高毒性的，而且容易被病菌產(chǎn)生抗性。對(duì)防治稻瘟菌的化學(xué)藥劑的評(píng)價(jià)應(yīng)該全面考慮和權(quán)衡其對(duì)各個(gè)方面的影響和作用，不僅要考慮化學(xué)藥劑對(duì)使用者、消費(fèi)者以及自然環(huán)境的有害影響，也要考慮對(duì)農(nóng)業(yè)生產(chǎn)的貢獻(xiàn)?；瘜W(xué)藥劑中毒機(jī)制的研究為評(píng)價(jià)和防護(hù)提供了決策必要的科學(xué)依據(jù)。發(fā)展低毒高效的化學(xué)藥劑替代目前仍廣泛使用的高中毒防治稻瘟菌的化學(xué)藥劑是避免農(nóng)藥危害健康最根本的措施，而且通過(guò)對(duì)黑色素抑制劑等間接性藥劑的研究發(fā)現(xiàn)具有高度選擇性的間接作用化合物，不容易產(chǎn)生抗藥性，是以后研究的重點(diǎn)方向。

二、供試藥劑對(duì)稻瘟菌的室內(nèi)毒力測(cè)定

（一）實(shí)驗(yàn)材料和方法的篩選

1.材料和方法

（1）供試菌株。mk、060508.兩株菌種。菌種是在吉林大學(xué)植物科學(xué)學(xué)院病理實(shí)驗(yàn)室活化，并在4℃的冰箱中保存。

（2）供試藥劑

表1　試驗(yàn)供試藥劑

（3）供試培養(yǎng)基

PDA培養(yǎng)基：馬鈴薯200克、葡萄糖20克、瓊脂15-20克、蒸餾水1 000毫升。用于病菌培養(yǎng)以及室內(nèi)毒力測(cè)定。

培養(yǎng)基的制備：①根據(jù)配制量依次稱(chēng)取一定量的馬鈴薯、葡萄糖和瓊脂粉，稱(chēng)量時(shí)要迅速。②把馬鈴薯，洗凈去皮切成為小塊，加水煮爛（煮沸20至30分鐘，到能被玻璃棒戳破即可），用四層的紗布過(guò)濾。③根據(jù)實(shí)際的實(shí)驗(yàn)需要加葡萄糖和瓊脂，繼續(xù)加熱以及攪拌混勻，稍微冷卻后再補(bǔ)足水分至1 000毫升。④將配制好的培養(yǎng)基分裝到若干個(gè)三角瓶中，加好硅膠塞并標(biāo)好日期和培養(yǎng)基的名稱(chēng)等。⑤將裝好的培養(yǎng)基于121℃下滅菌20min，滅菌過(guò)程中要注意以下幾點(diǎn)：鍋內(nèi)的水位要加到水位線(xiàn)；排氣時(shí)要注意水蒸氣大量排出要維持5min后再關(guān)閉排氣閥；排氣時(shí)要慢慢的排放，不能過(guò)于急，避免因瓶?jī)?nèi)壓力下降的速度比鍋內(nèi)慢造成瓶?jī)?nèi)液體沖出容器之外；培養(yǎng)基經(jīng)滅菌之后，必須放在37°C的溫箱培養(yǎng)24h，無(wú)菌生長(zhǎng)方可使用：PDA培養(yǎng)基一般不需要調(diào)節(jié)pH值。培養(yǎng)基也可以加入氯霉素或土霉素，加入的量為0.1g/L培養(yǎng)基，主要是為了抑制細(xì)菌的生長(zhǎng)，減少干擾性。

2.研究方法

（1）藥液的配制。采用菌落生長(zhǎng)速率法進(jìn)行毒力的測(cè)定。根據(jù)預(yù)實(shí)驗(yàn)的結(jié)果，需設(shè)置藥劑終濃度如下表的5個(gè)濃度進(jìn)行毒力測(cè)定（每種藥劑必須設(shè)置空白對(duì)照）。

稻瘟靈　0.1　0.3　0.5　1　5嘧菌酯　0.1　0.3　0.5　1　5咪鮮胺　0.1　0.3　0.5　1　5苯醚甲環(huán)唑　0.1　0.3　0.5　1　55三環(huán)唑　0.1　0.3　0.5　1　5多菌靈　0.1　0.3　0.5　1　5

（2）不同濃度帶毒培養(yǎng)基的制作。將配制的105μg/mL的藥液用自己相對(duì)的溶液稀釋到5 000μg/mL、1 000μg/mL、500μg/mL、300μg/mL、100μg/mL的5個(gè)藥劑濃度，保存待用。在小三角瓶中加入35mLPDA培養(yǎng)基，先將35μL 100μg/mL的藥劑加入小三角瓶中，混勻后，倒入三個(gè)培養(yǎng)皿中，得到終濃度為0.1μg/mL的帶毒培養(yǎng)基。再用同樣的方法，依次由低濃度到高濃度，可獲得0.3μg/mL、0.5μg/mL、1μg/mL、5μg/mL的帶毒培養(yǎng)基。這樣由高到低的配制帶毒培養(yǎng)基可以降低誤差。

（3）菌餅的制備及實(shí)驗(yàn)操作。用打孔器在預(yù)培養(yǎng)好的同一直徑長(zhǎng)勢(shì)相同的菌落邊緣取菌餅，接種于不同濃度的培養(yǎng)基上，每個(gè)濃度3次重復(fù)，在恒溫箱28℃下培養(yǎng)7d，用十字交叉法測(cè)定菌落直徑。在取菌餅前一定要對(duì)打孔器進(jìn)行灼燒，燒后過(guò)一段時(shí)間等打孔器不太熱時(shí)，再取菌餅。

（4）EC50的計(jì)算。根據(jù)試驗(yàn)驗(yàn)結(jié)果測(cè)得的菌落直徑，按照下列公式求出藥劑各濃度對(duì)菌絲生長(zhǎng)的抑制率（%）：

抑制率（%）=對(duì)照菌落增長(zhǎng)直徑（mm）-處理菌落增長(zhǎng)直徑（mm）　×100對(duì)照菌落增長(zhǎng)直徑（mm）

將菌絲生長(zhǎng)抑制率換算成幾率值（y），藥劑濃度換算成10的對(duì)數(shù)（x）。按濃度的對(duì)數(shù)與幾率值回歸法求得不同濃度藥劑對(duì)水稻稻瘟病菌的毒力方程y=a+bx，并由毒力方程計(jì)算藥劑各濃度對(duì)水稻稻瘟病菌的抑制終濃度EC50。

（二）結(jié)果與分析

由試驗(yàn)得嘧菌酯對(duì)mk和060508兩株稻瘟菌的抑菌效果最好，平均EC50為0.0520μg/mL。稻瘟靈的平均EC50為0.0655μg/mL、咪鮮胺的平均EC50為0.0755μg/mL、多菌靈的平均EC50為0.395μg/mL、苯醚甲環(huán)唑的平均EC50為0.578μg/mL、三環(huán)唑的平均EC50為1.073μg/mL。由以上的數(shù)據(jù)可見(jiàn)嘧菌酯和稻瘟靈對(duì)mk和060508兩株稻瘟病菌的抑制作用較好，在防治實(shí)驗(yàn)中的兩株稻瘟菌mk和060508引起的稻瘟病的時(shí)候應(yīng)該選擇嘧菌酯和稻瘟靈這兩種藥劑。

表2-1　稻瘟靈對(duì)稻瘟菌室內(nèi)毒力測(cè)定

表2-2　嘧菌酯對(duì)稻瘟菌室內(nèi)毒力測(cè)定

表2-3　咪鮮胺對(duì)稻瘟菌室內(nèi)毒力測(cè)定

表2-4　三環(huán)唑?qū)Φ疚辆覂?nèi)毒力測(cè)定

表2-5　多菌靈對(duì)稻瘟菌室內(nèi)毒力測(cè)定

表2-6　苯醚甲環(huán)唑?qū)Φ疚辆覂?nèi)毒力測(cè)定

三、結(jié)論與討論

本試驗(yàn)通過(guò)室內(nèi)的6種藥劑對(duì)稻瘟病菌菌株的毒力測(cè)定結(jié)果表明，六種藥劑對(duì)稻瘟病菌生長(zhǎng)的抑制作用的結(jié)果存在著一定得差異。稻瘟病菌對(duì)嘧菌酯最為敏感，對(duì)稻瘟靈較為敏感，而其他藥劑對(duì)病原菌的抑制作用一般。這應(yīng)該是由于藥劑的作用機(jī)理得不同造成的。因此在防治稻瘟病時(shí)，應(yīng)選擇合適的藥劑、科學(xué)的用藥。目前生產(chǎn)上防止稻瘟病主要是以化學(xué)防治為輔的綜合防治手段，但在病情的多發(fā)期，化學(xué)防治仍然十分重要，常用的藥劑是：三環(huán)唑、苯醚甲環(huán)唑、咪鮮胺、多菌靈等。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明：稻瘟菌對(duì)嘧菌酯的敏感度最高。嘧菌酯對(duì)于水稻的稻瘟病來(lái)說(shuō)防治效果好于其他的五種藥劑，可以在生產(chǎn)上廣泛推廣施用。

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（編輯：劉國(guó)華）

S432.4+2

B

1673-9019（2016）03-0045-03

2016-01-13

康力（1987-），男，甘肅定西人，主要從事馬鈴薯良種生產(chǎn)研究。