孫占彪

（甘肅省定西市安定區(qū)種子管理站，甘肅定西743000）

寄生于甘薯和當(dāng)歸的莖線蟲形態(tài)學(xué)比較

孫占彪

（甘肅省定西市安定區(qū)種子管理站，甘肅定西743000）

本試驗對采自河北保定市危害甘薯的線蟲和甘肅岷縣危害當(dāng)歸的線蟲進(jìn)行了分離，并制作線蟲永久玻片。經(jīng)過對線蟲玻片的觀察以及顯微測量，再次確認(rèn)引起甘薯腐爛病和當(dāng)歸麻口病的病原主要是馬鈴薯腐爛莖線蟲（Ditylenchus destructor），又稱腐爛莖線蟲。進(jìn)一步分析測量數(shù)據(jù)表明，寄生于不同寄主上的腐爛莖線蟲形態(tài)測量值與G.Thome報道有出入，如G.Thome測量的腐爛莖線蟲雌蟲體長800～1 400μm，口針9.5～12.1μm，而甘薯上的莖線蟲雌蟲體長875～1 125μm，口針6.3～11.5μm，當(dāng)歸上的莖線蟲雌蟲體長1 050～1 562μm，口針7.3～12.6μm。且在體寬、尾部長、食道長等方面也發(fā)生了變化。

甘薯；當(dāng)歸；莖線蟲；腐爛莖線蟲；形態(tài)學(xué)

甘薯莖線蟲病亦稱甘薯腐爛病，是由腐爛莖線蟲［1］（Ditylenchusdestructor）引起的病害。主要危害甘薯塊莖，莖蔓和秧苗，是一種毀滅性病害，嚴(yán)重影響甘薯產(chǎn)量和品質(zhì)，被我國列入檢疫性病害。甘薯腐爛病既可在田間直接造成減產(chǎn)，也可造成貯藏期爛窖，除了為害甘薯，還為害馬鈴薯、蘿卜、豆類、花生、蕎麥、大蒜、蓖麻、薄荷、馬齒莧等多種植物。該病1937年從日本傳入我國，20世紀(jì)70年代曾一度嚴(yán)重發(fā)生，后因措施得力，病情緩解，進(jìn)入20世紀(jì)90年代，此病有所回升，1995-1999年間，在我國山東、河南、河北、吉林等地均有此病嚴(yán)重發(fā)生的報道［2］。

當(dāng)歸麻口病是當(dāng)歸的重要病害，在我國當(dāng)歸產(chǎn)區(qū)甘肅、陜西、云南、貴州、四川均有發(fā)生［3］。在甘肅當(dāng)歸產(chǎn)區(qū)，近年來當(dāng)歸麻口病的危害趨于嚴(yán)重，對岷縣、渭源、宕昌、漳縣等地的“岷歸”生產(chǎn)影響很大，造成了巨大的經(jīng)濟(jì)損失，成為影響“岷歸”生產(chǎn)及其品牌的重要因素。陳品三、鄭經(jīng)武等［4］人在1986年7月對危害當(dāng)歸麻口病的病原進(jìn)行分離和鑒定，認(rèn)為該病系莖線蟲為害所致。

寄生于甘薯和當(dāng)歸上的莖線蟲在分類上屬墊刃目，粒線蟲科、莖線蟲屬［4］。由于甘薯和當(dāng)歸生長環(huán)境不同，以及莖線蟲的危害部位不同，可能造成寄生在其上的莖線蟲形態(tài)存在一定差異。所以，本實驗對寄生于甘薯和當(dāng)歸上的莖線蟲進(jìn)行了分離，觀察并顯微測量了線蟲的體值，以了解寄生于不同寄主的莖線蟲的在形態(tài)學(xué)上的差異，進(jìn)一步了解其致病性的差異，從而為甘薯腐爛病和當(dāng)歸麻口病的防治提供依據(jù)。

一、材料和方法

（一）試驗材料

供試材料采自甘薯甘肅岷縣的當(dāng)歸病塊根。

（二）試驗方法

1.莖線蟲標(biāo)本的采集。將采集的甘薯病薯塊和當(dāng)歸病塊根置于塑料袋中，貼好標(biāo)簽，帶回實驗室，放在冰箱（4℃～10℃）中保存?zhèn)溆谩?/p>

2.莖線蟲的分離。本實驗采取的分離方法是貝曼漏斗法：選用直徑10～14cm的玻璃漏斗，下面接一段乳膠管，乳膠管上裝一個止水夾，在漏斗中裝入清水，將漏斗置于架上，把切碎的植物材料用2～3層韌性較好的高級面巾紙包好，輕輕地放在漏斗中，24～48小時后，線蟲由于其趨水性和自身的重量下沉至漏斗下的乳膠管中，用指形管接在乳膠管下，松開止水夾，收集線蟲懸浮液［5］。

3.莖線蟲標(biāo)本的制作和保存。

（1）線蟲的殺死

將線蟲懸浮液放在試管中，把試管放在65℃的水浴箱中2 min10 s殺死線蟲，水浴過程中輕輕振蕩試管使受熱均勻。此時，熱殺死的蟲常呈僵直或規(guī)則卷曲狀態(tài)，便于觀察和顯微測量。

（2）線蟲的固定

大量的線蟲殺死后，立即進(jìn)行固定。在線蟲懸浮液中加等量的濃度雙倍的固定液即可完成固定。本實驗選用FG固定液（福爾馬林∶甘油∶蒸餾水=10∶1∶89）。

（3）線蟲的脫水

實驗采取是甘油—乙醇脫水法。需要配置兩種脫水液，即脫水液I和脫水液II。

（脫水液I∶96%乙醇20mL，甘油1mL，蒸餾水79mL；脫水液II∶96%乙醇95mL，甘油5mL）

脫水步驟如下：

A.在稱量瓶中加入約為其容積1/2的脫水液I，將已固定的線蟲挑入其中。

B.加3～4滴3%苦味酸溶液（防止口針透明），將其放在40～45℃溫箱內(nèi)12小時以上。

C.取出稱量瓶，半蓋上蓋，放入40℃的溫箱內(nèi)，使其自由揮發(fā)。

D.等到稱量瓶中的溶液不足其容積的1/2時，加滿脫水液II，半蓋上蓋，放入40℃的溫箱內(nèi)。每隔2～3小時重復(fù)加脫水液II（3～4次）。

（4）莖線蟲的制片保存

為了便于形態(tài)觀察和體制測量，需要對線蟲標(biāo)本進(jìn)行制片保存，將直徑1.5cm的打孔器在酒精燈火焰上加熱后，插在蠟盤中蘸取少量石蠟（熔點54℃），并迅速輕按于載玻片中央。待冷卻后即形成一個蠟圈。在蠟圈內(nèi)滴一小滴純甘油（用量以蓋上蓋玻片后不外溢為宜）作為浮載劑，將已脫水的線蟲5～10條挑入其中，排列整齊，并將與線蟲直徑相近的3根長3～5mm的玻璃絲均勻置于浮載劑邊緣，加蓋玻片后，將載玻片移至65～70℃的加熱板上熔蠟，待蠟熔化后移至實驗臺上冷卻，用中性樹膠封片，待干后再封一次，最后貼上標(biāo)簽［5］，保存以備后用。

4.莖線蟲的形態(tài)學(xué)比較。

將已經(jīng)制片保存的莖線蟲標(biāo)本在顯微鏡下觀察，顯微測量線蟲體長、體寬、口針、尾長等體值，并進(jìn)行形態(tài)描述和顯微照相，然后查閱有關(guān)文獻(xiàn)［6-8］，進(jìn)一步明確寄生于甘薯和當(dāng)歸的莖線蟲形態(tài)學(xué)差異。

二、結(jié)果與分析

（一）癥狀描述

甘薯腐爛病主要為害薯塊、莖蔓和幼苗。在大田中選擇具有典型癥狀的甘薯病株分別進(jìn)行地上和地下部分的調(diào)查，發(fā)病株地上部分多表現(xiàn)為生長緩慢、參差不齊。苗期染病表皮破裂成小口，髓部呈色干腐狀。莖蔓染病主蔓基部拐子上表皮出現(xiàn)黃褐色裂紋，后漸成褐色，髓部呈白色干腐，嚴(yán)重的基蔓短，葉變黃或主蔓枯死，根部染病表皮壞疽或開裂。薯塊受害后，薯皮皮層呈青色至暗紫色，病部凹陷，內(nèi)部糠心，呈褐、白相間的干腐（圖1）。

當(dāng)歸麻口病主要發(fā)生在當(dāng)歸成藥期（栽植后第2年）發(fā)病植株地上部分無明顯癥狀，主要在根部發(fā)生。感染初期，根部外表無癥狀表現(xiàn)，但其縱切面可見褐色糠腐狀侵染點，病情發(fā)展后，根部表皮縱裂成黃褐色裂紋，深約1～2mm，且根毛增多，畸形，嚴(yán)重時整個根部皮層組織干爛，呈褐色糠腐狀，但腐爛部位一般不超過形成層，僅見個別根部腐爛達(dá)維管束組織（圖2）。

（二）線蟲形態(tài)描述

甘薯上的腐爛莖線蟲雌蟲和雄蟲皆為線性（圖3-A）。雌蟲一般較雄蟲略粗大，雌蟲蟲體前端有口，周圍有近似三角形的唇片，其上有細(xì)微的環(huán)紋?？卺樆壳蛐《黠@；中食道球稍覆蓋于腸的背面（圖3-B、C）。陰門橫裂，位于蟲體后部，陰唇略隆起。后陰子宮囊大，延伸至陰門至肛門2/3-4/5處。尾呈錐狀，稍向腹面彎曲，末端窄圓（圖3-D）；直腸和肛門明顯，尾長約為肛門部體寬的3-5倍。交合傘起始于交合刺前端水平處向后延伸達(dá)尾部3/4；交合刺成對，朝腹部彎曲，前端膨大具指狀突。

當(dāng)歸上的腐爛莖線蟲雌、雄蟲均呈線性，蟲體前端稍鈍，唇區(qū)平滑，尾部呈長圓錐形，末端鈍尖，蟲體表面角質(zhì)層上有細(xì)密環(huán)紋，側(cè)線6條，食道為墊刃型，中食道球卵圓形 （圖3-E），食道腺葉狀，陰門橫裂（圖3-F）、陰唇稍突起，后子宮囊一般達(dá)陰門至肛門2/3處，后部寬大，前部逐漸變尖，中央有兩個之狀突起，交合傘（圖3-G）包至尾部（圖3-I）的2/3-3/4處，交合刺成對，朝腹部彎曲（圖3-H）。

（三）測量數(shù)據(jù)

圖1　甘薯腐爛病　

圖2　當(dāng)歸麻口病

從甘薯和當(dāng)歸上分離的莖線蟲中分別測量雌蟲、雄蟲各20條，按捷曼公式［9-10］進(jìn)行測量計算，其測量結(jié)果（表1）為：甘薯上：雌蟲體長875.00-1125.00μm，體寬23.00～48.85μm，口針長6.27～11.50μm，尾長37.50～62.50μm；雄蟲體長965.58～1492. 26μm，體寬18.75～50.00μm，口針長6.27～11.50μm，尾長50.15～98.76μm。當(dāng)歸上：雌蟲體長1 050.00～1562.50μm，體寬25.64-56.25μm，口針長7.32-12.55μm，

尾長43.91-76.38μm；雄蟲體長為887.50-1437.50μm，體寬為27.50-52.50μm.，

口針長8.36-12.55μm，尾長37.50-75.00μm。

圖3　腐爛莖線蟲在兩種寄主上的形態(tài)

表1　寄生于甘薯和當(dāng)歸上的莖線蟲與腐爛莖線蟲數(shù)值測量的比較

［1］劉維志，劉清利，尼秀媚.馬鈴薯腐爛莖線蟲Ditylenchusdestructus ThQme，1945的描述［J］.萊陽農(nóng)學(xué)院學(xué)報，2003，20：1-3.

［2］尹光德，張云美.甘薯莖線蟲病病原線蟲的訂正［J］.山東農(nóng)大學(xué)報，1983，4：117-127.

［3］馬象震，苗曉春.當(dāng)歸麻口病的發(fā)生及其綜合防治［J］.甘肅農(nóng)業(yè)科技，2008，11（2）：53-54.

［4］陳品三，鄭經(jīng)武.當(dāng)歸麻口病中致病莖線蟲的鑒定研究［J］.植物保護(hù)學(xué)報，1988，14（6）：12-14.

［5］方中達(dá).植病研究方法［M］.第3版.北京：中國農(nóng)業(yè)出版社.1998：285-289.

［6］王玉娟，盛秀蘭，孫政，等.當(dāng)歸麻口病的研究［J］.植物病理學(xué)報，1990，20（1）：13-19.

［7］郭全新，簡恒.危害馬鈴薯的莖線蟲分離鑒定［J］.植物保護(hù)學(xué)報，2010，36（3）：117-120.

［8］丁再福，林茂松.甘薯、馬鈴薯和薄荷上的莖線蟲的鑒定［J］.植物保護(hù)學(xué)報，1982，9（3）：169-172.

［9］趙雅峰，王曉東，張瓊，謝方生.新疆甘薯莖線蟲生物學(xué)特性的初步研究［J］.石河子大學(xué)學(xué)報，2007，25（1）：43-45.

［10］張紹升，章淑玲，王宏毅，陳玉芬.甘薯莖線蟲的形態(tài)特征［J］.植物病理學(xué)報，2006，36（1）：22-27.

［11］劉先寶，葛建軍，譚志瓊，曹愛新.馬鈴薯腐爛莖線蟲在國內(nèi)危害馬鈴薯的首次報道［J］.植物保護(hù)學(xué)報，2006，32（6）：157-158.

［12］趙雅峰，王曉東，張瓊，謝方生.新疆甘薯莖線蟲生物學(xué)特性的初步研究［J］.石河子大學(xué)學(xué)報，2007，25（1）：43-45.

（編輯：劉國華）

S435.32

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1673-9019（2016）03-0040-03

2016-01-06

孫占彪（1986-），男，甘肅定西人，主要從事農(nóng)作物種子質(zhì)量監(jiān)督檢測工作。