葉淦康，張應(yīng)洪，彭　琪，李文瑞

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手足口病診斷中腸道病毒71型核酸與抗體檢測(cè)的應(yīng)用意義探究

葉淦康，張應(yīng)洪，彭琪，李文瑞

目的研究探討腸道病毒71型(EV-71)核酸和抗體聯(lián)合檢測(cè)在手足口病診斷中的應(yīng)用價(jià)值。方法選取我院收治的已確診為手足口病患者1036例作為研究對(duì)象，分別對(duì)其進(jìn)行EV-71核酸與抗體檢測(cè)，計(jì)算單獨(dú)行EV-71核酸檢測(cè)和抗體檢測(cè)的陽(yáng)性率及聯(lián)合檢測(cè)的總符合率。同時(shí)，對(duì)兩種檢測(cè)方法的一致性進(jìn)行分析，判斷其吻合程度。結(jié)果1036例手足口病患兒?jiǎn)为?dú)行EV-71核酸檢測(cè)和單獨(dú)行抗體檢測(cè)的陽(yáng)性率分別為72.9%和72.5%，兩種方法診斷陽(yáng)性率比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=0.04，P>0.05)。其中，兩者全陽(yáng)性的比例為69.6%，全陰性的比例為24.2%。EV-71抗體核酸檢測(cè)與EV-71抗體檢測(cè)的總符合率為93.8%(972/1036)，對(duì)其進(jìn)行一致性分析(Kappa=0.98，P<0.01)，提示兩種方法具有較高吻合性。結(jié)論EV-71核酸和抗體都是臨床診斷手足口病的有效方法，聯(lián)合檢測(cè)可發(fā)揮互補(bǔ)優(yōu)勢(shì)，降低早期漏診率，為患兒后續(xù)治療提供可靠依據(jù)。

手足口??；腸道病毒71型；核酸；抗體；聯(lián)合檢測(cè)

手足口病是一種常見(jiàn)的兒科急性傳染性疾病，患兒多出現(xiàn)發(fā)熱、手足口部皰疹等臨床癥狀[1]。部分患兒隨著病情的發(fā)展還會(huì)出現(xiàn)肺部水腫、心肌炎、無(wú)菌性腦膜炎、呼吸衰竭等嚴(yán)重并發(fā)癥。如不及時(shí)進(jìn)行治療，可導(dǎo)致患兒死亡。研究顯示，手足口病主要是由腸道病毒感染引起，對(duì)引起感染的腸道病毒進(jìn)行早期檢測(cè)對(duì)于患者的治療、預(yù)后改善等具有十分重要的意義。本文就我院收治的1036例手足口病患者作為研究對(duì)象，探討腸道病毒71型(EV-71)核酸和抗體聯(lián)合檢測(cè)在手足口病診斷中的應(yīng)用價(jià)值。

1　資料與方法

1.1一般資料選取我院2013年1月～2015年9月收治的手足口病患者1036例作為研究對(duì)象。所有的患兒均符合《手足口病預(yù)防控制指南》中規(guī)定的診斷標(biāo)準(zhǔn)[2]，并經(jīng)臨床其他相關(guān)診斷確診。1036例手足口病患兒中，男682例，女354例；年齡0.5～11(2.1±1.5)歲?；純壕鶠榧毙云鸩?，并表現(xiàn)出不同程度的發(fā)熱、皰疹(皰疹的分布位置可位于口腔粘膜、手部、足部、臀部等，部分患兒在皰疹的周?chē)€會(huì)有炎性紅暈表現(xiàn)，皰疹內(nèi)有少量液體)、食欲不振、咳嗽、流涕等癥狀。極少數(shù)患兒只有皰疹或皮疹表現(xiàn)，不伴發(fā)熱癥狀。

1.2方法分別對(duì)患兒進(jìn)行EV-71核酸與抗體檢測(cè)。

EV-71核酸檢測(cè)：在發(fā)病早期和抗生素使用前采集患兒的糞便標(biāo)本；采集后暫存于4℃冰箱，48 h內(nèi)冷鏈轉(zhuǎn)運(yùn)至檢驗(yàn)科進(jìn)行處理、分裝。采用中山大學(xué)達(dá)安基因股份有限公司生產(chǎn)的EV71-RNA檢測(cè)試劑盒，以RT-PCR方法進(jìn)行檢測(cè)，嚴(yán)格遵照試劑盒說(shuō)明書(shū)的要求進(jìn)行操作。

EV-71 抗體檢測(cè)：清晨空腹采集患兒的靜脈血3 ml，經(jīng)離心(轉(zhuǎn)速3000 r/min，時(shí)間10 min)分離后獲得血清標(biāo)本，置于-20℃的冰箱中保存，待檢。采用免疫層析法(ICA)對(duì)EV71-IgM抗體進(jìn)行檢測(cè)，檢測(cè)試劑盒來(lái)源于上海金標(biāo)生物科技有限公司。將患兒的標(biāo)本置于樣本處理管中，加入0.2 mol/L的鹽酸7滴，混合均勻后，將3～4滴混懸液加入到加樣孔中，觀(guān)察試紙條的檢測(cè)區(qū)(T區(qū))與對(duì)照區(qū)(C區(qū))是否有紅線(xiàn)出現(xiàn)，C區(qū)和T區(qū)同時(shí)出現(xiàn)紅線(xiàn)為陽(yáng)性，只有C區(qū)有紅線(xiàn)出現(xiàn)為陰性，C區(qū)未見(jiàn)紅線(xiàn)出現(xiàn)為無(wú)效，需重新進(jìn)行檢測(cè)。

1.3觀(guān)察指標(biāo)計(jì)算單獨(dú)行EV-71核酸檢測(cè)、EV-71 抗體檢測(cè)的陽(yáng)性率及聯(lián)合檢測(cè)的總符合率。同時(shí)，對(duì)兩種檢測(cè)方法的一致性進(jìn)行分析，判斷其吻合程度。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)方法數(shù)據(jù)采用SPSS 21.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，定性數(shù)據(jù)比較采用χ2檢驗(yàn)。

2　結(jié)　果

1036例手足口病患兒?jiǎn)为?dú)行EV-71核酸檢測(cè)和單獨(dú)行EV-71抗體檢測(cè)的結(jié)果，見(jiàn)表1。EV-71型核酸檢測(cè)陽(yáng)性率為72.9%(755/1036)，EV-71抗體檢測(cè)陽(yáng)性率為72.5%(751/1036)；兩種方法診斷腸道病毒的陽(yáng)性率比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=0.04，P>0.05)。其中，兩者全陽(yáng)性的比例為69.6%，全陰性的比例為24.2%。EV-71核酸檢測(cè)與EV-71抗體檢測(cè)的總符合率為93.8%(972/1036)。對(duì)其進(jìn)行一致性分析(Kappa=0.98，P<0.01)，提示兩種方法具有較高的吻合性。

表1　腸道病毒71型核酸和抗體檢測(cè)診斷手足口病結(jié)果　[例(%)]

3　討　論

引起手足口病的病毒種類(lèi)較多，包括柯薩奇病毒A4、5、9、10、16型、柯薩奇病毒B 2、5型及腸道病毒71型等多種，最常見(jiàn)的當(dāng)屬EV-71和柯薩奇病毒A16型，二者均為小RNA病毒科腸道病毒屬的成員[3]。而EV-71感染更被認(rèn)為是導(dǎo)致手足口病患兒死亡的最主要的原因之一，其可以通過(guò)接觸傳播、飛沫傳播等多種形式實(shí)現(xiàn)感染，且傳染性較強(qiáng)，能在短時(shí)間內(nèi)造成較大范圍的流行[4]。需要注意的是，引起手足口病的病毒不同，雖然其臨床癥狀相近，鑒別困難，但治療方法存在一定的差異，需要通過(guò)實(shí)驗(yàn)室方法進(jìn)行正確判斷方可為患兒的治療提供最可靠的依據(jù)[5]。雖然傳統(tǒng)的病原學(xué)檢查依然是目前臨床上確診手足口病的金標(biāo)準(zhǔn)，但是考慮到其檢測(cè)周期相對(duì)較長(zhǎng)，且對(duì)實(shí)驗(yàn)設(shè)備、檢測(cè)技術(shù)等要求較高，在臨床檢測(cè)中并未得到普及和推廣。目前，臨床診斷手足口病感染病毒的實(shí)驗(yàn)室方法包括：血清學(xué)抗體檢測(cè)、中和抗體檢測(cè)、RT-PCR核酸檢測(cè)、間接免疫熒光法檢測(cè)、免疫組化法檢測(cè)以及病毒分離等，而血清學(xué)抗體檢測(cè)與核酸檢測(cè)具有操作簡(jiǎn)便易行、標(biāo)本可批量處理等的優(yōu)點(diǎn)，在臨床上具有較為廣泛的應(yīng)用[6]。

本文1036例來(lái)自門(mén)診或住院的手足口病患兒均通過(guò)RT-PCR法和免疫層析法對(duì)EV-71核酸與抗體進(jìn)行了檢測(cè)。結(jié)果顯示，其檢測(cè)陽(yáng)性率分別為72.9%和72.5%，差異較小，對(duì)其進(jìn)行一致性分析，也顯示兩種方法具有較高的吻合性，提示通過(guò)腸道病毒核酸和抗體檢測(cè)都是臨床診斷手足口病的有效方法。EV-71的核酸檢測(cè)可以通過(guò)RT-PCR技術(shù)對(duì)其基因的表達(dá)情況進(jìn)行定性及定量檢測(cè)，判斷EV-71是否存在及其存在量，其缺點(diǎn)在于檢測(cè)過(guò)程中會(huì)出現(xiàn)較高的假陽(yáng)性率和假陰性率。而在EV-71的血清學(xué)抗體檢測(cè)過(guò)程中，常用酶聯(lián)免疫法和免疫層析法。曹珂等[7]的研究顯示，免疫層析法診斷EV71-IgM抗體的陽(yáng)性率(50.4%)高于酶聯(lián)免疫法(25.6%)，這與患兒的標(biāo)本采集時(shí)間有關(guān)。潘錦華等[8]的研究顯示，采用酶聯(lián)免疫法對(duì)EV71-IgM抗體進(jìn)行檢測(cè)時(shí)，其檢測(cè)陽(yáng)性率可隨入院時(shí)間的延長(zhǎng)而增加，至發(fā)病的第5天，達(dá)到最大值；而在發(fā)病早期，通過(guò)免疫層析法檢測(cè)可以通過(guò)色帶的辨別對(duì)檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行判斷。本文通過(guò)免疫層析法診斷EV71-IgM抗體的陽(yáng)性率也達(dá)到72.5%，與PT-PCR的陽(yáng)性率72.9%接近。

本文還對(duì)EV-71核酸和抗體檢測(cè)的總符合率進(jìn)行了計(jì)算，可以達(dá)到93.8%，高于王瑜[9]88.4%的檢測(cè)結(jié)果，但與彭蘭芬等[10]的研究結(jié)果比較相近(聯(lián)合檢測(cè)腸道病毒核酸和抗體的總符合率為81.7%)。這可能與患兒的選擇、樣本量大小不同等有一定的關(guān)系。彭蘭芬等的研究中還對(duì)血清學(xué)抗體檢測(cè)陽(yáng)性患者的主要臨床表現(xiàn)進(jìn)行了分析，發(fā)現(xiàn)血清學(xué)抗體陽(yáng)性的患者多在皮疹出現(xiàn)后3 d左右入院治療，只有極少數(shù)患者為重癥急診入院。由于患者抗體產(chǎn)生多在手足口病皮疹出現(xiàn)后的2 d以上，重癥急診患者在行血清抗體檢測(cè)的過(guò)程中難免會(huì)有假陰性的情況出現(xiàn)，這時(shí)需結(jié)合其臨床表現(xiàn)(如高熱、手腳不受控制的抖動(dòng)等)進(jìn)行判斷。為改善單純依靠IgM抗體檢測(cè)存在的局限性，在患者患病早期階段或者免疫功能比較低下的情況時(shí)，聯(lián)合進(jìn)行病毒RNA檢測(cè)可以減少漏診的發(fā)生。本文研究的核酸和抗體聯(lián)合檢測(cè)可以充分發(fā)揮互補(bǔ)優(yōu)勢(shì)，為患兒的后續(xù)治療提供可靠依據(jù)，頗具臨床應(yīng)用價(jià)值。

[1]余鵬博，馬超鋒，關(guān)路媛，等.腸道病毒EV71感染后標(biāo)志物變化特點(diǎn)分析[J].中華疾病控制雜志，2014,18(1):40-43.

[2]黃建國(guó),吳立文,駱志輝,等.手足口病腸道病毒EV71和CoxA16感染的檢測(cè)分析[J].實(shí)驗(yàn)與檢驗(yàn)醫(yī)學(xué),2011,29(3):328-329.

[3]杜陽(yáng)光，楊晉川，晏嘉璐,等.血清中EV71型IgM抗體檢測(cè)對(duì)手足口病診斷的意義[J].中華全科醫(yī)學(xué),2011,9(10):1574-1575.

[4]商新梅，商慧，周安仁，等.982 例手足口病患者EV71-IgM抗體檢測(cè)結(jié)果分析[J].檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)與臨床,2013,10(9):1169-1171．

[5]李金明,熊德琴,齊曉彤,等.實(shí)時(shí)熒光定量PCR在手足口病病原體檢測(cè)中的應(yīng)用[J].實(shí)驗(yàn)與檢驗(yàn)醫(yī)學(xué),2011,29(2):129-130.

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[7]曹珂，劉會(huì)彩．兩種方法用于手足口病早期患兒抗EV71-IgM抗體檢測(cè)價(jià)值比較[J]．社區(qū)醫(yī)學(xué)雜志，2015，13(4) ：43-45．

[8]潘錦華，羅建輝，楊國(guó)清，等．腸道病毒 71 型 IgM 抗體在手足口病診斷中的臨床應(yīng)用價(jià)值研究[J]．實(shí)驗(yàn)與檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)，2015，33(1)：72-74.

[9]王瑜．聯(lián)合檢測(cè)手足口病腸道病毒71型RNA及IgM結(jié)果分析[J].醫(yī)藥論壇雜志，2014，35(9)：31-34.

[10]彭蘭芬，張少豐，付文金，等．腸病毒EV71_IgM抗體與核酸檢測(cè)在手足口病診斷中的價(jià)值[J]．中國(guó)熱帶醫(yī)學(xué)，2011，11(3)：274-276.

(2016-02-28收稿2016-05-16修回)

(本文編輯孫雙田)

廣東省東莞市社會(huì)科技發(fā)展項(xiàng)目(編號(hào)：2014108101028)

523325廣東省東莞市第八人民醫(yī)院檢驗(yàn)科

張應(yīng)洪，E-mail：1193637176@qq.com

[中國(guó)圖書(shū)資料分類(lèi)號(hào)]R 512.5B

10.16485/j.issn.2095-7858.2016.03.021