陳麗如,劉 源,聶 瑋,馬麗娜·阿新拜,朱夢(mèng)云,張立平北京中醫(yī)藥大學(xué)東方醫(yī)院,北京00078;2北京中醫(yī)藥大學(xué)國(guó)際交流與合作處
柴芪湯對(duì)代謝綜合征模型大鼠血清TNF-α 及IL-6水平的影響*
陳麗如1,劉源1,聶瑋1,馬麗娜·阿新拜1,朱夢(mèng)云1,張立平2△
1北京中醫(yī)藥大學(xué)東方醫(yī)院,北京100078;2北京中醫(yī)藥大學(xué)國(guó)際交流與合作處
目的:觀察柴芪湯對(duì)飲食誘發(fā)的代謝綜合征(MS)模型大鼠血清腫瘤壞死因子-α(TNF-α)及白細(xì)胞介素-6(IL-6)水平的影響,探討柴芪湯改善代謝綜合征的作用機(jī)制。方法:將32只SPF級(jí)雄性SD大鼠隨機(jī)分為正常組、模型組、柴芪湯組和羅格列酮組,除正常組外其他各組用高鹽高脂高糖飲食喂養(yǎng)8周,用藥組從造模第1天開始給予柴芪湯[5.67 g/(kg·d)]、羅格列酮混懸液[3mg/(kg·d)]灌胃干預(yù),8周后檢測(cè)大鼠血清血糖及胰島素,評(píng)價(jià)胰島素抵抗情況,并采用ELISA法檢測(cè)各組大鼠血清中TNF-α及IL-6的水平。結(jié)果:模型組大鼠血糖(FBG)、胰島素、胰島素抵抗指數(shù)(IRI)、血清TNF-α及IL-6水平明顯高于正常組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05);用藥組各項(xiàng)指標(biāo)低于模型組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05);大鼠血糖、胰島素及胰島素抵抗指數(shù)柴芪湯組與羅格列酮組比較,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05),柴芪湯組TNF-α及IL-6水平較羅格列酮組明顯降低,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。結(jié)論:柴芪湯可能通過影響血清TNF-α和IL-6水平而改善MS,早期使用柴芪湯可干預(yù)MS的形成。
代謝綜合征;動(dòng)物實(shí)驗(yàn);大鼠;柴芪湯;腫瘤壞死因子-α;白細(xì)胞介素-6
代謝綜合征(m etabo l i c sy n dro m e,M S)是一組癥候群,其主要表現(xiàn)為:胰島素抵抗(i n s u l i n res i sta n ce,I R)、中心性肥胖、高血壓、高胰島素血癥及脂質(zhì)代謝紊亂,是心腦血管疾病危險(xiǎn)因子的聚集狀態(tài),可最終導(dǎo)致心腦血管疾病惡性事件的發(fā)生[1]。I R被認(rèn)為是M S發(fā)病的中心環(huán)節(jié)及病理生理基礎(chǔ)。以往對(duì)胰島素抵抗的研究主要圍繞著靶器官和胰島素受體進(jìn)行,近年來,相關(guān)研究認(rèn)為I R是一個(gè)慢性亞臨床炎癥過程[2]。在此過程中,胰島素信號(hào)通路與炎性信號(hào)通路相互作用最終引起I R。發(fā)生I R的分子機(jī)制錯(cuò)綜復(fù)雜,目前主要認(rèn)為與胰島素信號(hào)傳導(dǎo)障礙以及炎性因子等異常表達(dá)有關(guān)。本研究擬采用高鹽高脂高糖飲食誘導(dǎo)M S大鼠模型,檢測(cè)血糖(F B G)、胰島素(F I N S)以及血清中腫瘤壞死因子-α(TNF-α)及白細(xì)胞介素-6(I L-6)水平,初步探討具有健脾疏肝、活血化瘀功效的柴芪湯對(duì)M S大鼠血清炎性因子的影響及改善M S的機(jī)制。
1.1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物S P F級(jí)S D雄性大鼠6~8周齡,體質(zhì)量(200±20)g,共32只購于北京維通利華實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)有限公司[合格證號(hào):S C X K(京2012-0001)]。
1.2藥物及試劑柴芪湯(柴胡10 g,黃芪30 g,白術(shù)10 g,枳實(shí)10 g,三七粉3 g)由北京中醫(yī)藥大學(xué)東方醫(yī)院中藥房代煎制備。羅格列酮(葛蘭素史克公司生產(chǎn),批號(hào):H20020475)。高鹽高脂高糖飼料(北京科澳協(xié)力飼料有限公司提供,由52.5%基礎(chǔ)飼料,10%熟豬油,10%蛋黃粉,2%膽固醇,10%奶粉,10%果糖,5%食用鹽,0.5%膽鹽組成)。胰島素放免檢測(cè)試劑盒(北京華英生物技術(shù)研究所提供,批號(hào):20141201)。葡萄糖試劑盒購買于中生北控生物科技股份有限公司。TNF-α及I L-6的E L I S A試劑盒購于武漢伊萊瑞特生物科技有限公司。
1.3實(shí)驗(yàn)方法將32只大鼠適應(yīng)性喂養(yǎng)1周后,按隨機(jī)數(shù)字表法隨機(jī)分為4組:正常組、模型組、柴芪湯組與羅格列酮組,每組8只。除正常組給予普通飼料外,其余3組均給予高鹽高脂高糖飼料喂養(yǎng)8周。自造模第1天開始持續(xù)灌胃8周,柴芪湯組給予柴芪湯5.67 g/(k g·d)(按“人和動(dòng)物體表面積折算的等效劑量比值表”計(jì)算),羅格列酮組予羅格列酮混懸液3mg/(k g·d),正常組及模型組給予10mL/(k g·d)蒸餾水對(duì)照。飼養(yǎng)8周后禁食不禁水12小時(shí),以10%水合氯醛溶液(4mL/k g)腹腔注射麻醉后,于腹主動(dòng)脈取血,靜置1小時(shí),置于離心機(jī)4℃,3 000 r/m i n離心15分鐘,分離上層血清。試劑盒檢測(cè)F B G及F I N S水平,用穩(wěn)態(tài)模型H O M A,計(jì)算胰島素抵抗指數(shù)(I R I):(F B G× F I N S)/22.5。按照E L I S A試劑盒說明書測(cè)定TNF-α 及I L-6水平。
1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)方法應(yīng)用S P SS 17.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理,計(jì)量資料用(±s)表示,采用單因素方差分析(o n e-way A N O V A),P<0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
2.1各組大鼠血清FBG、FINS及IRI干預(yù)8周后F B G模型組較正常組明顯升高(P<0.05);F B G柴芪湯組比模型組明顯下降,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05);干預(yù)8周后F B G值羅格列酮組較模型組降低,但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。模型組F I N S顯著高于正常組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。柴芪湯組和羅格列酮組大鼠F I N S水平低于模型組,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),與正常組比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。模型組大鼠I R I升高,與正常組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),柴芪湯組和羅格列酮組大鼠I R I與正常組比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05),與模型組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.05)。柴芪湯組與羅格列酮組比較,F(xiàn) B G、F I N S及I R I差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見表1。
表1 各組大鼠血清FGB、FINS及IRI(±s)
表1 各組大鼠血清FGB、FINS及IRI(±s)
注:#表示與正常組比較,P<0.05;*表示與模型組比較,P<0.05。
組別 只數(shù) FBG/(mmol·L-1) FINS/(uIU·mL-1) IRI正常組 8 5.68±0.41 13.49±1.54 3.39±0.33模型組 8 6.66±0.67# 15.76±1.11# 4.68±0.68#柴芪湯組 8 5.43±1.09* 14.18±0.57* 3.42±0.68*羅格列酮組 8 6.16±1.15 14.16±1.86* 3.87±0.85*
2.2各組大鼠血清TNF-α及IL-6含量模型組大鼠血清TNF-α水平與正常組比較顯著升高(P<0.05);給藥后,柴芪湯組及羅格列酮組血清中TNF-α水平均顯著降低(P<0.05),且柴芪湯組TNF-α水平較羅格列酮組更低,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。模型組大鼠血清I L-6水平升高,與正常組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05);用藥組I L-6水平較模型組均明顯降低,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05);I L-6水平柴芪湯組低于羅格列酮組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見表2。
表2 各組大鼠血清TNF-α及IL-6(±s) ng/L
表2 各組大鼠血清TNF-α及IL-6(±s) ng/L
注:#表示與正常組比較,P<0.05;*表示與模型組比較,P<0.05;※表示與柴芪湯組比較,P<0.05。
組別 只數(shù) TNF-α IL-6正常組 8 199.68±5.23 91.45±7.23模型組 8 256.91±7.36# 123.06±4.96#柴芪湯組 8 208.19±7.75* 100.03±3.71*羅格列酮組 8 237.08±7.85*※ 116.03±7.17*※
3.1動(dòng)物模型的選擇及建立嚙齒類動(dòng)物與人類的親緣關(guān)系相對(duì)較近,價(jià)格低廉,并可提供豐富的實(shí)驗(yàn)資料,目前廣泛應(yīng)用于模型實(shí)驗(yàn)研究中。M S模型的建立可以分為遺傳型模型、誘發(fā)型模型和喂養(yǎng)型模型。其中遺傳型包括基因人工改造模型及自發(fā)性模型,價(jià)格昂貴,且不同于人類的發(fā)病過程,國(guó)內(nèi)M S動(dòng)物研究中應(yīng)用較少。誘發(fā)型采用各種手段破壞胰島β細(xì)胞或胰臟,主要運(yùn)用于對(duì)1型糖尿病的研究。喂養(yǎng)型一般使用健康大鼠,通過喂養(yǎng)特殊飼料,使其發(fā)生肥胖、高脂血癥、高血糖及高胰島素血癥等,從而形成M S模型,此種方法最能模擬人類不健康的生活方式,且價(jià)格較低廉、方法簡(jiǎn)單,但缺點(diǎn)在于造模時(shí)間較長(zhǎng)。本課題組前期研究證實(shí)運(yùn)用高鹽高脂高糖飼料喂養(yǎng)S D大鼠8周可出現(xiàn)代謝綜合征大鼠模型[3],本次實(shí)驗(yàn)運(yùn)用特殊飼料喂養(yǎng)8周后檢測(cè)模型組大鼠F B G及F I N S水平較正常組升高,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),同時(shí)利用穩(wěn)態(tài)模型H O M A計(jì)算I R I評(píng)價(jià)I R程度,胰島素敏感性明顯下降,提示出現(xiàn)顯著的I R。
3.2MS與TNF-α、IL-6M S時(shí),炎癥因子如TNF-α、I L-6的水平是增高的[4]。M S是一個(gè)系統(tǒng)性的低度炎癥狀態(tài),炎癥存在于胰島素抵抗、凝血、內(nèi)皮功能紊亂等多個(gè)M S組分中,炎癥已經(jīng)成為M S重要致病機(jī)制之一。2005年美國(guó)糖尿病學(xué)會(huì)(ADA)學(xué)術(shù)年會(huì)上,專家們提出脂肪細(xì)胞分泌的炎性因子(如TNF-α、I L-6等)可能是肥胖、I R、糖尿病、動(dòng)脈粥樣硬化及M S的一個(gè)聯(lián)結(jié)點(diǎn)[5]。
當(dāng)發(fā)生I R時(shí),血中和脂肪組織中TNF-α過度表達(dá),且與胰島素敏感性呈負(fù)相關(guān)[6]。TNF-α主要是由巨噬細(xì)胞激活后分泌的具有多種生物學(xué)效應(yīng)的一種細(xì)胞因子,M att h i as B等證明TNF-α可導(dǎo)致I R,伴有I R的嚙齒類動(dòng)物和人類的脂肪組織TNF-α基因呈過度表達(dá),去除TNF-α基因后胰島素敏感性得以提高,表明TNF-α參與I R的形成[7-8]。TNF-α致I R的機(jī)制可能是:1)TNF-α致胰島素受體底物-1絲氨酸磷酸化而抑制了胰島素受體酪氨酸激酶的活性[9];2)TNF-α致游離脂肪酸增高,干擾了周圍葡萄糖的攝取;3)TNF-α抑制脂肪細(xì)胞葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)體-4的表達(dá),從而抑制脂肪細(xì)胞攝取葡萄糖[10]。I L-6是細(xì)胞因子家族中的成員,是一種多功能的生物活性因子,近年發(fā)現(xiàn)其可由免疫細(xì)胞和免疫輔助細(xì)胞產(chǎn)生,還可由非免疫細(xì)胞及一些內(nèi)分泌細(xì)胞產(chǎn)生(如脂肪細(xì)胞等),且在糖脂代謝中起作用。在I R狀態(tài)時(shí),血I L-6水平較正常升高2~3倍。諸多文獻(xiàn)證實(shí)I R時(shí)I L-6的表達(dá)生成增多與P K C及轉(zhuǎn)錄因子NF-κB、AP-1信號(hào)途徑的激活有關(guān)[11-13]。F er n a n de z-R ea l等[14]發(fā)現(xiàn)I L-6與I R有關(guān),且在控制體質(zhì)指數(shù)、體脂含量后,其血漿I L-6水平仍與胰島素敏感性相關(guān)。綜上,TNF-α、I L-6與M S密切相關(guān),故可選用這兩指標(biāo)運(yùn)用于觀察及評(píng)價(jià)M S。
3.3MS治療對(duì)于M S的治療目前尚無特效藥物,西藥主要針對(duì)M S的各個(gè)組分進(jìn)行治療,控制及降低其發(fā)展為心腦血管疾病。羅格列酮屬于噻唑烷二酮類藥物,主要通過提高胰島素的敏感性而有效地控制血糖,有研究表明使用羅格列酮可降低冠心病合并2型糖尿病患者血清TNF-α及I L-6水平[15],目前也是針對(duì)M S的常用藥物之一[16],存在的主要副作用是水腫、血漿容量增加、肝功能損傷、心衰等[17-20]。中醫(yī)藥治療疾病重視辨證論治,通過整體調(diào)節(jié)來改善人體的病理狀態(tài),且副作用小。
本課題組在結(jié)合臨床實(shí)踐基礎(chǔ)上,認(rèn)為M S與肝脾兩臟關(guān)系密切,當(dāng)機(jī)體處于肝失疏泄、脾失健運(yùn)狀態(tài)時(shí),水谷運(yùn)化轉(zhuǎn)輸不利,糟粕物質(zhì)排出不及時(shí),可造成痰濕互阻,氣滯血瘀,停于脈絡(luò),日久變生頑癥痼疾。故從肝脾入手,以健脾疏肝為法則,創(chuàng)立了柴芪湯,方中選用具補(bǔ)中益氣功效的黃芪與疏肝解郁調(diào)暢氣機(jī)之柴胡,共為君藥;白術(shù)益氣健脾,配合黃芪共奏健脾助運(yùn)化濕之效,為臣藥;另以理氣解郁活血化瘀之藥共為佐使,在臨床上取得一定療效。
本實(shí)驗(yàn)研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)柴芪湯及羅格列酮在調(diào)節(jié)F B G、F I N S及改善I R I方面均有一定的效果,柴芪湯組3項(xiàng)指標(biāo)較羅格列酮組偏低,但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,說明柴芪湯對(duì)于F B G、F I N S的調(diào)節(jié)及I R的改善效果與羅格列酮作用相當(dāng);2組藥物使用后F I N S與I R I值與正常組無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異,表明使用這2組藥物均能改善胰島素抵抗,且使胰島素抵抗程度接近正常組,從而進(jìn)一步延緩或者減輕M S的形成。在炎癥因子的檢測(cè)中,可進(jìn)一步發(fā)現(xiàn)兩藥物的作用差異,柴芪湯相比羅格列酮可明顯降低血清TNF-α及I L-6含量,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,說明柴芪湯相比羅格列酮具有更好的改善體內(nèi)炎性環(huán)境的作用。雖然在F I N S與I R I指標(biāo)上,用藥組效果接近正常組,但血清里炎癥因子的表達(dá)較正常組仍存在明顯差異。I R作為M S的病生理基礎(chǔ),是一個(gè)慢性亞臨床炎癥過程[2],基于本實(shí)驗(yàn)的結(jié)果,我們考慮F B G、F I N S及I R I值等生化指標(biāo)并不能有利地揭示M S病情,對(duì)于炎癥因子進(jìn)一步的檢測(cè)可以更加深入了解M S情況。
實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,柴芪湯可降低M S大鼠的F B G 和F I N S,改善I R,對(duì)M S有明顯防治作用,從而有利于阻止或減慢疾病的進(jìn)展,其機(jī)制可能部分與其降低M S大鼠血清TNF-α和I L-6水平有關(guān)。
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The Influenceof ChaiQi Tang on the Levelsof TNF-αand IL-6 of the RatModelw ith Metabolic Syndrom e
CHEN Liru1,LIU Yuan1,NIEWei1,Malina·AXinBai1,ZHU Mengyun2,ZHANG Liping2△
1 Dongfang Hospital of Beijing University of Chinese Medicine,Beijing 100078,China;2 International Exchange and Cooperation of Beijing University of Chinese Medicine
Objective:To discuss themechanism of ChaiQi Tang improvingmetabolic syndrome(MS)by observing its influence on the levels of TNF-αand IL-6 of diet-induced MS ratmodel.Methods:Thirty-two ratswere randomized into the normalgroup,themodelgroup,ChaiQi Tang group and rosiglitazone group,the rats,except the normalgroup,were fed with high salt,high fatand high sugar diet for eightweeks,themedication groupsaccepted gastric lavage of ChaiQi Tang[5.67 g/(kg·d)]and rosiglitazone suspension[3mg/(kg·d)]from the firstday of preparing themodels,serum glucose and insulin of the ratswere detected in eightweeks to assess the conditions of insulin resistance(IR),the levelsof TNF-αand IL-6 in the ratsof differentgroupswere detected by adopting ELISA method.Results:Themodelgroup was higher than the normal group in the levels of blood glucose and insulin,IR indexes,the levelsof TNF-αand IL-6 obviously(P<0.05);themedication groupwas lower than themodelgroup in differentindexes,and the difference showed statisticalmeaning(P<0.05);the difference had no statisticalmeaning in the comparison of the levels of blood glucose and insulin,IR indexes between ChaiQi Tang group and rosiglitazone group(P>0.05),the decreasesof TNF-αand IL-6 in ChaiQi Tang group weremore obvious compared to these indexes of rosiglitazone group,and the difference showed statisticalmeaning(P<0.05).Conclusion:ChaiQi Tang could improve MS by affecting the levels of TNF-αand IL-6,early administration of ChaiQi Tang could intervene the formation ofMS.
metabolic syndrome;animalexperiment;rat;ChaiQi Tang;TNF-α;IL-6
R285.5
A
1004-6852(2016)04-0006-04
2015-10-08
國(guó)家自然科學(xué)基金項(xiàng)目(編號(hào)81273695)。
陳麗如(1987—),女,在讀博士研究生。研究方向:中醫(yī)藥預(yù)防及治療代謝性疾病。
張立平(1963—),女,博士學(xué)位,教授。研究方向:脾胃病的中醫(yī)藥診治。