曹　藍(lán)，陳藝韻，魯恩潔，蘇文哲，劉靜雯，陳宗遒，陸劍云，劉艷慧，馬　鈺，李魁彪（廣州市疾病預(yù)防控制中心，廣東廣州　510440）

廣州市2015年禽類市場禽流感流行病學(xué)監(jiān)測

曹藍(lán)，陳藝韻，魯恩潔，蘇文哲，劉靜雯，陳宗遒，陸劍云，劉艷慧，馬鈺，李魁彪
（廣州市疾病預(yù)防控制中心，廣東廣州510440）

為了解2015年廣州市禽類市場的禽流感病毒污染情況，為科學(xué)制定人感染禽源流感病毒的防控措施提供基礎(chǔ)數(shù)據(jù)，對2015年廣州市12個區(qū)部分禽類市場的3 447份樣本進行了禽流感病毒熒光RT-PCR檢測。結(jié)果顯示：全部樣品的A型禽流感病毒和H9亞型禽流感病毒的陽性率分別為12.56%和6.24%。1月份為A型和H9亞型禽流感陽性率最高的月份，陽性率分別為23.94%和14.73%。從化區(qū)的A型禽流感病毒陽性率最高（24.48%），黃埔區(qū)的H9亞型禽流感病毒陽性檢出率最高（14.76%）。不同類型樣品中，A型禽流感病毒陽性率最高為砧板、刀具類（15.16%），最低為冰鮮生鮮（7.78%）。H9亞型禽流感病毒陽性檢出率最高為籠具（8.25%），最低為置物臺面（2.84%）。結(jié)果表明：廣州市禽類市場冬春季節(jié)禽流感病毒陽性率較高；全市各區(qū)禽類市場普遍存在禽流感病毒污染；禽類交易各環(huán)節(jié)中，宰殺和飼養(yǎng)環(huán)節(jié)的污染最為嚴(yán)重。建議在加強活禽交易市場全面清洗消毒的基礎(chǔ)上，對不同季節(jié)、不同交易環(huán)節(jié)，采取差異化的和基于風(fēng)險的消毒、監(jiān)測措施，以降低人通過禽類市場感染禽流感病毒的風(fēng)險。

禽類市場；禽流感；監(jiān)測

禽流感病毒（Avian Influenza Virus，AIV）是正黏病毒科的RNA病毒，根據(jù)病毒粒子表面抗原血凝素（HA）和神經(jīng)氨酸酶（NA）的不同，分為不同亞型：H1～H16、N1～N9。目前已知的各亞型流感病毒均可在禽類中分離到［1］。根據(jù)致病性的不同，可將禽流感病毒分為高致病性、低致病性和無致病性禽流感病毒［2］。

H9N2亞型禽流感1994年在我國廣東省首次暴發(fā)，后逐漸擴散至我國大陸的不同區(qū)域，并且成為在大陸地區(qū)家禽中流行的主要亞型［3-4］。此外，該病毒還可感染包括豬［5］、犬、貓［6］和雪貂［7］在內(nèi)的一系列哺乳動物。1998年，廣東省報道了我國首例人感染H9N2亞型禽流感病例［8］。之后，廣東省還有多起人感染H9N2亞型禽流感病毒的報道［9-10］。研究表明，H9N2亞型禽流感病毒通過基因突變已具有適應(yīng)人群的特征，并且存在人際傳播的風(fēng)險［11-12］。

H9N2亞型禽流感病毒除了可直接感染人外，還通過病毒基因“重配”，給人類健康帶來重大的威脅［13］。1997年香港出現(xiàn)人H5N1亞型禽流感感染及死亡病例?，F(xiàn)已研究證實，其6個內(nèi)部基因片段就是由H9N2病毒提供的［14］。另外，2013年首次在我國東部地區(qū)出現(xiàn)的H7N9亞型流感病毒［15-16］，以及2013年11月出現(xiàn)的H10N8亞型禽流感病毒［17］，其內(nèi)部基因均來源于不同譜系的H9N2亞型禽流感病毒。

禽類市場是禽流感病毒發(fā)生重組擴散的高風(fēng)險區(qū)域［18］。市場內(nèi)不同種類的禽類長期密集接觸，以及市場內(nèi)高濕高熱的環(huán)境，再加上消毒不及時、不徹底等，為禽流感病毒在動物之間傳播創(chuàng)造了有利條件［19］。而禽類市場的外環(huán)境是人直接和間接接觸禽類的重要場所，更是禽流感病毒從禽到人跨種間傳播的重要環(huán)節(jié)［20-21］。而我國廣東省的居民有在禽類市場挑選活禽、現(xiàn)場宰殺的習(xí)慣，這更增加了人在禽類市場感染禽流感的風(fēng)險［18］。為了解廣州市禽類市場的禽流感病毒，特別是H9N2亞型禽流感病毒的污染狀況，開展了本次調(diào)查研究。

1　材料和方法

1.1 試劑

常溫病毒采集轉(zhuǎn)運系統(tǒng)（UTM）購自意大利Copan公司；RNA提取試劑盒QIAamp?Viral RNA Mini Kit 購自QIAGEN 公司；禽流感病毒通用A型及H9亞型熒光定量RT-PCR檢測試劑盒購自中山大學(xué)達(dá)安基因股份有限公司；熒光定量PCR儀7500 Fast購自Applied Biosystems 公司。

1.2 樣本采集

按隨機抽樣的方式，對2015年廣州市12個區(qū)的禽類市場進行采樣。每個區(qū)選擇2～3個市場，每個市場隨機選擇2～4個檔口。主要采集禽類泄殖腔拭子，糞便、飲用水、污水、籠具、砧板、刀具、脫毛機、冰箱，以及光雞、冰鮮雞等涂抹拭子樣品。采集后的標(biāo)本4 ℃保存，在24小時內(nèi)送至實驗室-80 ℃保存?zhèn)溆谩?/p>

1.3 實驗室檢測

標(biāo)本凍融后置于振蕩器充分震蕩（液體類標(biāo)本上下顛倒混勻），參照說明書進行核酸RNA提取。對通用A型流感病毒熒光RT-PCR 檢測試劑盒檢測為陽性的標(biāo)本，再用H9亞型流感病毒熒光RTPCR 檢測試劑盒進行檢測。

1.4 數(shù)據(jù)分析

將數(shù)據(jù)導(dǎo)入Excel表格，并進行數(shù)據(jù)的統(tǒng)計分析。

2　結(jié)果

2.1 總體檢測情況

2015年1月至12月，采集廣州市12個區(qū)禽類市場的活禽泄殖腔拭子和各種外環(huán)境拭子，共采集3 447份樣品。經(jīng)檢測，A型禽流感病毒陽性樣品433份，陽性率為12.56%；H9亞型禽流感病毒陽性樣品215份，陽性率為6.24%。

2.2 時間分布情況

全年1—12月樣品的檢測結(jié)果顯示，不同月份A型禽流感病毒和H9亞型禽流感病毒的陽性檢出率差異較大，具體如圖1所示。A型禽流感病毒陽性率在1月份最高（23.94%），在6—8月份最低（未檢出，陽性率為0）。H9亞型禽流感病毒陽性率在1月份最高（14.73%），在5—10月份最低（未檢出，陽性率為0）。各月采樣情況及陽性率見表1。

圖1　不同月份的禽類市場禽流感病毒陽性率變化

表1　2015年1-12月采樣量及禽流感陽性率統(tǒng)計

2.3 空間分布情況

2015年廣州市各區(qū)的采樣情況見表2。檢測結(jié)果如圖2所示，各區(qū)之間的禽流感病毒陽性率差異較大。其中，從化區(qū)的A型禽流感病毒陽性率最高，為24.48%；白云區(qū)最低，為5.73%。H9亞型禽流感病毒陽性檢出率最高的為黃埔區(qū)（14.76%），最低為白云區(qū)（1.91%）。

表2　2015年各區(qū)采樣量及禽流感陽性率統(tǒng)計

圖2　不同區(qū)禽類市場禽流感病毒陽性率情況

2.4 樣品分布情況

結(jié)合廣州市禽類市場家禽售賣、屠宰的實際情況及從業(yè)人員的行為習(xí)慣，本研究將采集的3 447份樣品分成11個標(biāo)本類型。檢測結(jié)果顯示，A型禽流感病毒檢出陽性率最高的為砧板刀具類（15.16%），最低的為冰鮮生鮮（7.78%）；H9亞型禽流感病毒陽性率最高的為籠具（8.25%），最低的為置物臺面（2.84%），結(jié)果詳見表3。

表3　不同樣品類型采樣量及陽性率統(tǒng)計

3　討論

本研究發(fā)現(xiàn)，2015年廣州市禽類市場的A型禽流感病毒和H9亞型禽流感病毒陽性率分別為12.56%和6.24%，均高于廣州市2013年的調(diào)查數(shù)據(jù)（3.26%和1.28%）［22］，說明近年來廣州市禽類市場的禽流感病毒污染較為嚴(yán)重。同時，對廣州市12個區(qū)禽類市場的活禽樣品以及外環(huán)境樣品的禽流感病毒污染情況進行分析，結(jié)果發(fā)現(xiàn)不同地區(qū)的A型和H9亞型禽流感病毒陽性率差異較大。A型禽流感病毒陽性率在5.73%～24.48%之間，H9亞型禽流感病毒陽性率在1.91%～14.76%之間，表明廣州市各區(qū)禽類市場受禽流感病毒污染的現(xiàn)象較為普遍。同時，A型禽流感病毒陽性率以從化區(qū)和越秀區(qū)較高，可能與這些地區(qū)的禽類交易消費量或活禽來源有關(guān)，需進一步進行調(diào)查和分析。

本研究對2015年廣州市12個區(qū)禽類市場的活禽泄殖腔樣品和外環(huán)境樣品進行采樣和檢測，分析不同月份的A型和H9亞型禽流感病毒的陽性率情況，結(jié)果發(fā)現(xiàn)H9亞型禽流感病毒陽性率與A型禽流感病毒陽性率的變化趨勢基本一致。對于A型禽流感病毒而言，雖然全年大部分月份均有病毒檢出，但6—8月期間均未檢出病毒。該結(jié)果與段曉冬等［18］及梁能秀［23］的調(diào)查結(jié)果存在一定差異，主要的原因可能與6—8月采集的樣品量少有關(guān)，也可能與時間、氣候和地區(qū)差異等客觀因素有關(guān)。但總體上，禽流感病毒陽性率在冬春季節(jié)相對較高，在春夏季節(jié)較低，這與以往的研究結(jié)果一致［12，24］。進一步比較發(fā)現(xiàn)，一般在A型禽流感病毒陽性率高的月份，H9病毒的檢出率也相對較高，但3月、5月、9月和10月除外。這4個月的A型禽流感病毒陽性率在1.67%～10.00%之間，而H9病毒陽性率均為0，說明禽類市場中除存在H9亞型禽流感病毒之外，還有諸如H4、H5、H6、H7等其他多種亞型的禽流感病毒［25］。同時，也提示對于禽類市場而言，與單獨檢測H9亞型禽流感病毒相比，A型禽流感病毒的檢測結(jié)果可能更能反映市場內(nèi)禽流感病毒的污染情況。

對不同類型樣品的檢測結(jié)果分析顯示，砧板、刀具類標(biāo)本的A型禽流感病毒陽性率最高，表明禽類在宰殺環(huán)節(jié)受禽流感病毒的污染最為嚴(yán)重。一般情況下，活禽被宰殺后直接被市民挑選購買，因此宰殺環(huán)節(jié)是普通人群感染禽流感的高風(fēng)險環(huán)節(jié)。建議市場管理部門加強禽類宰殺環(huán)節(jié)的衛(wèi)生清洗和消毒，以降低普通人群通過接觸宰殺后的家禽感染禽流感病毒的風(fēng)險。2013年以來，廣州市先后出現(xiàn)人感染H7N9、H5N6亞型流感病毒病例。為降低人感染禽流感病毒的風(fēng)險，廣州市政府推行實施“冰鮮上市”措施。本研究結(jié)果顯示，在11個樣品類型中，冰鮮、生鮮樣品的A型禽流感病毒檢出率最低，且明顯低于活禽泄殖腔拭子的病毒檢出率。該數(shù)據(jù)也從正面支持了政府大力推行“冰鮮生鮮”上市措施的正確性和科學(xué)性。本研究還發(fā)現(xiàn)，飲水、飼料和籠具拭子中也有較高的A型禽流感病毒檢出率，并且在各類型樣品中，籠具樣品的H9亞型禽流感病毒陽性率最高，說明市場中活禽的飼養(yǎng)環(huán)境受禽流感病毒污染的情況也較為嚴(yán)重。調(diào)查發(fā)現(xiàn)，市場內(nèi)普遍存在多種禽類在高溫、高濕環(huán)境下密集飼養(yǎng)。在這種應(yīng)激條件下，禽類免疫力降低，更易受到環(huán)境中禽流感病毒的感染。此外，通常禽類市場內(nèi)存在多種亞型禽流感病毒［25］，這增加了不同禽流感病毒在活禽體內(nèi)重組進化，進而出現(xiàn)新型病毒株的可能性。李魁彪等［26］的研究發(fā)現(xiàn)，廣州市活禽交易市場職業(yè)暴露人群的H9N2亞型禽流感病毒的隱性感染較為嚴(yán)重。本研究的結(jié)果也顯示，所有類型的樣品中都存在不同程度的H9亞型禽流感病毒感染，說明在禽類市場的屠宰、售賣等多個環(huán)節(jié)都存在H9病毒的污染。因此有必要進一步加強對職業(yè)人群的健康宣教，要求其做好個人防護，以減少人感染禽流感的發(fā)生。

綜上所述，廣州市禽類市場冬春季節(jié)的禽流感病毒陽性率較高，全市各區(qū)禽類市場普遍存在禽流感病毒污染現(xiàn)象，禽類交易各環(huán)節(jié)中的宰殺和飼養(yǎng)環(huán)節(jié)病毒污染最為嚴(yán)重。因此，建議在加強禽類市場全面清洗消毒的基礎(chǔ)上，對冬春季節(jié)以及宰殺和飼養(yǎng)環(huán)節(jié)采取差異化和基于風(fēng)險的消毒防控措施，嚴(yán)格執(zhí)行“休市”政策，加強從業(yè)人員的宣傳教育，降低禽流感病毒污染率，進而降低人感染禽流感的發(fā)生風(fēng)險。同時，有必要繼續(xù)加強禽流感病毒的流行病學(xué)和分子流行病學(xué)監(jiān)測和調(diào)查工作。這對及時了解禽流感病毒的變異和流行情況，有效評估禽流感病毒向人間傳播的風(fēng)險，以及對人感染禽流感病毒進行早期預(yù)警，具有重要的公共衛(wèi)生意義。

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（責(zé)任編輯：朱迪國）

Epidemiological Surveillance of Avian Influenza in Retail Live Poultry Markets of Guangzhou City in 2015

Cao Lan，Chen Yiyun，Lu Enjie，Su Wenzhe，Liu Jingwen，Chen Zongqiu，Lu Jianyun，Liu Yanhui，Ma Yu，Li Kuibiao
（Guangzhou Center for Disease Prevention and Control，Guangzhou，Guangdong 510440）

To understand the distribution of avian influenza virus （AIV） in live poultry markets of Guangzhou city，to provide the technical supports for decision making on AIV prevention and control measures，3 447 samples including cloacal swabs and environmental swabs were collected and tested by real-time RT-PCR for AIV A type and H9 subtype. Of all samples，the positive rates of AIV A type and H9 subtype were 12.56% and 6.24% respectively. January witnessed the highest positive rates of A type and H9 subtype virus. The positive rate of A type in Conghua district was higher than in other 11 districts and the highest positive rate of H9 subtype virus among 12 districts was in Huangpu. The results indicated that AIV infection of retail live poultry markets in Guangzhou was severe and the highest positive rates of AIV were in the spring and winter. In the retail live poultry markets，the highest positive rates were found in slaughtering and feeding places. Therefore，more effective prevention and control measures are needed for reducing the risk of human infection with AIV.

retail live poultry market；live poultry swabs；environmental swabs；avian influenza；surveillance

S858.3文獻識別碼：B

1005-944X（2016）08-0008-05

10.3969/j.issn.1005-944X.2016.08.003

廣州市醫(yī)藥衛(wèi)生科技項目（20161A010058、20141A011058）

李魁彪