張　紅，陳　軍

(武漢市中西醫(yī)結(jié)合醫(yī)院藥學(xué)部，湖北 武漢　430022)

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白疕消軟膏對小鼠尾部鱗片表皮顆粒層形成的影響Δ

張紅*，陳軍

(武漢市中西醫(yī)結(jié)合醫(yī)院藥學(xué)部，湖北 武漢430022)

目的：觀察白疕消軟膏外用對小鼠尾部鱗片表皮顆粒層形成的影響，為其臨床應(yīng)用提供實驗依據(jù)。方法：建立小鼠尾部鱗片表皮模型，取昆明種小鼠50只，以隨機數(shù)字表法分為高劑量組、中劑量組、低劑量組、陰性對照組、陽性對照組5組，每組10只，觀察白疕消軟膏對小鼠尾部鱗片表皮細(xì)胞分化的影響。結(jié)果：高劑量組、中劑量組、低劑量組對小鼠尾部鱗片表皮顆粒層形成的促進(jìn)作用，與陰性對照組比較，差異有極顯著統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)，但與陽性對照組比較，中、低劑量組作用較弱，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)，表明白疕消軟膏能明顯促進(jìn)鼠尾鱗片表皮顆粒細(xì)胞形成。結(jié)論：白疕消軟膏可以通過改善表皮細(xì)胞角化不全起到治療銀屑病的作用。

白疕消軟膏； 銀屑?。?小鼠尾部鱗片表皮模型

白疕消軟膏是武漢市中西醫(yī)結(jié)合醫(yī)院已故皮膚病專家胡長發(fā)主任醫(yī)師在有關(guān)科研實驗[1]的基礎(chǔ)上設(shè)計的一個外用中藥制劑，在臨床上用于治療白疕血熱、血瘀證(尋常性銀屑病)。本研究采用天然缺乏顆粒層的鼠尾表皮模擬銀屑病表皮分化異常，觀察白疕消軟膏外用對小鼠尾部鱗片表皮顆粒層形成的影響，了解和證實該中藥復(fù)方制劑用于臨床治療以表皮細(xì)胞分化異常為特征的銀屑病的作用機理，為臨床應(yīng)用提供實驗室依據(jù)。

1　材料

1.1藥品與試劑

白疕消軟膏(批號：060601，規(guī)格：30 g/盒)，軟膏基質(zhì)(規(guī)格：30 g/盒)，均由課題組提供；哈西奈德軟膏(廣東順風(fēng)制藥廠，批號：20051201，規(guī)格：10 g/支)；甘油、十六醇、白凡士林、單硬脂酸甘油酯等軟膏基質(zhì)成分均為藥用級。

1.2實驗動物

健康昆明種雄性幼小白鼠50只，體質(zhì)量22.6～29.8 g，普通級，由湖北實驗動物研究中心提供，動物合格證號：SCXK(鄂2003-0005)?；\養(yǎng)，10只為1籠；室溫：(19±1)℃、濕度：50～70%，實驗動物設(shè)施合格證號：SYXK(鄂)2004-0024；常規(guī)飼料喂養(yǎng)，飼料提供單位：湖北實驗動物研究中心，合格證號：SCXK(鄂2003-0005)。

2　方法

2.1藥品的制備

2.1.1白疕消軟膏的制備：取大黃、丹參、苦參、紅花、全蝎等中藥，加藥材量8倍的水煎煮3次，每次1.5 h，濃縮液加2倍量乙醇使沉淀，回收乙醇并濃縮至含生藥2 g/ml，與適量甘油混合加熱作為水相，取十六醇、白凡士林、單硬脂酸甘油酯、司盤-60等作為油相，在適宜溫度下，依次將水相加入油相中，攪拌使乳化完全，即得。制成高中低3種劑量的軟膏含生藥分別為1.6、0.8、0.4 g/g。

2.1.2軟膏基質(zhì)的制備：取純化水代替藥液與適量甘油加熱作為水相，余同“2.1.1”操作，即得。

2.2分組與給藥

取昆明種小鼠50只，以隨機數(shù)字表法分為高劑量組、中劑量組、低劑量組、陰性對照組、陽性對照組5組，每組10只，高劑量組給予高劑量白疕消軟膏，中劑量組給予中劑量白疕消軟膏，低劑量組給予低劑量白疕消軟膏，陰性對照組給予軟膏基質(zhì)，陽性對照組給予哈西奈德軟膏。用棉簽分別蘸取不同組別對應(yīng)的軟膏，在每只小鼠尾部均勻涂抹(約0.5 g)，1日2次，連續(xù)15 d。 末次給藥后次日處死小鼠，取距離根部約1.5 cm處尾部皮膚，10%甲醛溶液固定，石蠟包埋，HE染色。在光學(xué)顯微鏡下觀察各組每只小鼠的尾部鱗片，凡兩個毛囊口之間的鱗片表皮有排列成行的顆粒層者，稱為有顆粒層的鱗片，計數(shù)每100個鱗片中有顆粒層的鱗片數(shù)。

2.3統(tǒng)計學(xué)方法

3　結(jié)果

高劑量組、中劑量組、低劑量組對小鼠尾部鱗片表皮顆粒層的形成的促進(jìn)作用，與陰性對照組比較，差異有極顯著統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)，但與陽性對照組比較，中、低劑量組作用較弱，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)，見表1、圖1。

表1　白疕消軟膏對小鼠鼠尾鱗片表皮顆粒層生成的影響

注：P*為與陰性對照組比較，P#為與陽性對照組比較

Note：P*stands for vs. the negative control group,P#stands for vs. the positive control group

A.陰性對照組；B.低劑量組；C.中劑量組；D.高劑量組；E.陽性對照組A.Negative control group; B.Low dose group; C.Moderate dose group; D.High dose group; E.Positive control group圖1　小鼠尾部鱗片表皮顆粒層(HE×100)Fig 1　Granular layer of squamous surface of mice tail(HE×100)

4　討論

銀屑病的基本病理特點是表皮細(xì)胞角化不全、角質(zhì)形成細(xì)胞增殖過快和炎癥反應(yīng)等[2-5]。本研究選用與銀屑病臨床癥狀相關(guān)的促進(jìn)顆粒層形成(改善表皮細(xì)胞角化不全)為指標(biāo)進(jìn)行實驗研究。正常情況下小鼠尾部鱗片的表皮角質(zhì)層角朊細(xì)胞保留有細(xì)胞核，而顆粒層顆粒細(xì)胞缺失，僅在毛囊處有少量的顆粒細(xì)胞，表皮較薄，其天然的角化形式與人類銀屑病表皮的角化不全相似，故可模擬該病角化不全的特點，國內(nèi)外許多學(xué)者利用其作為實驗?zāi)Ｐ停u價藥物促進(jìn)顆粒層形成的作用[6-11]，藥物如能促進(jìn)小鼠鼠尾鱗片表皮顆粒層的形成，即可能改變銀屑病表皮的角化不全，使之恢復(fù)正常。很多學(xué)者在實驗中證明治療銀屑病臨床有效的中藥普遍具有促進(jìn)小鼠尾鱗片表皮顆粒層形成作用[12-15]，并用其進(jìn)行外用藥物治療銀屑病藥效研究模型[2]。本研究采用該種動物模型對白疕消軟膏藥理作用進(jìn)行評價, 結(jié)果表明，局部用藥后可明顯誘導(dǎo)小鼠尾部鱗片表皮顆粒層形成，高、中、低劑量的白疕消軟膏對小鼠尾鱗片顆粒層的形成均有明顯促進(jìn)作用，與劑量成正相關(guān)，與陰性對照組比較作用較強，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)，與陽性對照組比較，中、低劑量組作用均較弱，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。提示白疕消軟膏可以通過改善表皮細(xì)胞角化不全起到治療銀屑病的作用，為白疕消軟膏的治療提供了實驗依據(jù)。

多年來，臨床上選用糖皮質(zhì)激素制劑外用能有效地治療銀屑病[8]，且已經(jīng)有相關(guān)實驗證實，但長期應(yīng)用造成的皮膚萎縮等副作用不能忽視。在本研究中發(fā)現(xiàn)，外用哈西奈德軟膏15 d后，小鼠尾部皮膚萎縮很明顯，而給予白疕消軟膏的高、中、低劑量組則無萎縮現(xiàn)象。

中藥在世界各國受到越來越多的青睞。相比于其他劑型，透皮給藥制劑治療皮膚局部疾病，具有安全、有效、穩(wěn)定和患者適應(yīng)性好等優(yōu)點。因此，開展中藥外用治療銀屑病的研究是一種可行的途徑。

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Experimental Study on Baibixiao Ointment on Squamous Surface Model of Mice TailΔ

ZHANG Hong, CHEN Jun

(Dept.of Pharmacy, Wuhan Hospital of Traditional Chinese and Western Medicine，Hubei Wuhan 430022，China)

OBJECTIVE：To observe the effects of Baibixiao ointment on squamous surface of mice tail, so as to provide experimental basis for the clinical application.METHODS: Squamous surface model of mice tail was establish, 50 cases Kunming mice were selected to be divided into high-dose group, middle dose group, low dose group, negative control group, positive control group via the radom number table, with 10 cases in each. The effects of Baibixiao qintment on squamous surface of mice tail were observed. RESULTS: Promote the formation of mouse tail epidermis granular layer in high-dose group, middle dose group and low dose group, compared with the negative control group, the difference was extremely significant(P<0.01). But compared with the positive control group,the middle and low dose group are less effective, with statistically significant difference(P<0.05).Baibixiao ointment can significantly promote the formation of squamous surface cell of mice tail. CONCLUSIONS: The therapeutic effects of Baibixiao ointment on psoriasis can be achieved by improving paraceratosis in the epidermal cells.

Baibixiao ointment; Psoriasis; Squamous surface model of mice tail

武漢市衛(wèi)生局科研課題(No.武衛(wèi)[2003]228號)

R986

A

1672-2124(2016)08-1023-03

10.14009/j.issn.1672-2124.2016.08.005

2016-05-03)

*主任中藥師。研究方向：中西藥新制劑臨床前研究。E-mail:wyzh688@126.com