田文娟，李淑敏，段春艷，王以云

(山東新時(shí)代藥業(yè)有限公司，山東 臨沂 273400)

卡巴他賽注射液細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法的研究

田文娟，李淑敏，段春艷，王以云

(山東新時(shí)代藥業(yè)有限公司，山東 臨沂 273400)

為建立卡巴他賽注射液的細(xì)菌內(nèi)毒素檢查方法。參照《中國(guó)藥典》2010年版二部附錄細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法--凝膠法進(jìn)行試驗(yàn)。結(jié)果表明將卡巴賽注射液用其注射用溶劑振搖混勻后，稀釋40倍時(shí)對(duì)細(xì)菌內(nèi)毒素檢查無(wú)干擾作用。所以卡巴他賽注射液可采用細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法--凝膠法進(jìn)行細(xì)菌內(nèi)毒素檢測(cè)。

卡巴他賽注射液；細(xì)菌內(nèi)毒素檢查；干擾試驗(yàn)

卡巴他賽是第三代紫衫烷類藥物，藥物通過與微管蛋白結(jié)合，促進(jìn)微管組裝，抑制細(xì)胞進(jìn)入有絲分裂期而抑制癌細(xì)胞增殖，適用于與潑尼松聯(lián)用治療既往用含多烯紫杉醇治療方案激素難治的轉(zhuǎn)移性前列腺癌患者[]。本試驗(yàn)參照《中國(guó)藥典》2010年版二部附錄細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法(XIE)進(jìn)行了干擾試驗(yàn)[2]，為該產(chǎn)品建立簡(jiǎn)便、快捷、檢測(cè)靈敏度高的細(xì)菌內(nèi)毒素檢查方法提供依據(jù)。

1 儀器與材料

1.1 儀器

旋渦混合儀，型號(hào)：XW-80A，生產(chǎn)單位：上海醫(yī)科大學(xué)儀器廠；電熱恒溫干燥箱，型號(hào)：GZX-9246MBE，生產(chǎn)單位：上海博迅實(shí)業(yè)有限公司醫(yī)療設(shè)備廠；恒溫水浴鍋，型號(hào)：HH-8，生產(chǎn)單位：上海梅香儀器有限公司。

1.2 供試品

卡巴他賽注射液，生產(chǎn)廠家為山東新時(shí)代藥業(yè)有限公司；批號(hào)為207150401、207150402、207150403；卡巴他賽注射液規(guī)格為60mg:1.5mL，注射用溶劑規(guī)格為4.5mL。

1.3 試劑

細(xì)菌內(nèi)毒素檢查用水(廠家：湛江安度斯生物有限公司，批號(hào)：1405261)，鱟試劑(廠家: 福州新北生化工業(yè)有限公司，批號(hào)：13111012，標(biāo)示靈敏度：0.25EU·mL-1；廠家：湛江安度斯生物有限公司，批號(hào)：1409231, 標(biāo)示靈敏度0.25EU·mL-1; 廠家：福州新北生化工業(yè)有限公司，批號(hào)：14041412，標(biāo)示靈敏度：0.125EU·mL-1；廠家：湛江安度斯生物有限公司，批號(hào)：1405261, 標(biāo)示靈敏度0.125EU·mL-1)，細(xì)菌內(nèi)毒素工作標(biāo)準(zhǔn)品(廠家：中國(guó)食品藥品檢定研究院，批號(hào)：150601-201176，效價(jià)：100EUo 支-1)。

2 方法與結(jié)果

2.1 最大有效稀釋倍數(shù)

取一瓶卡巴他賽注射液加注射用溶劑4.5 mL(一瓶)振搖混勻后，根據(jù)公式MVD= L·C/λ計(jì)算最大有效稀釋倍數(shù) ，其中L為細(xì)菌內(nèi)毒素限值，依據(jù)卡巴他賽注射液臨床使用標(biāo)準(zhǔn)，L=0.5 EU·mg-1；C為供試品溶液的濃度，C=60mg· (1.5mL+4.5mL)-1=10mg·mL-1；λ為鱟試劑的標(biāo)示靈敏度。當(dāng)市售鱟試劑的最高靈敏度為0.03 EU·mL-1時(shí)，MVD=(0.5EU·mg-1×10mg·mL-1)/0.03EU·mL-1=160,即此時(shí)卡巴他賽注射液的最大有效稀釋倍數(shù)為160倍。

2.2 干擾預(yù)試驗(yàn)

2.2.1 鱟試劑的靈敏度復(fù)核

按《中國(guó)藥典》2010年版二部附錄細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法對(duì)兩個(gè)廠家的標(biāo)示靈敏度λ為0.25 EUomL-1的鱟試劑進(jìn)行靈敏度復(fù)核，鱟試劑靈敏度的測(cè)試值為λc。當(dāng)λc在0.5λ～2λ(包括0.5λ和2λ)時(shí)，方可用于供試品的細(xì)菌內(nèi)毒素檢測(cè)，并以標(biāo)示靈敏度為該批鱟試劑的靈敏度。結(jié)果見表1。

表1 鱟試劑靈敏度復(fù)核結(jié)果

2.2.2 干擾預(yù)試驗(yàn)

卡巴他賽注射液的最大有效稀釋倍數(shù)為160倍，取供試品一瓶加注射用溶劑4.5 mL(一瓶)振搖混勻作為原液，然后用細(xì)菌內(nèi)毒素檢查用水進(jìn)行一系列倍數(shù)的稀釋，將10倍，20倍，40倍，80倍，160倍的供試品稀釋溶液作為供試品溶液組(不含內(nèi)毒素標(biāo)準(zhǔn)溶液的供試品稀釋液)；分別用以上濃度的供試品稀釋溶液作為溶劑將細(xì)菌內(nèi)毒素工作標(biāo)準(zhǔn)品進(jìn)行稀釋，制成均含2λ內(nèi)毒素標(biāo)準(zhǔn)溶液且供試品稀釋倍數(shù)為10倍，20倍，40倍，80倍，160倍的的稀釋溶液作為供試品陽(yáng)性對(duì)照組，用以上兩個(gè)廠家靈敏度為0.25 EU o mL-1的鱟試劑進(jìn)行干擾預(yù)試驗(yàn)，每個(gè)濃度平行做兩管，同時(shí)做陰性對(duì)照和陽(yáng)性對(duì)照，實(shí)驗(yàn)結(jié)果見表2。

表2 卡巴他賽注射液干擾預(yù)試驗(yàn)結(jié)果

卡巴他賽注射液的干擾試驗(yàn)預(yù)實(shí)驗(yàn)中陰性對(duì)照組為陰性，陽(yáng)性對(duì)照組為陽(yáng)性，實(shí)驗(yàn)有效，表中結(jié)果說(shuō)明其最小不干擾稀釋倍數(shù)為20倍，綜合考慮為保證試驗(yàn)的可行性，采用40倍的供試品稀釋液進(jìn)行干擾試驗(yàn)。

2.3 干擾試驗(yàn)

按《中國(guó)藥典》2010年版二部附錄細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法，用兩個(gè)廠家標(biāo)示靈敏度λ為0.125 EU·mL-1的鱟試劑進(jìn)行干擾試驗(yàn)。用40倍的供試品稀釋液作溶劑將細(xì)菌內(nèi)毒素工作標(biāo)準(zhǔn)品制成含內(nèi)毒素濃度為0.25、0.125、0.06、0.03 EU·mL-1的供試品溶液，同時(shí)用細(xì)菌內(nèi)毒素檢查用水將細(xì)菌內(nèi)毒素工作標(biāo)準(zhǔn)品制成濃度為0.25、0.125、0.06、0.03 EU·mL-1的內(nèi)毒素標(biāo)準(zhǔn)溶液，同時(shí)做陰性對(duì)照，根據(jù)公式E= antilg(∑X/4)分別計(jì)算出內(nèi)毒素標(biāo)準(zhǔn)溶液和含供試品的內(nèi)毒素溶液的反應(yīng)終點(diǎn)濃度的幾何平均值(Et 和Es)，試驗(yàn)結(jié)果見表3。

表3 卡巴他賽注射液干擾試驗(yàn)結(jié)果

從以上干擾試驗(yàn)結(jié)果可得出：內(nèi)毒素標(biāo)準(zhǔn)溶液的反應(yīng)終點(diǎn)濃度的幾何平均值Es均在0.5λ～2.0λ之間，含供試品的內(nèi)毒素溶液的反應(yīng)終點(diǎn)濃度的幾何平均值Et 均在0.5 Es ～2.0 Es 之間(包括0.5 Es和2.0 Es)，表明供試品稀釋40倍時(shí)，對(duì)鱟試劑與細(xì)菌內(nèi)毒素反應(yīng)無(wú)干擾作用。

2.4 供試品細(xì)菌內(nèi)毒素檢測(cè)結(jié)果

將3批供試品分別進(jìn)行40倍稀釋，用靈敏度0.125 EU·mL-1的鱟試劑，按《中國(guó)藥典》2010年版二部附錄細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法，進(jìn)行細(xì)菌內(nèi)毒素檢查，結(jié)果見表4。3批供試品細(xì)菌內(nèi)毒素均符合規(guī)定，即內(nèi)毒素含量小于0.5 EU·mg-1。

表4 卡巴他賽注射液細(xì)菌內(nèi)毒素檢查結(jié)果

3 討論

細(xì)菌內(nèi)毒素隨注射劑進(jìn)入人體血液所導(dǎo)致的"熱原反應(yīng)"是注射劑臨床應(yīng)用中發(fā)生率較高的不良反應(yīng)，細(xì)菌內(nèi)毒素檢測(cè)是注射液制劑質(zhì)量檢查的重要項(xiàng)目。本文按《中國(guó)藥典》2010版二部附錄XIE“細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法--凝膠法”進(jìn)行細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法研究，結(jié)果表明卡巴他賽注射液加注射用溶劑振搖混勻后，稀釋40倍時(shí)對(duì)細(xì)菌內(nèi)毒素檢查無(wú)干擾作用，可在大于或等于此稀釋倍數(shù)下采用“凝膠法”進(jìn)行卡巴他賽注射液的細(xì)菌內(nèi)毒素檢查，從而控制供試品的內(nèi)毒素含量在限值范圍內(nèi)，保證產(chǎn)品質(zhì)量，確?；颊哂盟幇踩?。

[1] 劉 琪，劉 明，朱 剛，等.轉(zhuǎn)移性去勢(shì)抵抗性前列腺癌藥物治療進(jìn)展[J].現(xiàn)代泌尿外科雜志,2014,19(9):625-627.

[2] 國(guó)家藥典委員會(huì).中國(guó)藥典[S].二部，2010：附錄99-102.

(本文文獻(xiàn)格式：田文娟，李淑敏，段春艷.卡巴他賽注射液細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法的研究[J].山東化工，2016，45(04)：48-49,51.)

Study on Bacterial Endotoxin Test in Cabazitaxel Injection

Tian Wenjuan, Li Shumin, Duan Chunyan，Wang Yiyun

(Shandong New Time Pharmaceutical Co.,Ltd. , Linyi 273400，China)

Objective： To establish an endotoxin test method for cabazitaxel injection. Methods Experiments were conducted according to the bacterial endotoxin testing method in Chinese Pharmacopoeia 2010 edition(Volume II). Results： When diluted 40 times with specialized solvent, cabazitaxel has no interferential effect on the gelation reaction of endotoxin. Conclusion ：The established endotoxin testing method can be used in the quality control of cabazitaxel injection.

cabazitaxel injection; endotoxin test method; disturbance test

2016-01-17

R927.1

A

1008-021X(2016)04-0048-02