黃衛(wèi)紅，陳　亮，宋海娟（啟東市第三人民醫(yī)院內(nèi)科，江蘇南通226200）

幽門(mén)螺桿菌感染對(duì)胃癌患者血漿氧化抗氧化狀態(tài)及胃癌組織hOGG1 mRNA表達(dá)水平的影響

黃衛(wèi)紅，陳亮，宋海娟
（啟東市第三人民醫(yī)院內(nèi)科，江蘇南通226200）

目的研究幽門(mén)螺桿菌（Hp）感染對(duì)胃癌患者血漿氧化抗氧化狀態(tài)的影響。方法將2013年9月至2015年6月確診為胃癌的168例患者按是否感染Hp分為感染組（98例）和非感染組（70例），分別測(cè)定血漿氧化抗氧化指標(biāo)及8-羥基脫氧鳥(niǎo)苷（8-OHdG）水平，以及胃癌組織人8-羥基鳥(niǎo)嘌呤糖苷酶1（hOGG1）mRNA的表達(dá)。結(jié)果感染組患者血漿髓過(guò)氧化物酶、黃嘌呤氧化酶、丙二醛、8-OHdG水平及hOGG1 mRNA相對(duì)表達(dá)量均高于非感染組，超氧化物歧化酶、谷胱甘肽還原酶、總抗氧化能力水平均低于非感染組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。結(jié)論Hp感染能導(dǎo)致胃癌患者氧化抗氧化平衡失調(diào)更加明顯，且可能因此加重了DNA損傷。

螺桿菌，幽門(mén)；胃腫瘤；氧化；抗氧化；8-羥基鳥(niǎo)嘌呤糖苷酶

胃癌是我國(guó)高發(fā)的消化系統(tǒng)腫瘤之一，目前有研究表明，幽門(mén)螺桿菌（helicobacter pylori，Hp）感染是胃癌的主要發(fā)病因素之一［1］。李一鑫等［2］研究表明，伴Hp感染的胃癌患者預(yù)后往往較無(wú)Hp感染者差，5年生存率明顯下降。此外近年來(lái)研究還發(fā)現(xiàn)，由于體內(nèi)氧化抗氧化平衡失調(diào)，引發(fā)體內(nèi)氧自由基大量增加，氧自由基能夠?qū)w內(nèi)DNA造成損傷，導(dǎo)致DNA發(fā)生突變，進(jìn)而導(dǎo)致腫瘤的發(fā)生［3］。李玨等［4］研究表明，胃癌患者氧化應(yīng)激水平明顯上調(diào)而氧自由基清除能力則明顯下降。本研究觀察了伴Hp感染的胃癌患者氧化抗氧化狀態(tài)變化，旨在探討Hp感染對(duì)胃癌患者血漿氧化抗氧化狀態(tài)的影響，現(xiàn)報(bào)道如下。

1　資料與方法

1.1一般資料選取2013年9月至2015年6月本院普外科收治的且術(shù)后病理檢查確診為胃癌患者168例，其中男100例，女68例；年齡35～71歲，平均（49.88± 8.87）歲。168例患者病理類(lèi)型均為腺癌，術(shù)后胃癌標(biāo)本均經(jīng)改良吉姆薩染色和快速尿素酶試驗(yàn)進(jìn)行Hp鑒定。按是否伴Hp感染分為感染組（98例）和非感染組（70例）。感染組患者中男64例，女34例；平均年齡（50.67± 8.88）歲。非感染組患者中男36例，女34例；平均年齡（48.77±8.87）歲。兩組患者年齡、性別比較，差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。

1.2方法

1.2.1血漿氧化指標(biāo)檢測(cè)采集患者靜脈血5 mL，3000r/min離心10min，分離1～2mL血漿，-80℃低溫保存。應(yīng)用紫外分光光度法測(cè)定血漿髓過(guò)氧化物酶（myeloperoxidase，MPO）、黃嘌呤氧化酶（xanthine oxidase，XOD）、丙二醛（malondialdehyde，MDA）水平。試劑盒為南京建成生物研究所生產(chǎn)。

1.2.2血漿抗氧化指標(biāo)檢測(cè)應(yīng)用黃嘌呤氧化酶法測(cè)定血漿超氧化物歧化酶（super oxide dismutase，SOD）水平，應(yīng)用谷胱甘肽氧化酶法測(cè)定血漿谷胱甘肽還原酶（glutathione peroxidase，GSH-PX）水平，應(yīng)用紫外分光光度法測(cè)定血漿總抗氧化能力（total antioxidation competence，T-AOC）。試劑盒均為南京建成生物研究所生產(chǎn)。

1.2.3血漿 8-羥基脫氧鳥(niǎo)苷（8-oxodeoxyguanosine，8-OHdG）檢測(cè)應(yīng)用酶聯(lián)免疫吸附法檢測(cè)血漿8-OHdG水平，試劑盒為美國(guó)ADL公司生產(chǎn)，空白孔加樣品稀釋液100 μL，其余分別加標(biāo)準(zhǔn)品或待測(cè)樣品100 μL，37℃反應(yīng)120 min。棄液體并甩干后每孔加生物素標(biāo)記抗體工作液100 μL，37℃孵育60 min，棄孔內(nèi)液體并甩干，洗板3次，每孔加辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記親和素工作液100μL，37℃孵育60 min，依序每孔加底物溶液90 μL，37℃避光顯色，終止反應(yīng)，用酶聯(lián)儀在450 nm波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔光密度值在加終止液后15 min內(nèi)進(jìn)行檢測(cè)。

1.2.4實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)（polymerase chain reaction，PCR）檢測(cè)人8-羥基鳥(niǎo)嘌呤糖苷酶1（human 8-hydroxyguanine DNA-glycosylase 1，hOGG1）mRNA應(yīng)用異硫氰酸胍一步法提取胃癌組織RNA后進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)，使用Primer 5引物設(shè)計(jì)軟件設(shè)計(jì)引物，hOGG1正向引物序列為5′-GCACTGTGTACCGAGGAGAC-3，反向引物序列為5′-CAGCAGTCGCACACCTTGG-3′；產(chǎn)物長(zhǎng)度為176 bp。內(nèi)參甘油醛-3-磷酸脫氫酶正向引物序列為5′-CCTTCATTGACCTCAACTACATG-3′，反向引物序列為5′-CTTCTCCATGGTGGTGAAGAC-3′，產(chǎn)物長(zhǎng)度為215 bp。上述引物均由日本TAKARA公司合成。PCR反應(yīng)參數(shù)：94℃預(yù)變性5 min，94℃變性30 s，58℃退火30 s，72℃延伸45 s，合計(jì)35個(gè)循環(huán)，采用美國(guó)應(yīng)用生物系統(tǒng)公司生產(chǎn)Step OneTM實(shí)時(shí)PCR儀進(jìn)行PCR反應(yīng)并計(jì)算每個(gè)反應(yīng)管內(nèi)的熒光信號(hào)到達(dá)設(shè)定的閾值時(shí)所經(jīng)歷的循環(huán)數(shù)，即Ct值，并計(jì)算hOGG1 mRNA相對(duì)表達(dá)量。

1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)處理應(yīng)用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，計(jì)量資料以±s表示，采用t檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料以率或構(gòu)成比表示，采用χ2檢驗(yàn)。P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2　結(jié)　果

2.1兩組患者血漿氧化指標(biāo)比較感染組患者M(jìn)PO、XOD、MDA水平均高于非感染組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），見(jiàn)表1。

2.2兩組患者血漿抗氧化指標(biāo)比較感染組患者血漿SOD及GSH-PX、T-AOC水平均低于非感染組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），見(jiàn)表2。

表1　兩組患者血漿氧化指標(biāo)比較（±s）

表1　兩組患者血漿氧化指標(biāo)比較（±s）

注：-表示無(wú)此項(xiàng)。

組別感染組非感染組n 　M P O （U / L）　X O D （U / L）　M D A （n m o l / m L ）9 8 7 0 t P --2 8 . 3 4 ± 1 3 . 5 8 2 2 . 6 2 ± 1 1 . 5 3 2 . 8 6 ＜0 . 0 5 1 2 . 4 5 ± 6 . 7 8 9 . 5 8 ± 4 . 9 1 3 . 0 2 ＜0 . 0 5 2 0 . 7 5 ± 4 . 2 1 1 7 . 6 3 ± 3 . 5 8 5 . 0 8 ＜0 . 0 5

表2　兩組患者血漿抗氧化指標(biāo)比較（±s）

表2　兩組患者血漿抗氧化指標(biāo)比較（±s）

注：-表示無(wú)此項(xiàng)。

組別感染組非感染組n S O D （U / m L）　G S H -P X （U / m L）　T -A O C （U / m L ）9 8 7 0 t P --6 5 . 3 8 ± 2 5 . 7 6 7 9 . 6 4 ± 2 3 . 3 8 3 . 6 7 ＜0 . 0 5 7 2 3 . 5 6 ± 2 3 1 . 4 8 8 9 6 . 3 9 ± 1 9 8 . 3 2 5 . 0 6 ＜0 . 0 5 6 . 2 3 ± 3 . 3 2 7 . 9 5 ± 3 . 6 5 3 . 1 3 ＜0 . 0 5

2.3兩組患者血漿8-OHdG水平比較感染組患者血漿8-OHdG水平［（13.38±4.21）ng/mL］高于非感染組［（10.52± 3.19）ng/mL］，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=4.79，P＜0.05）。

2.4兩組患者胃癌組織hOGG1 mRNA表達(dá)情況比較感染組患者胃癌組織hOGG1 mRNA相對(duì)表達(dá)量（3.14±0.43）高于非感染組（1.03±0.21），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=37.93，P＜0.05）。

3　討　論

以往研究表明，胃癌患者血漿氧化指標(biāo)，如MPO、XOD、MDA均明顯高于健康者，血漿抗氧化指標(biāo)則明顯低于健康者，因此，胃癌的發(fā)生可能與氧化抗氧化平衡失調(diào)有關(guān)［5］。本研究測(cè)定了Hp感染胃癌患者血漿氧化抗氧化指標(biāo)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，Hp感染胃癌患者血漿氧化指標(biāo)，如MPO、XOD、MDA均明顯高于無(wú)Hp感染胃癌患者；而抗氧化指標(biāo)，如SOD、GSH-PX、T-AOC則均低于無(wú)Hp感染胃癌患者，表明Hp感染胃癌患者氧化抗氧化平衡失調(diào)更加明顯。

SOD能及時(shí)清除體內(nèi)超氧自由基，阻止其損傷脂類(lèi)形成危害更大的羥自由基［6］。GSH-PX能將有毒的過(guò)氧化物還原成無(wú)毒的羥基化合物，從而保護(hù)細(xì)胞膜結(jié)構(gòu)及功能不受過(guò)氧化物的干擾及損害［7］。此外有研究表明，急性白血病患者抗氧化指標(biāo)也明顯下調(diào)［8］，與本研究結(jié)果基本一致。導(dǎo)致Hp感染胃癌患者氧化抗氧化平衡紊亂的主要原因可能是Hp長(zhǎng)期慢性感染導(dǎo)致局部組織長(zhǎng)期慢性炎癥，導(dǎo)致局部組織大量炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)［2］，從而導(dǎo)致氧化指標(biāo)明顯升高，而抗氧化指標(biāo)則明顯降低。

本研究還測(cè)定了血漿8-OHdG水平，結(jié)果表明，Hp感染胃癌患者血漿8-OHdG水平明顯高于無(wú)Hp感染胃癌患者，且差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；hOGG1 mRNA相對(duì)表達(dá)水平也明顯高于無(wú)Hp感染胃癌患者。目前有研究表明，氧自由基能直接與DNA發(fā)生作用，從而導(dǎo)致DNA損傷和突變，其中最主要致突變性損傷反應(yīng)為C-8上鳥(niǎo)嘌呤與胸腺嘧啶堿基顛換性突變，產(chǎn)生8-OHdG，而8-OHdG被認(rèn)為具有突變傾向，因此，8-OHdG也被認(rèn)為是DNA氧化損傷的生物標(biāo)志［9］。同時(shí)有研究表明，hOGG1 是DNA氧化損傷修復(fù)途徑中清除8-OHdG的關(guān)鍵酶，hOGG1能特異性識(shí)別并切除8-OHdG［10］。Xiong等［11］對(duì)結(jié)腸癌的研究結(jié)果顯示，結(jié)腸癌患者血漿8-OHdG水平較健康者明顯升高，hOGG1蛋白表達(dá)和mRNA表達(dá)水平也明顯升高，表明其活性也明顯升高。

總之，本研究結(jié)果表明，Hp感染能導(dǎo)致胃癌患者氧化抗氧化平衡失調(diào)更加明顯，且可能加重了DNA損傷。

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Influence of Helicobacter pylori infection on plasma oxidation and antioxidant status and gastric cancer tissue hOGG1 mRNAexpression level in gastric cancer patients

Huang Weihong，Chen Liang，Song Haijuan（Department of Internal Medicine，Qidong Municipal Third People′s Hospital，Nantong，Jiangsu 226200，China）

ObjectiveTo study the influence of Helicobacter pylori（Hp）infection on the plasma oxidation and antioxidant status in the patients with gastric cancer.MethodsTotally 168 cases of definitely diagnosed gastric cancer from September 2013 to June 2015 were divided into the infection group（98 cases）and non-infection group（70 cases）according to whether having Hp infection.The levels of plasma oxidant and antioxidant indexes，8-hydroxydeoxyguanosine（8-OHdG）and gastric cancer tissue human 8-hydroxyguanine DNA-glycosylase 1（hOGG1）mRNA expression were detected.ResultsThe levels of plasma myeloperoxidase（MPO），xanthine oxidase（XOD），malondialdehyde（MDA）and 8-OHdG，and hOGG1 mRNA relative expression amount in the infection group were higher than those in the non-infection group，while the levels of super oxide dismutase（SOD），glutathione peroxidase（GSH-PX）and total antioxidation capacity（T-AOC）in the infection group were lower than those in the non-infection group，the differences were statistically significant（P＜0.05）.ConclusionHp infection could lead to the oxidant and antioxidant dysequilibrium more obvious，moreover aggravates the DNA damage.

Helicobacter pylori；Stomach neoplasm；Oxidant；Antioxidant；Human 8-hydroxyguanine DNA-glycosylase 1

10.3969/j.issn.1009-5519.2016.06.015

A

1009-5519（2016）06-0845-02

黃衛(wèi)紅（1979-），主治醫(yī)師，主要從事普內(nèi)科臨床和研究工作。

（2015-12-01）