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        百部-紫菀藥對(duì)不同配比組方的藥效作用研究*

        2016-09-02 02:14:56姜登釗肖欣戈唐進(jìn)波
        廣州化工 2016年5期
        關(guān)鍵詞:紫菀豚鼠平喘

        姜登釗,肖欣戈,唐進(jìn)波

        (1 九江學(xué)院藥學(xué)與生命科學(xué)學(xué)院,江西 九江 332000;

        2 江西博萊大藥廠有限公司,江西 九江 332100)

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        百部-紫菀藥對(duì)不同配比組方的藥效作用研究*

        姜登釗1,2,肖欣戈2,唐進(jìn)波2

        (1 九江學(xué)院藥學(xué)與生命科學(xué)學(xué)院,江西九江332000;

        2 江西博萊大藥廠有限公司,江西九江332100)

        分別采用小鼠呼吸道酚紅排泄法,小鼠濃氨水噴霧法,乙酰膽堿-組胺引喘豚鼠平喘實(shí)驗(yàn)考察百部、紫菀配伍前后及不同配比的止咳、化痰、平喘藥效作用。結(jié)果表明配伍能夠增強(qiáng)藥物的止咳、化痰、平喘藥效作用,其中百部-紫菀(1:2)組祛痰作用最強(qiáng),百部-紫菀(1:1)組止咳、平喘作用最強(qiáng),而配伍比例對(duì)于藥對(duì)的藥效作用也具有重要影響。

        百部;紫菀;配伍;配比;止咳;化痰;平喘

        藥對(duì)是中藥復(fù)方最小的組成單位,作為中藥配伍應(yīng)用的最常見形式,反映了復(fù)方配伍的特殊規(guī)律與內(nèi)在聯(lián)系,加強(qiáng)中藥藥對(duì)的配伍機(jī)制研究有助于對(duì)中藥復(fù)方配伍機(jī)制的理解。百部-紫菀藥對(duì)源自《醫(yī)學(xué)心語》中方劑止嗽散,臨床常用其加減方治療咳嗽變異性哮喘,具有非常良好的療效[1-2]。止嗽散原方由百部、紫菀、陳皮等七味藥物組成,其中百部-紫菀為其核心藥對(duì),屬相須相使的協(xié)同配伍,體現(xiàn)著該方藥效的核心作用。本研究通過觀察配伍前后及不同配伍比例百部-紫菀對(duì)止咳、化痰、平喘藥效作用的影響,初步探討藥對(duì)的配伍機(jī)理并探索配伍比例對(duì)藥對(duì)的藥效作用影響。

        1 實(shí) 驗(yàn)

        1.1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物與藥材

        雄性昆明種小鼠,體重18~22 g;雄性豚鼠,體重180~200 g;動(dòng)物飼養(yǎng)在室溫(25±2) ℃動(dòng)物房,給藥前自由攝食飲水。

        百部,紫菀均購自于九江市開心人大藥房,經(jīng)九江學(xué)院高春華教授鑒定為對(duì)葉百部StemonatuberosaLour.,紫菀AstertataricusL.f.。百部、紫菀藥材粉碎,將百部、紫菀單味藥材及百部-紫菀藥對(duì)按比例(1:1,1:2,2:1)經(jīng)過蒸餾水浸泡0.5 h后,煮沸提取,第一次提取1 h,第二次提取0.5 h,合并兩次提取液,水浴濃縮至原生藥量含量為3 g/mL。

        1.2試劑與儀器

        酚紅,上海試劑三廠;氯化乙酰膽堿,上海三愛思試劑;磷酸組胺,中科院上海生物化學(xué)研究所;氨水,上海試劑三廠;以上試劑均為分析純。

        2100型紫外分光光度計(jì),北京普析通用儀器有限責(zé)任公司;402型超聲霧化器,上海四菱醫(yī)療器械廠;B-Z型電子分析天平,梅特勒—托利多儀器上海有限公司。

        2 實(shí)驗(yàn)方法

        2.1小鼠呼吸道酚紅排泄實(shí)驗(yàn)[3-4]

        昆明種小鼠90只,隨機(jī)分為6組,每組15只,分別為空白對(duì)照組,百部組,紫菀組,百部-紫菀(1:1)組,百部-紫菀(1:2)組,百部-紫菀(2:1)組,每組連續(xù)灌胃給藥5天,每天一次,百部組,紫菀組給藥劑量為9 g/kg(相當(dāng)于成人臨床用量20倍),百部-紫菀藥對(duì)各組給藥劑量為18 g/kg(相當(dāng)于成人臨床用量20倍),空白組灌胃0.5% CMCNa。實(shí)驗(yàn)前禁食不禁水12 h。末次給藥后1 h,各實(shí)驗(yàn)組腹腔注射5% 酚紅生理鹽水溶液500 mg/kg,注射后30 min,脫頸椎處死小鼠,分離氣管,剪下0.5 cm長的氣管段放入2 mL生理鹽水試管中,加入1 mol/L NaOH 0.1 mL,振蕩30 min。以分光光度計(jì)在波長546 nm 條件下測定吸光值,根據(jù)酚紅標(biāo)準(zhǔn)曲線,計(jì)算酚紅排出量。

        2.2小鼠濃氨水噴霧法引咳實(shí)驗(yàn)[5]

        取小鼠90只,實(shí)驗(yàn)分組及給藥劑量同小鼠呼吸道酚紅排泄實(shí)驗(yàn)。末次給藥后1 h,將小鼠置于2 L玻璃鐘罩內(nèi),超聲霧化器噴入氨水10 s引咳,記錄小鼠咳嗽潛伏期及3 min內(nèi)咳嗽次數(shù)(從開始噴氨水到產(chǎn)生咳嗽的時(shí)間為小鼠咳嗽潛伏期;小鼠咳嗽的表現(xiàn)以小鼠收縮腹肌并張口為準(zhǔn),有時(shí)會(huì)發(fā)出咳聲)。

        2.3乙酰膽堿-組胺引喘豚鼠平喘實(shí)驗(yàn)[3]

        實(shí)驗(yàn)豚鼠預(yù)篩:采用噴霧致喘法,將豚鼠置于4 L透明玻璃鐘罩中,每只超聲霧化0.4%磷酸組胺和2%氯化乙酰膽堿1:1混合液30 s,動(dòng)物在吸入上述藥液后經(jīng)過一定的潛伏期,即產(chǎn)生哮喘反應(yīng),“哮喘”反應(yīng)按程序可分為四級(jí),I級(jí)呼吸加速,II級(jí)呼吸困難,III級(jí)抽搐,IV級(jí)跌倒。挑選潛伏期在120 s內(nèi)出現(xiàn)III級(jí)或IV級(jí)反應(yīng)(即抽搐和跌倒)的豚鼠。

        取60只預(yù)篩合格豚鼠,隨機(jī)分為6組,每組10只,分別為空白對(duì)照組,百部組,紫菀組,百部-紫菀(1:1)組,百部-紫菀(1:2)組,百部-紫菀(2:1)組,每組連續(xù)灌胃給藥5天,百部組,紫菀組給藥劑量為13.5 g/kg(相當(dāng)于成人臨床用量20倍),百部-紫菀藥對(duì)各組給藥劑量為27 g/kg(相當(dāng)于成人臨床用量20倍),每天一次,空白對(duì)照組灌胃0.5% CMCNa。實(shí)驗(yàn)前禁食不禁水12 h,末次給藥后1 h再按上法噴霧致喘,記錄出現(xiàn)III級(jí)及IV級(jí)哮喘反應(yīng)的潛伏期,引喘潛伏期超過6 min者以6 min計(jì)。

        2.4統(tǒng)計(jì)分析

        3 結(jié) 果

        3.1祛痰實(shí)驗(yàn)結(jié)果

        各實(shí)驗(yàn)組小鼠酚紅排出情況如表1所示。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,與空白對(duì)照組相比,所有給藥組均能夠促進(jìn)小鼠氣道酚紅排出,均具有顯著性差異(P<0.05),紫菀組小鼠酚紅排出強(qiáng)于百部組,且差異具有顯著性(P<0.05),表明紫菀的祛痰作用強(qiáng)于百部。百部-紫菀藥對(duì)各組小鼠酚紅排出均強(qiáng)于百部、紫菀單味藥組,且差異具有顯著性(P<0.05),表明配伍后祛痰作用增強(qiáng)。百部-紫菀各藥對(duì)組間比較,百部-紫菀(1:2)組祛痰作用強(qiáng)于另外兩組,且具有顯著性差異(P<0.05),提示百部、紫菀配比不同對(duì)藥對(duì)的祛痰作用具有重要影響。

        3.2止咳實(shí)驗(yàn)結(jié)果

        各實(shí)驗(yàn)組對(duì)小鼠咳嗽潛伏期及咳嗽次數(shù)的影響如表2所示。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,與空白對(duì)照組比較,各實(shí)驗(yàn)組均能夠延長小鼠咳嗽潛伏期,減少咳嗽次數(shù),且具有顯著性差異(P<0.05)。百部組止咳效果強(qiáng)于紫菀組,且差異具有顯著性(P<0.05),但咳嗽潛伏期并無顯著性差異;百部-紫菀藥對(duì)各組小鼠止咳效果及延長小鼠咳嗽潛伏期均強(qiáng)于百部、紫菀單味藥組,且差異具有顯著性(P<0.05),表明配伍后止咳作用增強(qiáng)。百部-紫菀各藥對(duì)組間比較,百部-紫菀(1:1)組延長小鼠咳嗽潛伏期,減少咳嗽次數(shù)作用強(qiáng)于另外兩組,且具有顯著性差異(P<0.05),提示百部、紫菀配比不同對(duì)藥對(duì)的止咳作用具有重要影響。

        表1 各實(shí)驗(yàn)組小鼠酚紅排出濃度

        注:①與空白對(duì)照組比較,P<0.05;②與百部組比較,P<0.05;③與百部組比較,P<0.05;④與百部-紫菀(1:1)組比較,P<0.05;⑤與百部-紫菀(1:2)組比較,P<0.05;⑥與百部-紫菀(2:1)組比較,P<0.05。

        表2 各實(shí)驗(yàn)組小鼠咳嗽潛伏期及咳嗽次數(shù)±s, n=15)

        注:①與空白對(duì)照組比較,P<0.05;②與百部組比較,P<0.05;③與百部組比較,P<0.05;④與百部-紫菀(1:1)組比較,P<0.05;⑤與百部-紫菀(1:2)組比較,P<0.05;⑥與百部-紫菀(2:1)組比較,P<0.05。

        3.3平喘實(shí)驗(yàn)結(jié)果

        各實(shí)驗(yàn)組對(duì)豚鼠抽搐潛伏期的影響如表3所示。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,與空白對(duì)照組比較,各實(shí)驗(yàn)組均能夠延長豚鼠抽搐潛伏期,且具有顯著性差異(P<0.05)。百部組平喘效果稍強(qiáng)于紫菀組,但差異并不具有顯著性(P>0.05);百部-紫菀藥對(duì)各組豚鼠抽搐潛伏期均強(qiáng)于百部、紫菀單味藥組,且差異具有顯著性(P<0.05),表明配伍后平喘作用增強(qiáng)。百部-紫菀各藥對(duì)組間比較,百部-紫菀(1:1)組延長豚鼠抽搐潛伏期,平喘作用強(qiáng)于另外兩組,且具有顯著性差異(P<0.05),提示百部、紫菀配比不同對(duì)藥對(duì)的平喘作用具有重要影響。

        表3 各實(shí)驗(yàn)組豚鼠抽搐潛伏期±s, n=10)

        注:①與空白對(duì)照組比較,P<0.05;②與百部組比較,P<0.05;③與紫菀組比較,P<0.05;④與百部-紫菀(1:1)組比較,P<0.05;⑤與百部-紫菀(1:2)組比較,P<0.05;⑥與百部-紫菀(2:1)組比較,P<0.05。

        4 討 論

        方劑配伍規(guī)律是中醫(yī)方劑理論的核心問題,以藥對(duì)研究為切入點(diǎn)是揭示方劑配伍規(guī)律與科學(xué)內(nèi)涵的有效途徑,也是近年來方劑研究的熱點(diǎn)方向。藥對(duì)的配伍不是藥物作用的簡單相加,而是通過藥物之間錯(cuò)綜復(fù)雜的相互作用而發(fā)揮綜合功效。目前的研究表明,藥對(duì)配伍后能夠顯著增強(qiáng)藥效作用甚至可能會(huì)產(chǎn)生單味藥材沒有的生理作用[6-7];也可能會(huì)有利于有效物質(zhì)的溶出,從而增強(qiáng)藥效作用[8-9];還可能對(duì)藥物的體內(nèi)吸收、代謝過程造成影響,提高藥效成分的生物利用度[10-11];而部分藥對(duì)配伍則能夠降低藥物的毒性或副作用產(chǎn)生影響[12]。

        百部甘潤苦降,紫菀辛散苦降,百部-紫菀藥對(duì)從四氣五味和升降浮沉分析屬于溫溫配對(duì),二者合用,共奏降氣祛痰、潤肺止咳之功效;從歸經(jīng)來看,兩藥皆專入肺經(jīng),合用則潤肺宣肺,增強(qiáng)止咳祛痰之效;從七情和合來看,兩者屬相須相使的協(xié)同配伍,主潤肺降氣、化痰止咳[13]。本研究通過對(duì)比百部-紫菀配伍前后的止咳、化痰、平喘作用探討配伍對(duì)藥效的影響,同時(shí)對(duì)比了配伍比例對(duì)上述藥效作用的影響。結(jié)果表明百部-紫菀配伍后,與單味藥相比,止咳、化痰、平喘作用明顯增強(qiáng),且具有顯著性差異(P<0.05),說明百部與紫菀配伍產(chǎn)生了協(xié)同效果,增強(qiáng)了藥效作用。而百部-紫菀藥對(duì)不同配伍比例的止咳、化痰、平喘實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,百部-紫菀(1:2)組祛痰作用最強(qiáng),且與其他兩組具有顯著性差異(P<0.05),表明紫菀的比例提高有利于增強(qiáng)藥對(duì)的祛痰作用;百部-紫菀(1:1)組止咳、平喘作用最強(qiáng),且與其他兩組具有顯著性差異(P<0.05),這也與止嗽散中兩者的比例(1:1)相吻合,表明兩者的配伍比例對(duì)于藥對(duì)的止咳、平喘作用確實(shí)具有重要意義,這也體現(xiàn)了中醫(yī)方劑配伍理論的量效關(guān)系原理[14]。

        [1]胡軍旗, 郎雅麗, 張副興, 等. 止嗽散治療咳嗽變異性哮喘療效評(píng)價(jià)[J]. 中醫(yī)學(xué)報(bào), 2015, 30(3): 333-336.

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        Effect of Stemona Tuberosa and Aster Tataricus with Different Proportions on Antitussive, Antiasthmatic and Expectorant Activities*

        JIANGDeng-zhao1,2,XIAOXin-ge2,TANGJin-bo2

        (1 School of Pharmacy and Life Sciences, Jiujiang University, Jiangxi Jiujiang 332000;2 Jiangxi Bolai Pharmacy Co., Ltd., Jiangxi Jiujiang 331000, China)

        In this study, the effects ofStemonatuberosaandAstertataricuswith different proportions on antitussive, antiasthmatic and expectorant activities were observed. The expectorant effects were observed on phenol red expectorant experiment, the antitussive effects were observed on ammonia water-induced cough model of mice and the antiasthmatic effects was observed by prolonging the latent period of asthma induced by histamine and acetylcholine mixture in guinea pigs. The results showed that the antitussive, antiasthmatic and expectorant activities were enhanced when compatibility of StemonatuberosaandAstertataricus. The effect of expectorant activity was the strongest when the compatibility ratio ofStemonatuberosaandAstertataricuswas 1:2 while antitussive and antiasthmatic activities were 1:1 which suggested that proportion had an important role in the pharmacodynamic function.

        StemonatuberosaLour.;AstertataricusL.f.; compatibility; proportion; antitussive; antiasthmatic; expectorant

        江西省自然科學(xué)基金項(xiàng)目(20142BAB205081);國家自然科學(xué)基金項(xiàng)目(81560642)。

        姜登釗(1982-),男,博士,講師,主要從事中藥藥效活性成分及復(fù)方配伍機(jī)制研究。

        R285.5

        B

        1001-9677(2016)05-0052-03

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