羅 森 袁崇均 陳 帥 王 笳

紫外分光光度法測(cè)定川射干葉的總黃酮含量※

羅 森 袁崇均 陳 帥 王 笳

目的 建立川射干葉中總黃酮含量測(cè)定的方法。方法 采用紫外分光光度法測(cè)定川射干葉中總黃酮的含量，以射干苷為對(duì)照品，測(cè)定波長(zhǎng)為 266 nm。結(jié)果 射干苷在 0.8244～9.0684 μg/ml范圍內(nèi)與吸光度呈良好的線性關(guān)系，r=0.9998，回收率為99.48%，RSD為1.23%，川射干總黃酮的平均含量為3.42%。結(jié)論 該方法操作簡(jiǎn)便、靈敏、準(zhǔn)確、具有良好的重復(fù)性和回收率，可作為川射干葉的總黃酮含量測(cè)定方法。

紫外分光光度法；川射干葉；總黃酮；含量測(cè)定

【Abstract】Objective To establish a method for determination of total flavonoids in leaves of Iris tectorum Maxim. Methods Determination of total flavonoids in leaves of Iris tectorum Maxim. by UV spectrophotometry，Belamcandin as control sample，the detection wavelength was 266 nm.Results Belamcandin in 0.8244～9.0684 μg/ml range and absorbance showed good linear relationship，r=0.9998，recovery rate was 99.48%，RSD=1.23%，the average content of the total flavonoids in chuanshegan 3.42%.Conclusion The method is simple，sensitive，accurate and has good repeatability and recovery rate can be used for determination of total flavonoids content in leaves of Iris tectorum Maxim..

【Key words】Ultraviolet spectrophotometric method；The leaves of Iris tectorum Maxim.；Total flavonoids；Determination of content

川射干為鳶尾科植物鳶尾 Iris tectorum Maxim.的干燥根莖，主產(chǎn)于四川、重慶、貴州、云南、廣西等省份，具有清熱解毒、祛痰、利咽的功效，用于熱毒痰火郁結(jié)，咽喉腫痛、痰涎壅盛、咳嗽氣喘［1］，其總黃酮提取物有很強(qiáng)的藥理作用［2-5］。而一種植物的不同部位，一般具有相似的化學(xué)成分，在川射干葉中發(fā)現(xiàn)其含有豐富的總黃酮成分，為了便于對(duì)其進(jìn)行研究，本研究以射干苷為對(duì)照品，對(duì)川射干葉的總黃酮含量進(jìn)行了測(cè)定。

1 儀器與材料

1.1 試驗(yàn)儀器 UV-2401PC型紫外分光光度計(jì)（島津），CPA225D型電子天平（賽多利斯），KQ-500E型超聲波清洗器（昆山市超聲波儀器有限公司）。

1.2 試驗(yàn)材料 川射干葉由本院中藥種植與資源所夏燕莉副研究員提供，采自其川射干培育基地（四川省成都市雙流縣），經(jīng)鑒定為鳶尾科鳶尾屬植物鳶尾Iris tectorum Maxim.的葉，對(duì)照品射干苷（自制，批號(hào)：20130701，含量＞99%）。

1.3 試驗(yàn)試劑 乙醇為分析純，水為純化水。

2 方法與結(jié)果

2.1 供試品溶液的制備 取川射干葉鮮葉，洗凈、剪碎、烘干，粉碎成細(xì)粉（過(guò) 60目篩），精密稱(chēng)取500 mg，置于具塞三角瓶中，加入50 ml 70%乙醇，稱(chēng)定重量，超聲30 min，取出，補(bǔ)足減失的重量，混勻，過(guò)濾，取續(xù)濾液，搖勻，備用。

2.2 對(duì)照品溶液的制備 精密稱(chēng)取經(jīng)105 ℃干燥至恒重的射干苷對(duì)照品10 mg于50 ml容量瓶中。用70%乙醇溶解并定容至刻度，搖勻，備用。

2.3 含量測(cè)定方法 精密吸取對(duì)照品溶液 1.0 ml、供試品溶液1.0 ml分別置于50 ml容量瓶中，加70%乙醇至刻度，搖勻。以 70%乙醇為空白，按紫外分光光度法，在266 nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸收度，并計(jì)算其含量。

2.4 測(cè)定波長(zhǎng)的選擇 取2.1和2.2項(xiàng)下溶液各1.0 ml，分別置于50 ml容量瓶中，加70%乙醇至刻度，搖勻。以70%乙醇為空白，在200～400 nm范圍內(nèi)掃描吸收曲線，供試品與對(duì)照品的吸收曲線形狀一致，在266 nm處有最大吸收峰。故確定266 nm為測(cè)定波長(zhǎng)。

2.5 線性關(guān)系考察 分別精密吸取對(duì)照品溶液0.2、0.4、0.6、0.8、1.0、1.2、1.4、1.6、1.8、2.0、2.2 ml 于50 ml容量瓶中，加70%乙醇稀釋至刻度，搖勻，在266 nm波長(zhǎng)處以70%乙醇為空白，測(cè)定吸收度。以濃度C（橫軸）對(duì)吸收度A（縱軸）作圖，得一條略高于原點(diǎn)的直線，線性方程為y=0.1099x-0.017，r=0.9998（n=11），線性范圍為0.8244～9.0684 μg/ml。

2.6 精密度試驗(yàn) 取2.1和2.2項(xiàng)下溶液各1.0ml，分別置于50 ml容量瓶中，按2.3項(xiàng)下含量測(cè)定方法重復(fù)測(cè)定 6次。測(cè)得的吸收度值無(wú)明顯變化，對(duì)結(jié)果進(jìn)行計(jì)算，RSD分別為0.42%、0.57%。

2.7 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取2.1和2.2項(xiàng)下溶液各1.0 ml，分別置于50 ml容量瓶中，按2.3項(xiàng)下含量測(cè)定方法于0、1、2、3、4、5、6 h進(jìn)行測(cè)定。測(cè)得的吸收度值無(wú)明顯變化，對(duì)結(jié)果進(jìn)行計(jì)算，RSD=0.85%，表明對(duì)照品、供試品溶液在6 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.8 重現(xiàn)性試驗(yàn) 取川射干葉細(xì)粉 6份，每份約500 mg，精密稱(chēng)定，按2.1項(xiàng)下方法制備供試品溶液，另取2.2項(xiàng)下對(duì)照品溶液，按2.3項(xiàng)下含量測(cè)定方法進(jìn)行測(cè)定，對(duì)結(jié)果進(jìn)行計(jì)算，結(jié)果樣品總黃酮含量為 3.425，RSD=1.16%（n=6），表明該方法重現(xiàn)性良好。

2.9 加樣回收率試驗(yàn) 取已知總黃酮含量（3.39%）的川射干葉細(xì)粉約250 mg，共6份，精密稱(chēng)定，加入適量的對(duì)照品，按2.1項(xiàng)下方法制備6份供試品溶液，并按2.3項(xiàng)下含量測(cè)定方法測(cè)定總黃酮含量，計(jì)算加樣回收率。結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果（n=6）

2.10 樣品含量測(cè)定 取川射干葉鮮葉，洗凈、剪碎、烘干，粉碎成細(xì)粉（過(guò)60目篩），每份約500 mg，按2.1項(xiàng)下方法制備供試品溶液，按2.3項(xiàng)下含量測(cè)定方法進(jìn)行測(cè)定，計(jì)算 5份樣品的含量測(cè)定結(jié)果，見(jiàn)表2。

表2 川射干葉含量測(cè)定結(jié)果

3 討論

在樣品制備方法考察時(shí)，本研究比較了超聲處理30 min和70%乙醇回流提取1 h兩種處理方法，通過(guò)波長(zhǎng)掃描和含量測(cè)定，結(jié)果無(wú)明顯差異。對(duì)超聲處理時(shí)間的選擇上，分別選擇 10、20、30、40、50、60 min進(jìn)行比較，結(jié)果發(fā)現(xiàn)超聲處理30 min以上樣品含量達(dá)到最大，后續(xù)時(shí)間延長(zhǎng)無(wú)顯著差異，故選用超聲提取30 min。

川射干的代表性成分，如射干苷、射干苷元、二甲基射干苷元等均為異黃酮成分，其總黃酮含量的高低是其實(shí)現(xiàn)藥理作用的關(guān)鍵。川射干葉所含的代表性成分與藥材相似，可能存在與川射干藥材相似的藥理作用。通過(guò)本研究方法可以對(duì)川射干葉的總黃酮含量進(jìn)行測(cè)定，具有良好的重現(xiàn)性和準(zhǔn)確性，為更好地研究利用這一植物藥材資源提供了技術(shù)支持。

［1］ 中華人民共和國(guó)國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典（2015年版一部）［S］.北京:中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2015:41-42.

［2］ 劉亞靈，寧楠，李利民.咽喉康膠囊的鎮(zhèn)痛和止咳作用［J］.華西藥學(xué)雜志，2007，22（6）:647-649.

［3］ 袁崇均，王笳，陳帥，等.川射干化學(xué)成分的研究［J］.天然產(chǎn)物研究與開(kāi)發(fā)，2008，20（3）:444-446.

［4］ 袁崇均，王笳，陳帥，等.射干苷標(biāo)準(zhǔn)品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究［J］.中國(guó)藥房，2008，19（33）:2594-2596.

［5］ 袁崇均，王笳，陳帥，等.川射干總黃酮含量測(cè)定方法的比較研究［J］.四川中醫(yī)，2009，27（8）:58-59.

UV spectrophotometric Determination of Total Flavonoid in Leaves of Iris tectorum Maxim.

Luo Sen Yuan Chongjun Chen Shuai Wang Jia

R927.2；R284

A 【DOI】10.12010/j.issn.1673-5846.2016.08.002

四川省中醫(yī)藥科學(xué)院，四川成都 610041

※四川省公益性科研院所基本科研項(xiàng)目（編號(hào)：A-2014N-3）

羅森（1982-），助理研究員。主要從事中藥藥學(xué)研究。E-mall：mnmls@163.com