周喜燕　李　彬　呂以靜　李　寧（山東省青島市海慈醫(yī)療集團，山東 青島 266000）

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星蔞承氣湯對缺血性中風(fēng)大鼠自由基代謝及腦水腫的影響

周喜燕李彬呂以靜李寧
（山東省青島市海慈醫(yī)療集團，山東 青島 266000）

目的 探討星蔞承氣湯治療缺血性中風(fēng)的作用機制。方法 SD大鼠隨機分為假手術(shù)組、模型組和治療組，采用自體糞便灌胃加鼠腦立體定位注射法復(fù)制痰熱腑實證缺血中風(fēng)大鼠模型，分別測定各組大鼠血SOD、MDA的含量及腦組織含水量，并在不同時點評定神經(jīng)功能缺損評分。結(jié)果 治療組腦組織含水量明顯低于模型組（P＜0.01）。治療組與模型組相比較，SOD水平升高，MDA水平降低，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.01）。結(jié)論 星蔞承氣湯可提高大鼠血SOD含量，降低MDA含量，減輕腦組織水腫，提示其有抗自由基損傷的作用。

星蔞承氣湯缺血性中風(fēng)痰熱腑實腦水腫SODMDA

缺血性中風(fēng)病 （腦梗死）是最常見的腦血管病急癥，約占全部腦血管病的70%，其病死率約10%，致殘率達50%以上，在存活者中復(fù)發(fā)率達40%以上，而復(fù)發(fā)次數(shù)越多其病死率和致殘率越高［1］。臨床研究提示，約有40%～50%的患者在缺血中風(fēng)急性期表現(xiàn)出痰熱腑實證，痰熱阻滯、腑氣不通，成為此時病機的主要矛盾［2］。星蔞承氣湯作為化痰通腑法的代表方劑目前被廣泛應(yīng)用于臨床，且療效顯著，但其作用機制尚未完全闡明。本研究通過觀察星蔞承氣湯對缺血性中風(fēng)痰熱腑實證大鼠自由基代謝及腦水腫的影響，從動物實驗角度探討其可能的作用機制。

1　資料與方法

1.1藥物與試劑星蔞承氣湯：全瓜蔞15 g，膽南星9 g，生大黃6 g（后下），芒硝6 g（沖服）。藥材由青島市海慈醫(yī)療集團中藥制劑室提供，制得煎液備用，生藥含量為4.8 g/mL；檢測試劑盒均購自南京建成生物醫(yī)學(xué)工程研究所。

1.2動物與分組雄性健康SD大鼠，體質(zhì)量250～300 g，由青島市實驗動物中心提供，動物許可證號：20140007。將大鼠隨機分為假手術(shù)組、模型組和治療組，每組8只。

1.3模型制備

1.3.1痰熱腑實證模型大鼠適應(yīng)性喂養(yǎng)3 d后，第4日，模型組、治療組復(fù)制痰熱腑實證模型［3］：用10%自體糞便灌胃（1 mL/100 g），每日1次，連續(xù)3 d。大鼠每日定量投放飼料（10 g/100 g體質(zhì)量），飲水不限，每日收集糞便1次，觀察糞便性狀、記錄糞便粒數(shù)及糞便質(zhì)量。假手術(shù)組以等量涼開水灌胃，每日1次，連續(xù)3 d。

1.3.2急性缺血性中風(fēng)模型實驗第7日，模型組和治療組參考文獻［4］方法制備急性缺血中風(fēng)大鼠模型。用10%水合氯醛進行腹腔麻醉 （用量300 mg/kg），將大鼠俯臥位固定于腦立體定向儀上，麻醉后，在模型鼠顱頂沿正中線做一切口，長約1.5 cm，暴露出顱骨，以前囟做為標(biāo)志，向前0.9 mm，向左旁開5.2 mm，向下8.7 mm植入ET-1導(dǎo)管；將ET-1（60 pmol/μL）以0.6 μL/min的速率注射到MCA附近，留針5 min，后緩慢拔針，退針后縫合頭皮；術(shù)口局部以酒精消毒。分別于缺血2、24、72 h，參照Zea Longa評定標(biāo)準(zhǔn)［5］進行神經(jīng)功能評分。評分標(biāo)準(zhǔn)：0分：無神經(jīng)功能缺失癥狀，活動正常；1分：不能完全伸展對側(cè)前爪；2分：爬行時出現(xiàn)向右轉(zhuǎn)圈；3分：行走時，身體向偏癱側(cè)傾倒；4分：不能自發(fā)行走，意識喪失；5分：死亡。剔除評分為0分和4分及以上者，隨機補充保證每組8只。

1.4給藥方法治療組大鼠術(shù)后麻醉清醒后即予星蔞承氣湯7.0 g/（kg·d）灌胃（按大鼠與人體表面積等效劑量折算，相當(dāng)于70 kg體質(zhì)量成人臨床劑量的7倍），連續(xù)3 d。假手術(shù)組、模型組術(shù)后麻醉清醒后灌服等體積涼開水，連續(xù)3 d。

1.5標(biāo)本采集及檢測

1.5.1超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）檢測經(jīng)大鼠眼眶采血，取5 mL至分離膠管中，4℃，3000 r/min離心10 min，取上層血清，采用放射免疫分析法測定SOD，硫代巴比妥酸（TBA）比定法測定MDA，操作過程中嚴格按照試劑盒說明進行。

1.5.2腦組織含水量測定將各組采血后的大鼠斷頭取腦，除去嗅球、腦干及小腦，取右腦半球樣本稱質(zhì)量，后放入105℃的烤箱內(nèi)烘烤，48 h后再次稱質(zhì)量。腦含水量=［（濕質(zhì)量-干質(zhì)量）/濕質(zhì)量］×100%。

2　結(jié)　果

2.1各組大鼠神經(jīng)功能缺失評分的比較見表1。結(jié)果示，經(jīng)星蔞承氣湯治療后，治療組大鼠神經(jīng)功能缺損評分較治療前及同時點模型組相比明顯改善 （P＜0.01），差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。

表1　各組大鼠不同時點神經(jīng)功能缺失評分比較（分，±s）

表1　各組大鼠不同時點神經(jīng)功能缺失評分比較（分，±s）

與模型組同時點比較，*P＜0.01；與本組2 h時比較，△P＜0.01。

組別n　72 h 2 h　24 h假手術(shù)組8　0模型組　8　2.625±0.521 0 0 2.250±0.707　2.625±0.518治療組　8　1.375±0.517*△2.125±0.641　2.375±0.926

2.2各組大鼠血指標(biāo)的比較見表2。模型組與假手術(shù)組相比，SOD水平降低、MDA水平升高，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）；經(jīng)星蔞承氣湯治療后，治療組與模型組相比較，SOD水平升高（P＜0.01），MDA水平數(shù)值降低，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.01）。

表2　各組大鼠血清SOD、MDA水平比較（±s）

表2　各組大鼠血清SOD、MDA水平比較（±s）

與模型組比較，*P＜0.05，**P＜0.01；與假手術(shù)組比較，△P＜0.05，△△P＜0.01。下同。

組別　n　SOD（U/L）　MDA（nmol/L）假手術(shù)組　8　252.491±31.285　2.684±0.472模型組　8　116.738±40.169△　5.364±0.419△治療組　8　173.298±56.108**　3.983±0.522**

2.3各組大鼠腦組織含水量的比較見表3。治療后，與模型組、假手術(shù)組比較，治療組腦組織含水量明顯下降，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.01）。

表3　各組大鼠腦組織含水量比較（±s）

表3　各組大鼠腦組織含水量比較（±s）

組別　n　含水量（%）假手術(shù)組　8　18.44±2.04模型組　8　21.23±1.58治療組　8　14.94±2.37**△△

3　討　論

實驗研究發(fā)現(xiàn)，在缺血性中風(fēng)的急性期，腦血流中斷后再灌注雖然能恢復(fù)缺血組織的血供、挽救瀕死的神經(jīng)細胞，但同時也對神經(jīng)細胞產(chǎn)生了一個快速的級聯(lián)反應(yīng)損傷，最終導(dǎo)致神經(jīng)細胞凋亡或壞死，即缺血-再灌注損傷［6］。腦缺血再灌注損傷是由多種因素參與的、復(fù)雜生理病理過程，其中氧自由基的生成及其引起的脂質(zhì)過氧化是其損傷的重要機制之一［7］。機體在正常情況下，可產(chǎn)生少量的自由基，但被體內(nèi)的自由基清除系統(tǒng)很快清除，組織細胞不會被損傷；但當(dāng)腦缺血再灌注時，體內(nèi)自由基清除系統(tǒng)功能下降，大量氧自由基在腦內(nèi)缺血再灌注區(qū)產(chǎn)生，廣泛攻擊缺血區(qū)的生物膜結(jié)構(gòu)（富含不飽和脂肪酸雙鏈），導(dǎo)致脂質(zhì)過氧化，出現(xiàn)“瀑布狀”連鎖反應(yīng)，引起生物膜結(jié)構(gòu)和功能的破壞［8-9］。SOD作為機體細胞內(nèi)重要的抗氧化酶和自由基清除劑，可以通過減少腦組織損傷后自由基的過度生成并加速其清除，減輕氧自由基對生物膜結(jié)構(gòu)及其功能的破壞，從而保護組織細胞；MDA是脂質(zhì)過氧化的最終產(chǎn)物，測定MDA可直接反應(yīng)體內(nèi)自由基水平，其高低又間接反映了機體受自由基攻擊的嚴重程度［10-11］。當(dāng)機體發(fā)生病變時體內(nèi)SOD和MDA的含量也發(fā)生改變。

中醫(yī)學(xué)認為中風(fēng)后氣機逆亂，痰熱毒邪內(nèi)蘊，阻于中焦形成痰熱腑實證，是中風(fēng)病急性期的主要證候之一，是影響病情程度和轉(zhuǎn)歸預(yù)后的重要因素。星蔞承氣湯是王永炎教授在觀察中風(fēng)患者病情發(fā)展、結(jié)合臨床實踐總結(jié)出來的化痰通腑法的代表方劑［12］。文獻研究表明，星蔞承氣湯治療急性腦梗死，可起到以下幾方面的功效：一是通降陽明胃腑之氣，折伐肝氣，可平降肝陽；二是借陽明泄下之力以引血下行，以降氣化痰祛瘀，促進患者神經(jīng)功能的恢復(fù)［13-14］；三是星蔞承氣湯為苦寒清熱攻下之劑，方中瓜蔞清熱祛痰，理氣散結(jié)；膽南星清熱息風(fēng)通絡(luò)化痰，配瓜蔞祛中焦之濁邪；生大黃后下，通腑蕩滌腸胃，峻下熱結(jié)；芒硝軟堅散結(jié)，配生大黃共達通降腑氣；4藥相配，化痰熱、通腑氣，能改善中風(fēng)病急性期諸癥［15］。

本研究觀察發(fā)現(xiàn)造模后模型組、治療組模型血SOD含量較假手術(shù)組均下降，MDA含量升高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。治療后治療組SOD含量升高，MDA含量下降，腦組織含水量降低，有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05），說明星蔞承氣湯可顯著提高急性缺血中風(fēng)大鼠的SOD活性，使體內(nèi)氧自由基減少，從而減少了氧自由基引起的脂質(zhì)過氧化損傷；降低MDA含量，可減輕缺血所致的腦組織自由基損傷，給損傷組織的修復(fù)創(chuàng)造一個較好的環(huán)境。因此星蔞承氣湯在臨床治療急性缺血性中風(fēng)的過程中療效顯著，可能是通過減輕氧自由基損傷、消除腦水腫實現(xiàn)的。

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10.3969/j.issn.1004-745X.2016.05.028

2015-12-02）