羅杰　張興虎　王堅(jiān)

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80歲以上老年人外周血T細(xì)胞亞群CD28的表達(dá)及胸腺肽α1對(duì)其影響

羅杰張興虎王堅(jiān)

目的探討高齡老年人(≥80歲)較普通老年人(60～70歲)外周血T淋巴細(xì)胞亞群數(shù)量及T細(xì)胞CD28表達(dá)的差異,并觀察胸腺肽α1對(duì)高齡老人的作用。方法選取高齡老年人及普通老年人各40例,分別檢測(cè)2組的外周血T淋巴細(xì)胞亞群的百分比及T細(xì)胞CD28水平。給予高齡老人組胸腺肽α1注射劑1.6 mg,皮下注射,2次/周,療程為4周,于治療后4周檢測(cè)外周血上述免疫指標(biāo)。結(jié)果高齡老年人組較普通老年組外周血CD8+的百分比及CD4+CD28+的表達(dá)無差異,而CD4+的百分比及CD8+CD28+的表達(dá)明顯降低(P<0.05)。高齡老人應(yīng)用胸腺肽α1后CD4+的百分比及CD8+CD28+水平明顯提高(P<0.05)。結(jié)論高齡老年人較普通老年人免疫功能出現(xiàn)了進(jìn)一步下降,而胸腺肽α1能明顯增強(qiáng)高齡老年人的部分免疫功能。

80歲以上老年人; T淋巴細(xì)胞亞群; CD28; 胸腺肽α1

目前,免疫衰老是免疫研究領(lǐng)域的一個(gè)重點(diǎn)。CD28分子是T淋巴細(xì)胞表面主要的共刺激分子受體,是屬于免疫球蛋白超家屬成員,它與抗原提呈細(xì)胞表面的B7分子結(jié)合,為T細(xì)胞的活化提供第二信號(hào)。而CD28分子的丟失致使老年機(jī)體對(duì)新抗原的細(xì)胞免疫功能降低。胸腺肽α1是一種具有多種效應(yīng)的免疫增強(qiáng)劑,可以明顯促進(jìn)同種T細(xì)胞的增殖,增強(qiáng)輔助性T細(xì)胞(Th細(xì)胞)的免疫功能,從而使機(jī)體更有效地發(fā)揮其免疫防護(hù)作用[2]。本試驗(yàn)主要研究高齡老年人T細(xì)胞亞群及CD28的表達(dá),以及應(yīng)用胸腺肽α1后上述指標(biāo)的變化,以闡明高齡老年人免疫功能的改變及胸腺肽α1對(duì)其的影響作用。

1　 材料與方法

1.1研究對(duì)象試驗(yàn)組為80歲以上老年人40例,男25例,女15例,年齡≥80歲,平均(88.8±9.5)歲。排除有腫瘤、糖尿病、慢性感染、自身免疫性疾病、服用免疫抑制劑,接受過免疫增強(qiáng)劑的治療的患者;取普通老年人40例作為對(duì)照組,男23例,女17例,年齡60～70歲,平均(67.1±10.4)歲。也同樣排除上述疾病。研究對(duì)象均為南京市部隊(duì)干休所老干部,試驗(yàn)組和對(duì)照組體質(zhì)量分別為(68.7±12.6) kg和(72.3±15.1) kg,2組收縮壓分別為(133.3±21.5) mmHg和(126.4±24.4) mmHg,2組舒張壓分別為(45.62±11.03) mmHg和(50.82±9.09) mmHg,2組三酰甘油分別為(1.74±2.04) mmol/L和(1.82±1.39) mmol/L, 膽固醇分別為(4.23±3.24) mmol/L和(4.89±2.59) mmol/L,糖化血紅蛋白分別為(6.64±1.57) mmol/L和(6.16±1.01) mmol/L,2組體質(zhì)量、血壓、血脂及血糖比較,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P均>0.05)。本試驗(yàn)經(jīng)所有研究對(duì)象的同意(簽知情同意書),并得到了醫(yī)院倫理委員會(huì)的批準(zhǔn)。

1.2主要試劑Anti-h CD4-FITC、Anti-h CD8-FITC購(gòu)自晶美生物工程公司; Anti-h CD28-PE(單熒光標(biāo)記抗體)購(gòu)自晶美生物BioLegend公司;胸腺肽α1注射劑(成都地奧九泓制藥,國(guó)藥準(zhǔn)字H20020545);流式細(xì)胞儀(Beckman Coulter公司的CYTOMICS FC500)。

1.3試驗(yàn)方法分別檢測(cè)高齡老年人及普通老年人外周血CD4+及CD8+T細(xì)胞的百分比及其CD28表達(dá)的水平;前組給予胸腺肽α1注射劑1.6 mg,皮下注射,2次/周,療程為4周,于治療后4周檢測(cè)外周血T細(xì)胞CD28的水平。

1.4熒光染色檢測(cè)每個(gè)受試者均抽空腹晨血1 ml(肝素抗凝),每份樣本取2個(gè)試管,1管分別加入Anti-h CD4-PE-FITC和Anti-h CD28-PE,另1管分別加入Anti-h CD8-FITC和Anti-h CD28-PE,各10 μl,然后分別加入抗凝血100 μl混勻,溫室避光20 min,每管加入2 ml紅細(xì)胞裂解液,振蕩混勻,避光10 min后離心,棄上清,用PBS液洗滌2次,2 h內(nèi)上流式細(xì)胞儀分析。

1.5統(tǒng)計(jì)學(xué)分析計(jì)量資料采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示,組間比較采用SPSS 10.0統(tǒng)計(jì)軟件包進(jìn)行t檢驗(yàn),以P<0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2　結(jié)果

試驗(yàn)組較對(duì)照組外周血CD8+的百分比及CD4+CD28+的表達(dá)差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05),而試驗(yàn)組CD4+的百分比及CD8+CD28+的表達(dá)較對(duì)照明顯降低(P<0.05)(見表1),高齡老人應(yīng)用胸腺肽α1后CD4+的百分比及CD8+CD28+水平明顯提高(P<0.05)(見表2)。

表1　2組外周血T細(xì)胞CD28表達(dá)的差異,%,n=40)

注:與對(duì)照組比較,*P<0.05

表2　胸腺肽α1對(duì)試驗(yàn)組外周血T細(xì)胞CD28表達(dá)的影響,%,n=40)

注:與治療前比較,*P<0.05

3　討論

免疫功能衰退是老年人生命過程中最明顯的衰退特征之一,其最突出的表現(xiàn)是T細(xì)胞數(shù)量的減少、增殖能力的下降,細(xì)胞介導(dǎo)的免疫功能應(yīng)答反應(yīng)遲緩,功能降低。T細(xì)胞是正常機(jī)體免疫功能的物質(zhì)基礎(chǔ),老年人T細(xì)胞絕對(duì)數(shù)量均隨年齡增長(zhǎng)而降低[3]。

CD4+表示輔助性誘導(dǎo)性T細(xì)胞亞群,CD4+細(xì)胞屬主要組織相容性復(fù)合體(MHC)Ⅱ類限制性T細(xì)胞,CD4+不僅參與細(xì)胞免疫,還可以誘導(dǎo)B淋巴細(xì)胞增生和(或)分化,使之產(chǎn)生各種免疫球蛋白,從而啟動(dòng)體液免疫反應(yīng)。CD4+從60歲后減低,70歲后進(jìn)一步下降,CD4+水平下降致使細(xì)胞免疫及體液免疫應(yīng)答效應(yīng)減弱[4]。CD8+表示抑制性和細(xì)胞毒性T細(xì)胞亞群, CD8+初始型T細(xì)胞在應(yīng)對(duì)外來抗原感染及腫瘤監(jiān)視中起重要作用,其是MHC Ⅰ類限制性細(xì)胞前體細(xì)胞,具有MHC Ⅰ類限制細(xì)胞毒性,在CD4+T細(xì)胞分泌的細(xì)胞因子作用下,分化為殺傷性T細(xì)胞,CD8+數(shù)量的減少可用作判斷機(jī)體對(duì)MHC Ⅰ類新型抗原免疫保護(hù)作用的缺失,機(jī)體對(duì)感染性疾病,尤其是病毒感染,以及惡性細(xì)胞的免疫防護(hù)和免疫監(jiān)視作用的降低,并最終導(dǎo)致壽命的縮短。本研究結(jié)果表明,高齡老年人外周血CD4+的百分比較普通老年人明顯降低,而2組 CD8+的百分比無明顯差異。說明高齡老年的部分免疫功能較普通老年人又出現(xiàn)了進(jìn)一步下降。

而T細(xì)胞表面的共刺激分子,通過提供活化或抑制信號(hào),可以影響T細(xì)胞激活、增殖及細(xì)胞因子的分泌等。如何調(diào)控共刺激分子增強(qiáng)T細(xì)胞功能是目前免疫學(xué)研究領(lǐng)域的一個(gè)重點(diǎn)。 CD28為同源二聚體結(jié)構(gòu),屬于免疫球蛋白超家屬成員,表達(dá)在T細(xì)胞表面的一個(gè)共刺激分子,為T細(xì)胞活化提供重要的第二信號(hào),另外還能分泌IL-2、TNF-α、TNF-β及IFN-γ等細(xì)胞因子,來自CD28第二信號(hào)的缺乏將導(dǎo)致免疫無能。CD8+CD28+T細(xì)胞有識(shí)別抗原的特異性,通過識(shí)別病毒和病毒感染的細(xì)胞發(fā)揮作用[5]。有文獻(xiàn)報(bào)道老年人外周血T細(xì)胞表面CD28的表達(dá)明顯低于年輕人,特別是在CD8+T細(xì)胞上的表達(dá)[6]。初始型T細(xì)胞數(shù)量的減少以及CD28分子的丟失使老年個(gè)體對(duì)新抗原的細(xì)胞免疫功能降低。本研究發(fā)現(xiàn)高齡老年人CD8+CD28+的表達(dá)較普通老年人又出現(xiàn)了進(jìn)一步降低,而2組人群CD4+CD28+的表達(dá)無明顯差別。說明高齡老年人免疫功能較普通老年人又出現(xiàn)了進(jìn)一步的下降,進(jìn)一步解釋了為何高齡老年人較普通老年人更易患感染和腫瘤的原因[7]。

胸腺肽α1是小牛胸腺中提取的具有生物活性的多肽,具有強(qiáng)烈的免疫刺激和免疫調(diào)節(jié)作用,能誘導(dǎo)T細(xì)胞的分化、成熟,增加T淋巴細(xì)胞前體數(shù)量,促進(jìn)T淋巴細(xì)胞亞群發(fā)育,并通過分泌細(xì)胞因子完成亞群間的免疫協(xié)調(diào), 調(diào)控機(jī)體的免疫平衡。胸腺肽α1 激活PKC,進(jìn)入核內(nèi)激活細(xì)胞因子基因轉(zhuǎn)錄,如IL-1、IL-6 和IL-8,介導(dǎo)B7 家族成員表達(dá)活化,進(jìn)而通過抗原提呈細(xì)胞(APC) 活化T 細(xì)胞, 激活獲得性免疫系統(tǒng)[8]。也可通過Toll 樣蛋白受體信號(hào)通道,激活樹突狀細(xì)胞(DCs)[9],分泌多種細(xì)胞因子參與免疫調(diào)節(jié)功能。胸腺肽α1 能負(fù)向調(diào)節(jié)荷瘤小鼠的重量,提高M(jìn)HCⅠ類抗原在腫瘤細(xì)胞和APC 中的表達(dá),部分恢復(fù)細(xì)胞的免疫性[10]。臨床上主要用于免疫缺陷癥和自身免疫性疾病的治療[11]。有文獻(xiàn)報(bào)道胸腺肽α1能促進(jìn)T細(xì)胞的成熟,激活CD3+、CD4+和NK細(xì)胞產(chǎn)生,提高機(jī)體免疫功能[12]。本研究的部分結(jié)果與文獻(xiàn)報(bào)道的結(jié)果基本一致,高齡老年人的免疫功能較普通老年人進(jìn)一步下降。從本研究結(jié)果來看,應(yīng)用胸腺肽α1后高齡老年人外周血CD4+的百分比明顯提高,并能明顯提高CD8+淋巴細(xì)胞CD28+表達(dá)。故胸腺肽α1能顯著提升高齡老年人的特異性細(xì)胞免疫功能,為其作為一種免疫增強(qiáng)劑提供一個(gè)新的理論論據(jù),但作用機(jī)制目前還不清楚,有待于以后的試驗(yàn)進(jìn)一步探討。

當(dāng)今世界人口老齡化是一個(gè)發(fā)展趨勢(shì),高齡老年人的免疫功能低下致使感染性疾病的發(fā)病率明顯增加,已嚴(yán)重影響了他們的生命質(zhì)量,如何減少感染性疾病的發(fā)生率,提高他們的生活質(zhì)量成為當(dāng)今老年病學(xué)的一個(gè)重要的研究課題。本研究為進(jìn)一步探究免疫衰老的發(fā)生機(jī)制及有效干預(yù)提供了可靠的實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

[1]Yao Q, Doan LX, Zhang R,et al.Thymosin-α1 modulates dendritic cell differentiation and functional maturation from human peripheral blood CD14+monocytes[J].Immun Let,2007,110(2):110-120.

[2]單穎,姜東,李淑云,等.老年人T細(xì)胞亞群的Meta分析[J].中國(guó)老年學(xué)雜志，2007,27(10):1905-1907.

[3]齊玉琴,張興虎,萬文輝,等.胸腺肽α1對(duì)高齡重癥肺炎患者的預(yù)后影響[J].實(shí)用老年醫(yī)學(xué),2013，27(3):215-217.

[4]鄒春英,呂培中,王曉蓮,等.老年人外周血T細(xì)胞亞群CD28表達(dá)水平的改變[J].實(shí)用老年醫(yī)學(xué)，2006,20(5):328-330.

[5]Boucher N,Dufeu-Duchesne T,Vicant E,et al.CD28 expression in T cell aging and human longevity[J].Exp Gerontol,1998,33(3):267-282.

[6]張興虎,錢曉明,黃方,等.老年人外周血樹突狀細(xì)胞的體外培養(yǎng)及功能研究[J].實(shí)用老年醫(yī)學(xué),2009，23(4):270-272.

[7]Zhang P,Chan J,Dragoi A M,et al. Activation of IKKby Thymosin α1 requires the TRAF6 signalling pathway[J]. EMBO Rep,2005,6(6):531-537.

[8]Grottesi A,Sette M,Palamara T,et al. The conformation of peptide Tα 1 in solution and in a membrane-like environment by circular dichroism and NMR spectroscopy. A possible model for its interaction with the lymphocyte membrane[J]. Peptides,1998,19 (10):1731-1738.

[9]Baumann CA,Badamchian M,Goldstein AL, et al. Tα1 antagonizes dexamethasone and CD32 induced apoptosis of CD4+CD8+thymocytes through the activation of cAMP and protein kinase C dependent second messenger pathways[J].Mech Ageing Dev,1997,94(123):85-101.

[10]張敏,管海宏,董震,等.胸腺肽對(duì)原發(fā)性干燥綜合征患者T淋巴細(xì)胞亞群的影響[J].醫(yī)學(xué)研究生學(xué)報(bào)，2010,23(11):1187-1189.

[11]張久德,董茜,邵彬.胸腺肽α1的作用機(jī)制和臨床應(yīng)用[J].細(xì)胞與分子免疫學(xué)雜志，2006,22(4):547-549.

Expression of CD28 T lymphocytes in peripheral blood subsets and effect of Thymosin α1 in the elderly aged 80 years old and over

LUOJie.DepartmentofHealthCare;ZHANGXing-hu.DepartmentofGeriatrics;WANGJian.

DepartmentofEndocrinology,JinlingHospital,SchoolofMedicine,NanjingUniversity,Nanjing210002,China

ObjectiveTo investigate the difference of T lymphocyte subsets and CD28 expression in T cells in peripheral blood between the very elderly (≥80 years old,n=40)and the younger elderly(60-70 years old,n=40), and to investigate the effect of thymosin α1 in the very elderly.MethodsThe T lymphocyte subsets and CD28 levels in both groups in peripheral blood were detected, and the very elderly group was injected with thymosin α1 1.6 mg, twice a week,for 4 weeks. Then the above immune parameters of peripheral blood were detected again.ResultsThere were no differences in the percent of CD8+and CD4+CD28+expression between the very elderly and the younger elderly.The percent of CD4+and CD8+CD28+expression was significantly lower (P<0.05) in the very elderly group than those in the younger elderly.After injected with thymosin α1, the percent of CD4+and CD8+CD28+expression were significantly increased in the very elderly (P<0.05).ConclusionsThe immune function of the elderly is decreased more significantly than that of the younger elderly, and thymosin α1 can significantly enhance some immune function in very elderly.

aged 80 and over; T lymphocyte subsets; CD28; thymosin α1

南京軍區(qū)醫(yī)學(xué)衛(wèi)生科研基金(11MA101)

210002江蘇省南京市,南京大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬金陵醫(yī)院干部保健科(羅杰);干部病房(張興虎);內(nèi)分泌科(王堅(jiān))

王堅(jiān), Email:wangjndcrn@yahoo.com.cn

R592

Adoi:10.3969/j.issn.1003-9198.2016.05.022

2015-09-15)