馬建蘋 魏萬彩 郭濤 李善家 王雅 晉玲(. 蘭州理工大學(xué)生命科學(xué)與工程學(xué)院, 甘肅 蘭州 70050;2. 蘭州理工大學(xué)中藏藥篩選評價及深加工重點實驗室,甘肅 蘭州 70050;. 甘肅中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院, 甘肅 蘭州 70000)
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當(dāng)歸正丁醇萃取物化學(xué)成分研究
馬建蘋1,2魏萬彩1郭濤1李善家1王雅1晉玲3
(1. 蘭州理工大學(xué)生命科學(xué)與工程學(xué)院, 甘肅 蘭州 730050;2. 蘭州理工大學(xué)中藏藥篩選評價及深加工重點實驗室,甘肅 蘭州 730050;3. 甘肅中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院, 甘肅 蘭州 730000)
目的:研究當(dāng)歸正丁醇萃取物的化學(xué)成分。方法:當(dāng)歸的正丁醇萃取物采用硅膠、Sephadex LH-20凝膠、反相ODS柱進(jìn)行分離純化,通過理化性質(zhì)和波譜數(shù)據(jù)鑒定所得化合物的結(jié)構(gòu)。 結(jié)果:分離得到10個化合物,分別鑒定為巴內(nèi)加素(1)、β-腺苷 (2)、1,2-di-O-hexadecanoyl-sn-glycero-3-phosphorylcholine (3)、1-O-hexadecanoyl-sn-glycero-3-phosphorylcholine (4)、洋川芎內(nèi)酯R (5)、洋川芎內(nèi)酯S (6)、麥芽糖 (7)、蔗糖 (8)、β-谷甾醇 (9)、胡蘿卜苷 (10)。結(jié)論:化合物1、3、4和7為首次從該科植物中分離得到,化合物5、6為首次從該屬植物中分離得到,化合物2為首次從當(dāng)歸中分離得到。
傘形科;當(dāng)歸屬;當(dāng)歸;正丁醇萃取物;化學(xué)成分
中藥當(dāng)歸為傘形科植物當(dāng)歸Angelica sinensis (Oliv.) Diels.的干燥根,具有補(bǔ)血活血,調(diào)經(jīng)止痛,潤腸通便的功效,尤其在治療心血管系統(tǒng)和婦科疾病方面療效顯著,醫(yī)家素有“十方九歸”之稱[1-4]。研究表明,當(dāng)歸中主要含有藁本內(nèi)酯類、苯丙素類、萜類以及揮發(fā)油等有效成分。本文對當(dāng)歸的化學(xué)成分進(jìn)行了研究,從其正丁醇萃取物分離得到10個化合物,根據(jù)波譜數(shù)據(jù)和理化性質(zhì)鑒定其結(jié)構(gòu)為:巴內(nèi)加素 (1)、β-腺苷 (2)、1,2-di-O-hexadeca-noyl-sn-glycero-3-phosphorylcholine (3)、1-O-hexadecanoyl-sn-glycero-3-phosphorylcholine (4)、洋川芎內(nèi)酯 R (5)、洋川芎內(nèi)酯S (6)、麥芽糖 (7)、蔗糖 (8)、β-谷甾醇 (9)和胡蘿卜苷 (10)。
Yanaco 微量熔點測定儀 (溫度計未校正);Varian mercury 400 MHz超導(dǎo)核磁共振波譜儀;柱層析硅膠、薄層層析硅膠購自青島海洋化工廠;Sephadex LH-20購自上海安瑪西亞生物技術(shù)有限公司;ODS購自北京京京時代科技發(fā)展有限公司;所用溶劑均為分析純,由上海振興化學(xué)試劑廠和天津化學(xué)試劑廠生產(chǎn)。
當(dāng)歸于2012年9月采自甘肅省定西市岷縣當(dāng)歸種植基地,經(jīng)甘肅中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院晉玲教授鑒定為當(dāng)歸 Angelica sinensis (Oliv.) Diels. 的根。
干燥的當(dāng)歸粉碎后分別用95%乙醇 (13kg)和丙酮 (5.5kg)加熱回流提取,減壓回收溶劑得到乙醇提取物830g和丙酮提取物354g。兩種提取物分別經(jīng)水混懸,依次用石油醚、乙酸乙酯和正丁醇萃取,各部分減壓回收溶劑。乙醇提取物得到石油醚萃取物280g、乙酸乙酯萃取物120g、正丁醇萃取物17g和水萃取物70g。丙酮提取物得到石油醚萃取物115g、乙酸乙酯萃取物50g、正丁醇萃取物7g和水萃取物25g。
正丁醇萃取物 (17g) 進(jìn)行硅膠柱層析,以二氯甲烷-甲醇 (1∶ 0, 10∶ 1, 5∶ 1, 2∶ 1, 1∶ 1, 0∶ 1) 進(jìn)行梯度洗脫,得到6個洗脫組分:Frs. A~F。組分E經(jīng)ODS柱層析得到化合物1(55mg)。組分C經(jīng)反復(fù)的硅膠、ODS和凝膠柱層析純化得到化合物2(40mg)和10 (28mg)。組分F經(jīng)反復(fù)的ODS和凝膠柱層析純化得到化合物3 (16mg)、4 (34mg)和8 (3.55g)。正丁醇萃取物 (7g) 進(jìn)行硅膠柱層析,以二氯甲烷-甲醇 ( 1∶ 0, 10∶ 1, 5∶ 1, 2∶ 1, 1∶ 1, 0∶ 1) 進(jìn)行梯度洗脫,得到9個洗脫組分:Frs. A~I(xiàn)。組分G經(jīng)反復(fù)的硅膠、ODS和凝膠柱層析得到化合物5和6的混合物 (20mg)、9 (17mg)。組分C經(jīng)反復(fù)的硅膠、ODS和凝膠柱層析純化得到化合物 7 (33mg)。
化合物1∶ 白色固體,易溶于DMSO。1H-NMR (600MHz,DMSO-d6) δ∶ 7.55 (1H, d, J = 7.8 Hz, H-6'), 7.34 (1H, d, J = 8.4 Hz, H-3'), 7.21 (1H, s, H-5), 7.04 (1H, t, J = 7.8 Hz, H-4'), 6.95 (1H, t, J = 7.2 Hz, H-5'), 3.45 (1H, br d, J = 4.2, H-2), 3.29 (1H,dd, J = 15.0, 3.6 Hz, H-3b), 2.97 (1H, dd, J = 15.0, 9.0 Hz,H-3a)。13C-NMR (150 MHz, DMSO-d6) δ∶ 170.1 (C-6), 136.3 (C-2'), 127.3 (C-1'), 124.1 (C-5), 120.9 (C-4'), 118.3 (C-5'), 118.3 (C-6'), 111.3 (C-3'), 109.6 (C-4), 54.7 (C-2), 27.1 (C-3)。ESIMS m/z∶ 205.1 [M + H]+,188.0 [M + H- OH]+, 409.1 [2M + H]+;203.1 [M - H]-, 407.2 [2M - H]-。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[5]報道基本一致,因此鑒定化合物1為巴內(nèi)加素。
化合物2∶ 白色固體,易溶于DMSO。1H-NMR (600MHz,DMSO-d6) δ∶ 8.33 (1H, s, H-8), 8.11 (1H, s, H-2), 7.33 (2H, s,NH2), 5.86 (1H, d, J = 6.6 Hz, H-1'), 5.42 (1H, t, J = 4.8 Hz,5'-OH), 5.41 (1H, d, J = 4.8 Hz, 2'-OH), 5.17 (1H, d, J = 4.8 Hz, 3'-OH), 4.60 (1H, dd, J = 6.6, 5.4 Hz, H-2'), 4.12 (1H, dd, J = 7.8, 4.8 Hz, H-3'), 3.94 (1H, q, J = 3.0 Hz, H-4'), 3.65 (1H,m, H-5'b), 3.54 (1H, m, H-5'a)。13C-NMR (150 MHz, DMSO-d6) δ∶156.2 (C-6), 152.4 (C-2), 149.1 (C-4), 139.9 (C-8), 119.4 (C-5), 87.9 (C-1'), 85.9 (C-4'), 73.4 (C-2'), 70.6 (C-3'), 61.7 (C-5')。ESI-MS m/z∶ 268.1 [M + H]+, 136.0 [M - C5H8O4+ H]+,266.1 [M-H]-。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[6]報道完全一致,因此鑒定化合物2 為β-腺苷。
化合物3∶ 無色油狀物,易溶于甲醇。1H-NMR (600 MHz,CD3OD) δ∶ 5.23 (1H, m, H-2), 4.42 (1H, dd, J = 12.0, 3.0 Hz,H-1b), 4.27 (2H, br s, H-4), 4.17 (1H, dd, J = 12.0, 7.2 Hz,H-1a), 4.00 (2H, t, J = 5.4 Hz, H-3), 3.64 (2H, m, H-5), 3.22 (9H, s, H-6, 7, 8), 2.34 (2H, t, J = 7.2 Hz, H-2"), 2.30 (2H, t,J = 6.6 Hz, H-2'), 1.60 (4H, m, H-3', 3"), 1.28 ~ 1.32 (48H, m,H-4' ~ H-15', H-4" ~ H-15"), 0.89 (6H, t, J = 6.6 Hz, H-16',16")。13C-NMR (150 MHz, CD3OD) δ∶ 175.0 (C-1'), 174.6 (C-1"), 71.8 (C-2), 67.5 (C-1), 64.9 (C-3), 63.6 (C-5), 60.5 (C-4),54.7 × 3 (C-6, 7, 8), 34.9 (C-2'), 33.1 (C-2"), 30.8 ~ 30.2, 26.0 × 2, 23.8 × 2 (C-3' ~ C-15', C-3" ~ C-15"), 14.5 × 2 (C-16', 16")。ESI-MS m/z∶ 718.5 [M - CH3]-。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[7]報道完全一致,因此鑒定化合物3為1,2-di-O-hexadecanoyl-snglycero-3-phosphorylcholine。
化合物4∶ 淡黃色油狀物,易溶于甲醇。1H-NMR (CD3OD, 600 MHz) δ∶ 4.30 (2H, br s, H-4), 4.17 (1H, dd, J = 12.0, 4.8 Hz,H-1b), 4.10 (1H, dd, J = 12.0, 6.6, Hz, H-1a), 3.97 (1H, m, H-2),3.90 (2H, dd, J = 12.0, 6.6 Hz, H-3), 3.65 (2H, m, H-5), 3.23 (9H,s, H-6 ~ H-8), 2.35 (2H, t, J = 7.8 Hz, H-2'), 1.61 (2H, m, H-3'),1.31 (2H, m, H-15'), 1.26 (22H, m, H-4' ~ H-14'), 0.89 (3H, t,J = 7.2 Hz, H-16')。13C-NMR (CD3OD, 150 MHz) δ∶ 175.3 (C-1'), 69.8 (C-2), 67.8 (C-3), 67.4 (C-5), 66.2 (C-1), 60.5 (C-4),54.7 (C-6 ~ C-8), 34.9 (C-2'), 33.1 (C-14'), 30.2 ~ 30.8 (C-4' ~ C-13'), 26.0 (C-3'), 23.7 (C-15'), 14.5 (C-16')。ESI-MS∶ 518.3 [M + Na]+, 496.3 [M + H]+。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[8]報道基本一致,因此鑒定化合物4為1-O-hexadecanoyl-sn-glycero-3-phosphorylcholine。
化合物5和6∶ 無色油狀物,易溶于甲醇。5∶1H-NMR (600 MHz,CD3OD) δ∶ 5.35 (1H, d, J = 9.0 Hz, H-8), 4.60 (2H, dt, J = 9.0,7.2 Hz, H-9), 4.25 (1H, d, J = 3.6 Hz, H-7), 3.96 (1H, ddd, J = 5.4, 3.6, 2.4 Hz, H-6), 2.49 ~ 2.59 (2H, m, H-4), 1.92 ~ 2.01 (2H, m, H-5), 1.66 ~ 1.71 (1H, m, H-10b), 1.54 ~ 1.60 (1H,m, H-10a), 0.93 (3H, t, J = 7.8 Hz, H-11)。13C-NMR (150 MHz,CD3OD) δ∶ 170.2 (C-1), 155.5 (C-3), 149.1 (C-3a), 127.7 (C-7a), 115.6 (C-8), 70.9 (C-6), 68.6 (C-9), 65.3 (C-7), 31.1 (C-10), 25.0 (C-5), 18.1 (C-4), 10.0 (C-11)。6∶1H-NMR (600 MHz,CD3OD) δ∶ 5.35 (1H, d, J = 9.0 Hz, H-8), 4.60 (2H, dt, J = 9.0,7.2 Hz, H-9), 4.26 (1H, d, J = 3.6 Hz, H-7), 3.96 (1H, ddd, J = 5.4, 3.6, 2.4 Hz, H-6), 2.49 ~ 2.59 (2H, m, H-4), 1.92 ~ 2.01 (2H, m, H-5), 1.66 ~ 1.71 (1H, m, H-10b), 1.54 ~ 1.60 (1H,m, H-10a), 0.93 (3H, t, J = 7.8 Hz, H-11)。13C-NMR (150 MHz,CD3OD) δ∶ 170.1 (C-1), 155.5 (C-3), 149.1 (C-3a), 127.7 (C-7a), 115.6 (C-8), 70.9 (C-6), 68.7 (C-9), 65.2 (C-7), 31.1 (C-10), 25.0 (C-5), 18.1 (C-4), 10.0 (C-11)。ESI-MS m/z∶ 257.6 [M + NH4]+。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報道[9]基本一致,因此鑒定化合物5和6為洋川芎內(nèi)酯 R和洋川芎內(nèi)酯S。
化合物7∶ 無色針狀結(jié)晶 (CH3OH),mp 133 ~ 135 ℃。1H-NMR (600 MHz, CD3OD) δ∶ 4.98 (1H, br s, H-1), 4.35 (1H, d,J = 7.2 Hz, H-1'), 2.99 ~ 3.92 (10H, H-2 ~ H-5, H-2' ~ H-5')。13C-NMR (150 MHz, CD3OD) δ∶ 98.1 (C-1), 93.9 (C-1'), 78.0 (C-5), 78.0 (C-4), 76.2 (C-3), 74.8 (C-3'), 73.8 (C-2'), 72.9 (C-2),71.8 (C-5'), 71.7 (C-4'), 62.8 (C-6), 62.7 (C-6')。ESI-MS m/z∶325.2 [M - OH]-, 179.1 [M -C6H11O5]-。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報道[10]基本一致,因此鑒定化合物7為麥芽糖。
化合物8∶ 白色方晶 (H2O),mp 163 ~ 165 ℃。經(jīng) TLC與蔗糖標(biāo)準(zhǔn)品對照,其 Rf 值完全一致,因此鑒定化合物8為蔗糖。
化合物9∶ 無色針狀結(jié)晶 (EtOAc),mp 143 ~ 145 ℃。經(jīng)TLC 與標(biāo)準(zhǔn)品β-谷甾醇對照,其 Rf 值完全一致,因此鑒定化合物9為β-谷甾醇。
化合物10∶ 白色無定形粉末(CH3OH)。經(jīng) TLC 與標(biāo)準(zhǔn)品胡蘿卜苷對照,其 Rf 值完全一致,因此鑒定化合物10為胡蘿卜苷。
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“十二五”國家科技支撐計劃項目(2011BAI05B02)