羅代平

【摘要】 目的 探討結(jié)腸癌患者血清miR-21水平手術(shù)前后的變化。方法 80例已確診為結(jié)腸癌患者作為結(jié)腸癌組， 檢測其手術(shù)前后血清miR-21水平， 30例健康體檢志愿者作為對照組， 檢測其miR-21水平作對照。結(jié)果 術(shù)前結(jié)腸癌組血清miR-21相對表達(dá)量為（25.123±29.822）， 明顯高于術(shù)后結(jié)腸癌組的（0.901±1.232）和對照組的（1.102±0.735）， 差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。結(jié)論 血清miR-21檢測侵入性小， 靜脈取血簡便易行， 是較理想的結(jié)腸癌分子標(biāo)志物， 但由于樣本量較小， 因此本試驗(yàn)所取得的結(jié)果在應(yīng)用的同時(shí)， 尚需更多臨床研究驗(yàn)證。

【關(guān)鍵詞】 血清miR-21；結(jié)腸癌；預(yù)后

DOI：10.14163/j.cnki.11-5547/r.2016.22.023

結(jié)腸癌是我國常見的消化道惡性腫瘤之一， 近年來由于我國生活水平的提高， 高蛋白低纖維飲食增加， 體力勞動(dòng)減少， 導(dǎo)致結(jié)腸癌發(fā)病率逐年上升。2012年統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)顯示， 結(jié)腸癌死亡率在西方國家居第二位， 在中國僅次于肺癌、胃癌、肝癌和食管癌， 居第五位[1， 2]， 且發(fā)病率以每年4.2%速度增長[3]。近年來隨著研究的深入， 認(rèn)識(shí)到microRNAs （miRNAs）是一類長度約 18～25 nt 的非編碼小RNAs， 主要調(diào)節(jié)細(xì)胞增殖、分化和凋亡等一系列生理過程， 且血清miR-21的表達(dá)與多項(xiàng)惡性腫瘤密切相關(guān)[4]， 尤其是在結(jié)腸癌的診斷及預(yù)后方面的敏感性和特異性均高于常用的結(jié)腸癌篩查手段和血清分子標(biāo)記物[5]。本研究通過檢測結(jié)腸癌患者術(shù)前、術(shù)后血清miR-21， 并與正常人血清miR-21表達(dá)水平對比， 探討其對結(jié)腸癌患者預(yù)后的意義， 報(bào)告如下。

1 資料與方法

1. 1 一般資料 選取2015年1～12月收治已確診為結(jié)腸癌的患者80例作為結(jié)腸癌組， 其中男51例， 女29例， 年齡39～75歲， 平均年齡（52.3±11.4）歲。同時(shí)選取30例健康體檢志愿者作為對照組， 男23例， 女17例， 年齡37～73歲， 平均年齡（49.7±10.2）歲。兩組研究對象性別、年齡等一般資料比較， 差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）， 具有可比性。入選本研究， 均符合倫理委員會(huì)基本要求， 研究對象均可主動(dòng)配合完成調(diào)查， 并取得研究對象知情同意。

1. 2 納入及排除標(biāo)準(zhǔn)

1. 2. 1 納入標(biāo)準(zhǔn) ①經(jīng)影像及血液檢查診斷為可手術(shù)結(jié)腸癌；②接受結(jié)腸癌根治術(shù)， 經(jīng)術(shù)后病理確診為結(jié)腸癌；③術(shù)前未接受過任何放、化療等輔助治療；④術(shù)后預(yù)計(jì)生存期>3個(gè)月；⑥能夠自愿配合完成本研究并簽署書面知情同意患者。

1. 2. 2 排除標(biāo)準(zhǔn) ①不能經(jīng)影像學(xué)確診的病灶；②復(fù)發(fā)或轉(zhuǎn)移的結(jié)腸癌患者；③有其他腫瘤病史及免疫性大腸疾病、家族性腺瘤息肉、遺傳性非腺瘤性結(jié)腸癌患者以及術(shù)前行化療或放療等輔助治療的患者；④有心、肝、腦、腎及合并嚴(yán)重術(shù)后并發(fā)癥如嚴(yán)重感染等。

1. 3 檢測方法 分別在結(jié)腸癌患者行根治性手術(shù)前和術(shù)后3周采集全血；體檢健康者于腸鏡檢查后1周內(nèi)采集全血。均采集空腹肘靜脈血2～3 ml于真空無抗凝劑管， 置于溫室下1500 r/min離心5 min去除血細(xì)胞， 收集血清置于4℃條件下， 12000 r/min離心血清5 min， 進(jìn)一步去除殘留的血細(xì)胞后置于-80℃冰箱。Trizol法提取總RNA， Takara cDNA合成試劑盒合成cDNA， 使用廣州銳博生物公司miR-21和U6引物， SYBR green法熒光定量PCR檢測miRNA-21相對表達(dá)水平。記錄熒光信號到達(dá)反應(yīng)前所設(shè)定的值時(shí)， 每個(gè)反應(yīng)管中所經(jīng)歷的循環(huán)數(shù)， 即Ct值， 采用定量聚合酶鏈反應(yīng)（PCR）中的相對定量法， 計(jì)算公式：△△Ct=（CtmiR-21-CtU6）腫瘤-（CtmiR-21-CtU6）對照。F=2-△△Ct表示腫瘤組織miR-21表達(dá)量相對于正常組織表達(dá)量變化的倍數(shù)。

1. 4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS15.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（ x-±s）表示， 采用t檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料采用χ2檢驗(yàn)。P<0.05表示差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

術(shù)前結(jié)腸癌組血清miR-21相對表達(dá)量為（25.123± 29.822）， 明顯高于術(shù)后結(jié)腸癌組的（0.901±1.232）和對照組的（1.102±0.735）， 差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。見表1。

3 討論

結(jié)直腸癌是最常見的腫瘤之一， 其發(fā)病率占所有腫瘤的10%～20%， 其發(fā)病率逐年上升， 其疾病負(fù)擔(dān)十分巨大[6]。由于缺乏特異性強(qiáng)的早期診斷手段， 侵入性操作技術(shù)和病理分析是目前唯一可依賴的確診手段， 導(dǎo)致該病確診時(shí)大多已處晚期， 錯(cuò)過根治的最佳機(jī)會(huì)。有報(bào)道顯示， 腸癌Ⅰ期患者和Ⅳ期患者 5年生存率分別90%和6%[7]， 但大部分患者在診斷時(shí)已經(jīng)屬中晚期， 因此尋找一種敏感性和特異性強(qiáng)的非侵入性篩查工具， 早期確診是降低結(jié)腸癌死亡率的有效手段。血清miRNA與腫瘤組織miRNA的相關(guān)性也已經(jīng)得到印證[8]。若能明確血清miRNAs與結(jié)腸癌及其預(yù)后之間的聯(lián)系， 將大大提高結(jié)腸癌早期診斷率， 早期更換經(jīng)miRNA篩選得出的預(yù)后差的患者的治療策略， 降低其死亡率。

miRNA即microRNA自1933年被發(fā)現(xiàn)以來， 一直是腫瘤領(lǐng)域研究的熱點(diǎn)。有研究表明， miR-21在結(jié)腸癌、乳腺癌、肝癌、肺癌、胃癌、食管癌、宮頸癌等腫瘤血清中表達(dá)上調(diào)[9]， 提示miR-21的高水表達(dá)與腫瘤的關(guān)系密切， 因此miR-21的血清檢測有望成為腫瘤早期診斷的有效指標(biāo)。目前對于結(jié)腸癌患者腫瘤組織及血清中miR-21的報(bào)道較為少見， 且報(bào)道不一， 但以上調(diào)者居多。這一結(jié)論與本研究結(jié)果結(jié)腸癌組織中miR-21相對表達(dá)量為（25.123±29.822）明顯高于對照組組2-△△Ct值（1.102±0.735）相符。

綜上所述， miR-21有望成為早期診斷和預(yù)測結(jié)腸癌預(yù)后的檢測指標(biāo)， 且侵入性小， 靜脈取血簡便易行， 是較理想的分子標(biāo)志物。同時(shí)分析本研究存在的不足主要有試驗(yàn)時(shí)間有限， 符合納入標(biāo)準(zhǔn)的病例樣本偏少， 因此本試驗(yàn)所取得的結(jié)果在臨床推廣應(yīng)用的同時(shí)， 尚需更多的臨床研究驗(yàn)證。

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[收稿日期：2016-03-01]