吳成，程剛，趙志強(qiáng)，王蕾（.山東省農(nóng)業(yè)環(huán)境保護(hù)和農(nóng)村能源總站，濟(jì)南 5000； .濟(jì)南市歷城區(qū)綜合檢驗(yàn)檢測中心，濟(jì)南 5000）

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液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法測定蘋果中水胺硫磷

吳成1，程剛2，趙志強(qiáng)1，王蕾1
（1.山東省農(nóng)業(yè)環(huán)境保護(hù)和農(nóng)村能源總站，濟(jì)南 250100； 2.濟(jì)南市歷城區(qū)綜合檢驗(yàn)檢測中心，濟(jì)南 250100）

建立蘋果中水胺硫磷殘留的液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜檢測方法。樣品以乙腈提取，采用電噴霧正離子源（ESI+）和多重反應(yīng)監(jiān)測（MRM）模式測定，基質(zhì)匹配標(biāo)準(zhǔn)曲線定量。結(jié)果表明：蘋果基質(zhì)中，水胺硫磷色譜峰面積響應(yīng)值與其質(zhì)量濃度呈良好線性關(guān)系（r2=0.999），方法的線性范圍為0.3～100 μg/L，檢出限為0.15 μg/L，定量限為0.5 μg/L。在5，50，100 μg/kg添加水平下，水胺硫磷回收率為77.3%～95.2%，測定結(jié)果的相對標(biāo)準(zhǔn)偏差為5.7%～8.9%（n=6）。方法精密度和準(zhǔn)確度滿足殘留限量監(jiān)測要求。

液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法；水胺硫磷；蘋果

水胺硫磷是硫代磷酰胺類殺蟲殺螨劑［1-2］。GB 2763-2014 《食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)食品中農(nóng)藥最大殘留限量》規(guī)定蘋果中水胺硫磷最大殘留限量為0.01 mg/kg［3］，推薦的檢測方法GB/T 5009.20-2003 《食品中有機(jī)磷農(nóng)藥殘留量的測定》為氣相色譜法，方法定量限為0.005 mg/kg［4］，符合GB 2763-2014殘留限量監(jiān)測要求，但方法干擾嚴(yán)重，在農(nóng)藥多殘留分析中應(yīng)用困難；GB/T 19648-2006 《水果和蔬菜中500種農(nóng)藥及相關(guān)化學(xué)品殘留的測定 氣相色譜-質(zhì)譜法》抗干擾能力強(qiáng)，可檢測蘋果中水胺硫磷，但方法的檢出限僅為0.012 5 mg/kg［5］，將樣品濃縮后方法定量限才能滿足GB 2763-2014殘留限量監(jiān)測要求，而樣品濃縮不僅費(fèi)時費(fèi)力，還會造成分析目標(biāo)物的損失和基質(zhì)干擾物的加重［6 ］。近年來出現(xiàn)了抗干擾能力強(qiáng)和靈敏度高的氣相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法［7-10］和液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法（LC-MS/MS）［11-15］。蘋果是水胺硫磷用藥殘留問題較多的水果，筆者用LC-MS/MS開展蘋果中水胺硫磷殘留檢測方法的研究，所建方法靈敏度、準(zhǔn)確度和精密度均滿足分析要求。

1　實(shí)驗(yàn)部分

1.1主要儀器與試劑

液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀：LCMS-8040型，配電噴霧離子源（ESI），日本Shimadzu公司；

離心機(jī)：LDZ5-2型，北京京立離心機(jī)公司；

食品加工機(jī)：Philips k600型，荷蘭Philips公司；

均質(zhì)器：IKA T18型，德國IKA公司；

天平：JY2001型，感量0.1 g，上海精密儀器公司；

水胺硫磷標(biāo)準(zhǔn)溶液：1 000 mg/L ，農(nóng)業(yè)部環(huán)境保護(hù)科研監(jiān)測所；

乙腈、甲醇：色譜純，德國Merck公司；

甲酸、乙酸銨、氯化鈉：分析純，上?；瘜W(xué)試劑有限公司；

蘋果：市售；

實(shí)驗(yàn)用水為超純水（電阻率為18.2 MΩ·cm）。

1.2標(biāo)準(zhǔn)溶液配制

用甲醇稀釋1 000 mg/L水胺硫磷標(biāo)準(zhǔn)溶液制成100 mg/L單標(biāo)準(zhǔn)儲備液，置于-20.0℃冰箱中保存，使用時用甲醇-水溶液（1+1）稀釋至所需濃度。

1.3儀器工作條件

1.3.1液相色譜條件

色譜柱：Waters symmetry C18柱（150 mm×3.9 mm，5 μm，美國Waters公司）；柱溫：40℃；流動相：甲醇-0.1%甲酸水溶液（含5 mmol/L乙酸銨）（體積比為75∶25），流量為0.4 mL/min；等度洗脫；進(jìn)樣體積：1 μL；信號采集時長：10.0 min。

1.3.2質(zhì)譜條件

電噴霧正離子源（ESI+）；接口電壓：4.5 kV；霧化氣：氮?dú)?，流量?.0 L/min；干燥氣：氮?dú)?，流量?5.0 L/min；碰撞氣：氬氣；脫溶劑管溫度：250℃；加熱模塊溫度：400℃；掃描模式：多反應(yīng)監(jiān)測（MRM）；駐留時間：20 ms；延遲時間：3 ms；各監(jiān)測離子對的質(zhì)譜參數(shù)見表1。

表1　LC-MS/MS 測定水胺硫磷的監(jiān)測離子對

1.4樣品前處理

按GB/T 8855-2008 《新鮮水果和蔬菜取樣方法》抽取蘋果樣品，取可食部分［16］，縮分、切碎、混勻，放入食品加工機(jī)粉碎，制成待測樣，于-20.0℃冰箱中保存。稱取樣品15.0 g于50 mL具塞離心管，加入30.0 mL乙腈，用均質(zhì)器以12 000 r/min均質(zhì)2 min，加入5.0 g氯化鈉，劇烈震搖2 min，以5 000 r/min離心5 min，取上清液10.0 mL于100 mL燒杯中，于60℃水浴氮吹至近干，用甲醇-水溶液（1+1）轉(zhuǎn)移定容至2.0 mL，過0.22 μm有機(jī)濾膜，按儀器工作條件進(jìn)行測定。

2　結(jié)果與討論

2.1提取溶劑的選擇

乙腈和丙酮是蔬菜水果農(nóng)殘分析的常用提取溶劑，蘋果含水量高，丙酮與水互溶，除去水分困難；乙腈與水部分互溶，加入氯化鈉后，鹽析、分層和除雜效果明顯，因此本實(shí)驗(yàn)選擇乙腈作為蘋果中水胺硫磷殘留檢測的提取溶劑。

2.2質(zhì)譜條件的優(yōu)化

水胺硫磷相對分子質(zhì)量為289，采用ESI+進(jìn)行母離子掃描，掃描圖見圖1。圖1中，328信號對應(yīng)加鉀峰離子（［M+K］+），312對應(yīng)加鈉峰離子（［M+Na］+），307對應(yīng)加銨峰離子（［M+NH4］+），290對應(yīng)加氫峰離子（［M+H］+）。290，307，312信號強(qiáng)度比約為3∶4∶10，分別作母離子，利用島津LCMS-8040 Optimizer軟件進(jìn)行子離子、四極桿預(yù)桿偏置電壓（Q1和Q3）和碰撞池電壓（CE）等參數(shù)優(yōu)化，優(yōu)化結(jié)果見表1。用優(yōu)化的色譜質(zhì)譜條件，在MRM模式下，進(jìn)0.1 mg/L水胺硫磷溶液1.0 μL，得監(jiān)測離子對提取離子流圖（ETC）見圖2。由圖2可見，290，307和312分別作母離子，相應(yīng)子離子對的信號強(qiáng)度，307的遠(yuǎn)高于290和312的，290的略高于312的?？梢?，與290和312相比，用307作母離子優(yōu)化選擇的監(jiān)測離子對檢測水胺硫磷時靈敏度更高。計(jì)算定性參考離子與定量離子信號強(qiáng)度比（相對離子強(qiáng)度，以%計(jì)），依據(jù)歐盟2002/657/EC 文件［17］規(guī)定的質(zhì)譜技術(shù)中相對離子強(qiáng)度的最大允許限度范圍，結(jié)合樣品色譜峰保留時間和扣背景質(zhì)譜圖，可確證樣品中水胺硫磷的存在。

圖2　水胺硫磷監(jiān)測離子對提取離子流圖（ETC）

2.3凈化條件的選擇

蘋果乙腈提取液色素含量低，基質(zhì)干擾少，若用傳統(tǒng)固相萃取柱凈化，效率低，操作繁瑣。本實(shí)驗(yàn)樣品前處理采取鹽析、乙腈提取、離心和過有機(jī)濾膜，能有效去除樣品中色素、糖類和脂類等。LC-MS/MS抗基質(zhì)干擾能力強(qiáng)，清洗方便。水胺硫磷為弱極性化合物，樣品基質(zhì)對其電噴霧離子化影響小。

2.4方法的特異性

對于水胺硫磷的LC-MS/MS檢測，選取的監(jiān)測離子對（母離子307，子離子231，273）信號響應(yīng)值高，特異性強(qiáng)，輔之色譜分離，基質(zhì)干擾減至最低，可忽略不計(jì)。

2.5工作曲線方程及檢出限、定量限

用蘋果空白基質(zhì)液將水胺硫磷標(biāo)準(zhǔn)儲備液配制成0.1～100 μg/L系列標(biāo)準(zhǔn)工作溶液，在優(yōu)化條件下測定水胺硫磷。以色譜峰面積（y）對水胺硫磷標(biāo)準(zhǔn)工作溶液的質(zhì)量濃度（x，μg/L）進(jìn)行線性回歸，分別以3倍和10倍信噪比（S/N）計(jì)算方法檢出限（LOD）和定量限（LOQ），方法的線性范圍、線性方程、相關(guān)系數(shù)、檢出限和定量限見表2。由表2可知，建立的水胺硫磷檢測方法的色譜峰面積響應(yīng)值與水胺硫磷標(biāo)準(zhǔn)工作溶液的質(zhì)量濃度呈良好線性關(guān)系，檢出限和定量限分別為0.15 μg/L和0.5 μg/L。方法檢測靈敏度符合GB 2763-2014 對蘋果水胺硫磷殘留檢測方法的要求。

表2　線性范圍、線性方程、相關(guān)系數(shù)、檢出限及定量限

2.6回收試驗(yàn)和精密度試驗(yàn)

在蘋果空白樣品中分別添加水胺硫磷5，50，100 μg/kg 3個濃度水平，進(jìn)行加標(biāo)回收試驗(yàn)，用蘋果空白基質(zhì)配制上機(jī)標(biāo)準(zhǔn)溶液，外標(biāo)法定量，每個水平重復(fù)測定6 次，平均回收率和相對標(biāo)準(zhǔn)偏差見表3。由表3可知，蘋果中水胺硫磷3水平添加平均回收率為77.3%～95.2%，測定結(jié)果的相對標(biāo)準(zhǔn)偏差為5.7%～8.9%。建立的水胺硫磷檢測方法準(zhǔn)確度和精密度均符合食品中農(nóng)藥殘留分析要求［18］。

表3　加標(biāo)回收及精密度試驗(yàn)結(jié)果

3　結(jié)語

以母離子307，子離子231，273為監(jiān)測離子對，以乙腈作提取劑，經(jīng)液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法分析，建立了蘋果中水胺硫磷殘留的快速檢測方法，方法簡單、快速，靈敏度高，確證性和實(shí)用性強(qiáng)，可作為蘋果中水胺硫磷殘留的確證定性和定量檢測。

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Determination of the Isocarbophos Residues in Apple by Liquid Chromatography-Tandem Mass Spectrometry

Wu Cheng1， Cheng Gang2， Zhao Zhiqiang1， Wang Lei1
（1. Shandong Station of Agro-environment Protection and Rural Energy， Jinan 250100， China；2. Comprehensive Inspection and Testing Center of Jinan Licheng District， Jinan 250100， China）

A new method was established for the determination of isocarbophos residues in apple by liquid chromatography-tandem mass spectrometry. The test sample was extracted with acetonitrile， electrospray positive ion source（ESI+）and multiple reaction monitoring mode （MRM） and matrix-matched external standard method were applied. The calibration curve showed good linearity with the correlation coefficient of 0.999， the linear range was 0.3-100 μg/L， the detection limit was 0.15 μg/L， and the quantification limit was 0.5 μg/L. With addition of 5， 50， 100 μg/kg， the recoveries were 77.3%-95.2%， and the relative standard deviation was 5.7%-8.9%（n=6）. The precision and accuracy of this method can meet the requirement of the monitoring of residue limit of isocarbophos.

liquid chromatography-tandem mass spectrometry； isocarbophos； apple

O657.63

A

1008-6145（2016）04-0078-03

10.3969/j.issn.1008-6145.2016.04.021

聯(lián)系人：吳成；E-mail: wucheng7745@sina.com

2016-04-17