張秀麗，王聰，王遠(yuǎn)紅，呂志華（中國(guó)海洋大學(xué)醫(yī)藥學(xué)院，山東青島 266003）

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核磁共振法測(cè)定片劑中西咪替丁*

張秀麗，王聰，王遠(yuǎn)紅，呂志華
（中國(guó)海洋大學(xué)醫(yī)藥學(xué)院，山東青島 266003）

建立以核磁共振技術(shù)測(cè)定片劑中西咪替丁含量的方法。采用Agilent DD2-500型核磁共振波譜儀，以氘代甲醇為溶劑、對(duì)苯二甲酸二甲酯為內(nèi)標(biāo)，測(cè)試溫度25℃，弛豫時(shí)間為20 s，脈沖角為45°，采集時(shí)間為2 s，掃描次數(shù)為16次，采集核磁共振氫譜。該方法線性范圍為0.1～5.0 mg/mL，相關(guān)系數(shù)r=0.999 8，測(cè)定結(jié)果的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.11%（n=6），平均加標(biāo)回收率在100.03%～100.58%之間。用該方法測(cè)定不同廠家片劑中西咪替丁的含量，測(cè)定結(jié)果與藥典方法相吻合。該方法簡(jiǎn)單快速、樣品用量少，適用于西咪替丁的質(zhì)量控制。

西咪替??；核磁共振法；片劑；定量分析

西咪替丁（Cimetidine）又名甲氰咪胍（化學(xué)結(jié)構(gòu)式見(jiàn)圖1），是一種H2受體阻滯劑，可抑制胃酸分泌，臨床上主要用于胃酸過(guò)多、消化道潰瘍的治療。近年來(lái)西咪替丁用于非潰瘍性疾病的治療又有新發(fā)現(xiàn)，如對(duì)慢性乙型肝炎的治療，對(duì)燒傷引起的免疫作用［1-2］等。目前測(cè)定西咪替丁的方法有高效液相色譜法［3-4］、分光光度法［5］、HPLC-UV［6］、色譜-質(zhì)譜法［7］等，美國(guó)藥典USP35版中采用高效液相色譜法［8］，中國(guó)藥典2015年版中采用分光光度法［9］。高效液相色譜法一般以乙腈為流動(dòng)相，由于西咪替丁帶有-NH-等極性基團(tuán)，比較容易產(chǎn)生拖尾，為了改良峰型，需要加入三乙胺或磷酸鹽為消尾劑，這樣會(huì)損害色譜柱減少色譜柱的使用壽命。分光光度法樣品配制步驟繁瑣，且需消耗大量試劑，準(zhǔn)確度相對(duì)不高。2010年《中華人民共和國(guó)藥典》中新增了核磁共振定量法，核磁共振定量技術(shù)具有準(zhǔn)確、簡(jiǎn)單、快速，無(wú)需分離提取，不破壞被測(cè)樣品等優(yōu)勢(shì)［10-16］，除能進(jìn)行定量分析外，還能同時(shí)通過(guò)結(jié)構(gòu)分析鑒別假冒偽劣藥品。目前核磁共振技術(shù)測(cè)定西咪替丁含量的方法還未見(jiàn)文獻(xiàn)報(bào)道。筆者建立了核磁共振定量技術(shù)測(cè)定片劑中西咪替丁含量的方法，考察并優(yōu)化了實(shí)驗(yàn)條件。利用該方法測(cè)定了不同廠家片劑中西咪替丁的含量，與文獻(xiàn)方法相比，更為快速、簡(jiǎn)單，且無(wú)需對(duì)照品。所建方法可為西咪替丁的質(zhì)量控制提供新技術(shù)和新方法。

圖1　西咪替丁的化學(xué)結(jié)構(gòu)式

1　實(shí)驗(yàn)部分

1.1主要儀器與試劑

核磁共振波譜儀：Agilent 500-DD2型，美國(guó)安捷倫科技有限公司；

電子天平：BT25S型，德國(guó)賽多利斯科學(xué)儀器北京有限公司；

紫外可見(jiàn)分光光度儀：2802PCS型，美國(guó)尤尼柯上海儀器有限公司；

氘代甲醇：氘代度大于99.8%，美國(guó)Sigma-Aldrich公司；

西咪替丁片劑：規(guī)格0.2 g，批號(hào)為141102，山東仁和堂藥業(yè)有限公司；

西咪替丁片劑：規(guī)格0.2 g，批號(hào)為1509262，河南中杰藥業(yè)有限公司；

西咪替丁對(duì)照品：純度為99%，日本東京化成工業(yè)株式會(huì)社；

對(duì)苯二甲酸二甲酯：純度99.99%，西格瑪奧德里奇上海貿(mào)易有限公司。

1.2核磁共振氫譜定量實(shí)驗(yàn)參數(shù)

溫度：25℃；弛豫時(shí)間：20 s；脈沖角：45°；采集時(shí)間：2 s；掃描次數(shù)：16次；譜寬：8 012.8 Hz。

1.3核磁共振定量方法

1.3.1標(biāo)準(zhǔn)溶液及試樣溶液配制

內(nèi)標(biāo)溶液的配制：精密稱(chēng)取對(duì)苯二甲酸二甲酯6.25 mg，置于25 mL容量瓶中，用氘代甲醇定容，振蕩混勻，配制成0.25 mg/mL的內(nèi)標(biāo)溶液。

西咪替丁對(duì)照品儲(chǔ)備液：精密稱(chēng)取西咪替丁對(duì)照品5.00 mg，加入1.0 mL上述內(nèi)標(biāo)溶液溶解，配制成5 mg/mL的西咪替丁對(duì)照品儲(chǔ)備液，以此配制系列濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液。

西咪替丁供試品溶液的配制：取西咪替丁20片，精密稱(chēng)量，研細(xì)，精密稱(chēng)取樣品粉末3.00 mg，加入1.0 mL上述內(nèi)標(biāo)溶液，振蕩混勻后，靜置5 min，待輔料沉淀于底部，取0.5 mL上清液于5 mm核磁管中，進(jìn)行定量1H NMR測(cè)試。

1.3.2結(jié)果計(jì)算

西咪替丁的量按式（1）計(jì)算：

式中：Wu——西咪替丁的質(zhì)量，mg；

Au——西咪替丁的核磁共振峰面積；

As——內(nèi)標(biāo)物質(zhì)的核磁共振峰面積；

Ws——內(nèi)標(biāo)物的質(zhì)量，mg； Eu——西咪替丁的質(zhì)子當(dāng)量（樣品的相對(duì)分子質(zhì)量與樣品定量峰相應(yīng)基團(tuán)的質(zhì)子數(shù)之比）；

Es——內(nèi)標(biāo)物的質(zhì)子當(dāng)量（內(nèi)標(biāo)的相對(duì)分子質(zhì)量與內(nèi)標(biāo)定量峰相應(yīng)基團(tuán)的質(zhì)子數(shù)之比）。

1.4紫外分光光度法定量方法

按照2015年版中國(guó)藥典方法，取西咪替丁20片，精密稱(chēng)量，研細(xì)。精密稱(chēng)取50 mg置于50 mL容量瓶中，用0.01 mol/L的鹽酸溶液定容搖勻，濾過(guò)，精密移取0.5 mL續(xù)濾液，置于50 mL容量瓶中，再用上述溶劑稀釋至標(biāo)線，搖勻。采用紫外分光光度法，在218 nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度，按C10H16N6S的吸收系數(shù)為774計(jì)算，即得西咪替丁含量。

2　結(jié)果與討論

2.1溶劑的選擇

西咪替丁和對(duì)苯二甲酸二甲酯（內(nèi)標(biāo)物）在氘代試劑中溶解性均良好，可防止樣品部分溶解帶來(lái)的誤差，而且片劑中輔料在氘代甲醇中均不溶解，可以避免輔料共振峰對(duì)定量的干擾，因此實(shí)驗(yàn)選擇以氘代甲醇作為溶劑。

2.2內(nèi)標(biāo)物的選擇

內(nèi)標(biāo)物應(yīng)具有較高的純度及較少的質(zhì)子數(shù)，主要吸收峰與樣品峰之間無(wú)干擾，且不與樣品反應(yīng)［11］。根據(jù)西咪替丁的化學(xué)結(jié)構(gòu)與核磁共振氫譜，實(shí)驗(yàn)選擇以對(duì)苯二甲酸二甲酯作為內(nèi)標(biāo)。對(duì)苯二甲酸二甲酯在氘代甲醇中很穩(wěn)定且混合后不反應(yīng)，該化合物的核磁共振氫譜只有兩組共振峰，并且與西咪替丁樣品的共振峰完全分離，互不干擾（見(jiàn)圖2），滿(mǎn)足定量要求。

圖2　西咪替丁樣品、內(nèi)標(biāo)及二者混合后的核磁共振氫譜

2.3定量峰的選擇

通常選擇與相鄰峰無(wú)干擾且裂分較少的峰作為定量峰，且盡量避免選擇甲基峰，減少定量誤差。根據(jù)二者的化學(xué)結(jié)構(gòu)，本實(shí)驗(yàn)選擇布西咪替丁咪唑環(huán)上δ7.47處共振峰和對(duì)苯二甲酸二甲酯苯環(huán)δ8.10處共振峰為定量峰，二者化學(xué)環(huán)境相似，共振峰均在低場(chǎng)區(qū)，且完全分離（見(jiàn)圖3），滿(mǎn)足定量要求。

圖3　西咪替丁與對(duì)苯二甲酸二甲酯混合溶液的核磁共振氫譜

2.4儀器參數(shù)的優(yōu)化

2.4.1弛豫時(shí)間

試驗(yàn)考察了弛豫時(shí)間（d1）為4，10，15，20，25，30，40 s時(shí)對(duì)核磁定量的影響。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，d1≤15 s時(shí)，隨著d1的增加，樣品和內(nèi)標(biāo)物的定量峰積分面積比值逐漸增大；當(dāng)d1＞15 s時(shí)，樣品和內(nèi)標(biāo)物的定量峰積分面積比值沒(méi)有明顯變化，因此實(shí)驗(yàn)選擇d1為20 s。

2.4.2掃描次數(shù)

分別設(shè)置掃描次數(shù)（nt）為4，8，16，32，64，128次進(jìn)行試驗(yàn)，結(jié)果表明，隨著掃描次數(shù)的改變，樣品和內(nèi)標(biāo)物積分面積的比值沒(méi)有明顯變化，掃描次數(shù)越多測(cè)試時(shí)間越長(zhǎng)。在滿(mǎn)足信噪比的條件下，實(shí)驗(yàn)選擇掃描次數(shù)為16次。

2.4.3采集時(shí)間

采集時(shí)間at與譜圖的數(shù)字分辨率有很大的關(guān)系。合適的采集時(shí)間不僅可以保證FID信號(hào)衰減完全，同時(shí)也能夠提高儀器的使用效率，采集時(shí)間一般選擇范圍為2～4 s［17］。試驗(yàn)考察了at分別為2，3，4 s時(shí)對(duì)核磁共振氫譜的影響，結(jié)果表明，當(dāng)at=2 s 時(shí)FID 信號(hào)衰減完全，滿(mǎn)足定量要求。因此實(shí)驗(yàn)選擇采集時(shí)間為2 s。

2.5精密度試驗(yàn)

配制1份西咪替丁供試品溶液，重復(fù)測(cè)定6次，對(duì)西咪替丁δ7.47處共振峰和對(duì)苯二甲酸二甲酯苯環(huán)δ8.10處共振峰進(jìn)行積分，以二者的面積比計(jì)算檢測(cè)精密度，試驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表1。由表1可知，6次測(cè)定結(jié)果的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.11%，說(shuō)明該方法精密度良好。

表1　精密度、重復(fù)性及穩(wěn)定性試驗(yàn)結(jié)果

2.6重復(fù)性試驗(yàn)

精確稱(chēng)取6份樣品，用0.25 mg/mL的內(nèi)標(biāo)液溶解，取上清液測(cè)定核磁共振氫譜，以西咪替丁和內(nèi)標(biāo)物定量峰面積比值計(jì)算西咪替丁含量并檢測(cè)重復(fù)性，試驗(yàn)結(jié)果列于表1。由表1可知，6次測(cè)定結(jié)果的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.33%，說(shuō)明所建方法的重復(fù)性良好。

2.7穩(wěn)定性試驗(yàn)

將2.5中西咪替丁供試品溶液，分別放置0，4，8，24，48，72 h后進(jìn)行測(cè)定，計(jì)算樣品和內(nèi)標(biāo)定量峰面積比值，結(jié)果列于表1。由表1可知，6次測(cè)定結(jié)果的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.45%，表明該樣品在室溫放置72 h內(nèi)穩(wěn)定，滿(mǎn)足分析測(cè)試要求。

2.8曲線方程

用內(nèi)標(biāo)溶液對(duì)西咪替丁對(duì)照品儲(chǔ)備液進(jìn)行稀釋?zhuān)渲瞥少|(zhì)量濃度分別為5，2.5，1.0，0.5，0.25，0.1 mg/mL的西咪替丁系列標(biāo)準(zhǔn)溶液，分別測(cè)定。以西咪替丁與內(nèi)標(biāo)定量峰面積的比值（y）為縱坐標(biāo)，以西咪替丁質(zhì)量濃度（x）為橫坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸，得回歸方程y=0.370 7x-0.009 7，相關(guān)系數(shù)r=0.999 8。當(dāng)內(nèi)標(biāo)物的質(zhì)量濃度為0.25 mg/mL時(shí)，西咪替丁在0.1～5.0 mg/mL的范圍內(nèi)線性良好。

2.9檢出限與定量限

根據(jù)核磁共振氫譜，以信噪比S/N=3時(shí)的測(cè)定濃度為檢出限（LOD）；以信噪比S/N=10時(shí)的測(cè)定濃度為定量限（LOQ）。該方法的LOD為10 μg/mL，LOQ為28.57 μg/mL。

2.10回收試驗(yàn)

分別在西咪替丁供試品溶液中加入高、中、低濃度的西咪替丁標(biāo)準(zhǔn)溶液，每種濃度配制3份平行樣，進(jìn)行核磁共振氫譜測(cè)試并計(jì)算回收率，結(jié)果見(jiàn)表2。由表2可知，3個(gè)加標(biāo)水平下，平均回收率分別為100.51%，100.03%，100.58%，說(shuō)明該方法具有較高準(zhǔn)確度。

表2　回收試驗(yàn)結(jié)果

2.11樣品測(cè)定

按照優(yōu)化后核磁共振測(cè)試條件，用核磁共振法與藥典法（紫外分光光度法）對(duì)兩個(gè)生產(chǎn)廠家的西米替丁片劑樣品進(jìn)行測(cè)定，測(cè)定結(jié)果見(jiàn)表3。由表3可知，本法測(cè)定結(jié)果與紫外分光光度法測(cè)定結(jié)果無(wú)顯著差異，說(shuō)明所建方法測(cè)定結(jié)果準(zhǔn)確可靠。

表3　核磁共振法與藥典法對(duì)樣品的測(cè)定結(jié)果（n=5） %

3　結(jié)語(yǔ)

采用核磁共振方法測(cè)定片劑中西咪替丁含量，該方法的精密度、重復(fù)性、穩(wěn)定性、線性關(guān)系及回收率均良好，同時(shí)與西咪替丁的藥典紫外分光光度法進(jìn)行了比較，兩種方法實(shí)驗(yàn)結(jié)果相吻合。核磁共振定量法樣品用量少，制備過(guò)程簡(jiǎn)單且無(wú)需分離，快速準(zhǔn)確，是對(duì)其它常規(guī)定量方法的一種補(bǔ)充，在含量測(cè)定的同時(shí)可對(duì)結(jié)構(gòu)進(jìn)行確證，對(duì)防止假冒偽劣藥品的出現(xiàn)發(fā)揮一定作用。

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Determination of Cimetidine in Tablets by NMR

Zhang Xiuli， Wang Cong， Wang Yuanhong， Lyu Zhihua
（School of Medicine and Pharmacy， Ocean University of China， Qingdao 266003， China）

A method for the determination of cimetidine in tables by proton nuclear magnetic resonance spectroscopy （1H NMR） was established. The1H NMR spectra was obtained in MeOD with dimethyl terephthalate as the internal standard by using Agilent DD2-500 MHz spectrometer. For each sample，16 scans were recorded with the following parameters: pulse angle was 45°， relaxation delay was 20 s，acquisition time was 2 s， the temperature was set at 25℃. The linear range was 0.1-5.0 mg/mL with correlation coefficient of 0.999 8. The relative standard deviation of detection results was 0.11%（n=6）. The added average recoveries of cimetidine in tables were in the range of 100.03%-100.58%. The cimetidine samples from different factory were detected by the method and pharmacopoeia method， the results were consistent. This method is simple，rapid， with less cimetidine sample， it can be used for the quality control of cimetidine.

cimetidine； nuclear magnetic resonance； tablet； quantitative analysis

O657.2

A

1008-6145（2016）04-0019-04

10.3969/j.issn.1008-6145.2016.04.005

*中央高校基本科研業(yè)務(wù)費(fèi)實(shí)驗(yàn)室研究基金項(xiàng)目（201651008）

聯(lián)系人：呂志華；E-mail: lvzhihua@ouc.edu.cn

2016-04-19