唐恩波，解翠花

(新疆維吾爾自治區(qū)昌吉州中醫(yī)醫(yī)院檢驗(yàn)科　831100)

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·臨床研究·

手工和全自動(dòng)儀器血培養(yǎng)結(jié)果的分析

唐恩波，解翠花

(新疆維吾爾自治區(qū)昌吉州中醫(yī)醫(yī)院檢驗(yàn)科831100)

目的對(duì)手工法雙相血培養(yǎng)瓶和BacT/Alert-3D240全自動(dòng)血培養(yǎng)儀的檢出結(jié)果作回顧性分析。方法對(duì)2011～2013年使用手工雙向血培養(yǎng)瓶的615份血標(biāo)本與2014年使用全自動(dòng)血培養(yǎng)儀的1 062份血標(biāo)本進(jìn)行細(xì)菌陽(yáng)性檢出率、檢出時(shí)間及檢出種類(lèi)的比較。結(jié)果615例雙向血培養(yǎng)瓶陽(yáng)性48例，陽(yáng)性率為7.8%，污染率0.98%，48 h內(nèi)腸桿菌科細(xì)菌檢出率87.5%，葡萄球菌屬細(xì)菌檢出率83.3%。1 062例全自動(dòng)血培養(yǎng)儀陽(yáng)性99例分離出細(xì)菌，其中有臨床意義的病原菌86株，陽(yáng)性率為8.2%；污染菌8株，污染率0.75%；假陽(yáng)性5株，為0.47%；48 h內(nèi)腸桿菌科細(xì)菌檢出率95.5%，葡萄球菌屬細(xì)菌檢出率87%，鏈球菌檢出率42.9%。結(jié)論BacT/Alert-3D全自動(dòng)血培養(yǎng)儀的陽(yáng)性率稍高，并且檢出時(shí)間短，細(xì)菌檢出種類(lèi)增多，提高了血培養(yǎng)送檢數(shù)。

血培養(yǎng)；手工雙向血培養(yǎng)瓶；全自動(dòng)血培養(yǎng)儀；病原菌

血流感染包括菌血癥和敗血癥，在臨床上發(fā)病率和致死率都較高，而血培養(yǎng)是臨床判斷患者血液感染的金標(biāo)準(zhǔn)[1]。在實(shí)驗(yàn)室條件有限的情況下采用手工雙向血培養(yǎng)瓶也能較好地給臨床提供病原學(xué)診斷，而隨著全自動(dòng)微生物標(biāo)本接種儀的相繼問(wèn)世，因其存在標(biāo)本接種速度快，操作誤差少，菌落分辨率高，檢測(cè)周期短等優(yōu)點(diǎn)，逐步受到微生物檢驗(yàn)人員和臨床醫(yī)師的認(rèn)可。本文通過(guò)收集2011～2013年使用手工雙向血培養(yǎng)瓶的615份血標(biāo)本和2014年使用全自動(dòng)血培養(yǎng)儀的1 062份血標(biāo)本的培養(yǎng)結(jié)果，對(duì)其作回顧性分析。

1　材料與方法

1.1標(biāo)本來(lái)源1 677例血培養(yǎng)標(biāo)本來(lái)自于2011年7月至2014年8月在本院就診的住院患者。

1.2儀器與試劑血培養(yǎng)瓶：鄭州安圖生物工程股份有限公司生產(chǎn)的手工雙相血培養(yǎng)瓶(需氧菌或兼性厭氧菌，以下稱(chēng)手工血瓶)；法國(guó)生物梅里埃公司生產(chǎn)的BacT/Alert-3D240培養(yǎng)瓶：中和抗生素需氧瓶(FA瓶)、中和抗生素厭氧瓶(FN瓶)以及中和抗生素兒童瓶(PF瓶)。培養(yǎng)基：法國(guó)生物梅里埃公司生產(chǎn)的哥倫比亞血平板、巧克力平板，杭州天河微生物試劑公司生產(chǎn)的麥康凱干粉培養(yǎng)基。ATB-Expression細(xì)菌鑒定儀及配套鑒定藥敏條，全自動(dòng)血培養(yǎng)儀BacT/Alert-3D240，VITEK 2-Compact細(xì)菌培養(yǎng)鑒定儀及配套鑒定藥敏卡，均為法國(guó)生物梅里埃公司生產(chǎn)。質(zhì)控菌株：標(biāo)準(zhǔn)菌株金黃色葡萄球菌ATCC29213、大腸埃希菌ATCC25922、銅綠假單胞菌ATCC27853和糞腸球菌ATCC29212。

1.3方法

1.3.1手工血培養(yǎng)以無(wú)菌操作取靜脈血5～8 mL注入手工血瓶中，搖勻，放置35 ℃溫箱，每天上午、下午兩次觀(guān)察液體及固體培養(yǎng)基上有無(wú)細(xì)菌生長(zhǎng)，如有細(xì)菌生長(zhǎng)，涂片染色并轉(zhuǎn)種血平板、巧克力和麥康凱平板，使用ATB-Expression細(xì)菌鑒定儀進(jìn)行鑒定及藥敏試驗(yàn)；連續(xù)培養(yǎng)7 d無(wú)細(xì)菌生長(zhǎng)報(bào)告陰性。

1.3.2儀器法按照BacT/Alert-3D240血培養(yǎng)儀標(biāo)本采集量的要求，采集患者血液后注入相應(yīng)的培養(yǎng)瓶，成人加入FA和FN瓶，兒童加入PF瓶，儀器報(bào)警，進(jìn)行涂片鏡檢并轉(zhuǎn)種，若有細(xì)菌生長(zhǎng)為陽(yáng)性，用VITEK 2-Compact全自動(dòng)細(xì)菌鑒定儀做鑒定藥敏；5 d無(wú)陽(yáng)性報(bào)警，報(bào)告為陰性；當(dāng)儀器提示陽(yáng)性，涂片培養(yǎng)均未見(jiàn)細(xì)菌為假陽(yáng)性，污染菌按照《臨床微生物實(shí)驗(yàn)室血培養(yǎng)操作規(guī)范》[2]及《實(shí)驗(yàn)室對(duì)血培養(yǎng)污染的評(píng)估方案》[3]的依據(jù)判讀。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)處理采用SPSS19.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，計(jì)數(shù)資料以率表示，組間比較采用χ2檢驗(yàn)，以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2　結(jié)　果

2.1兩種培養(yǎng)瓶陽(yáng)性檢出率比較2011年7月至2013年7月615例手工雙向血培養(yǎng)瓶共培養(yǎng)出48株病原菌，陽(yáng)性率7.8%；2013年8月至2014年8月，1 062例儀器法血培養(yǎng)共培養(yǎng)出病原菌99株，其中來(lái)自污染13株，有臨床意義病原菌86株，陽(yáng)性率8.2%；二者陽(yáng)性率差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見(jiàn)表1。

表1　兩種血液培養(yǎng)方法陽(yáng)性結(jié)果

2.248 h內(nèi)兩種血培養(yǎng)方法細(xì)菌陽(yáng)性檢出率比較48 h內(nèi)使用儀器法對(duì)于腸桿菌科、葡萄球菌屬細(xì)菌檢出率均高于手工方法，并檢出了手工法未檢出過(guò)的鏈球菌，結(jié)果見(jiàn)表2。

表2　48 h兩種血培養(yǎng)方法陽(yáng)性檢出率(%)

注：-表示無(wú)數(shù)據(jù)。

2.3兩種血液培養(yǎng)方法的細(xì)菌分離種類(lèi)手工法分離出細(xì)菌48株，儀器法分離出細(xì)菌99株(污染菌8株，假陽(yáng)性5株)，病原菌86株。兩種方法分離的細(xì)菌中均以革蘭陰性桿菌為主要病原菌，其中腸桿菌科細(xì)菌檢出率最高，其次是葡萄球菌屬細(xì)菌。儀器法檢出細(xì)菌種類(lèi)較手工法多，尤其是對(duì)鏈球菌的檢出種類(lèi)有所增加，如星座鏈球菌、無(wú)乳鏈球菌、似腸膜明串珠菌等，結(jié)果見(jiàn)表3。

表3　兩種血培養(yǎng)方法分離細(xì)菌種類(lèi)

3　討　論

3.1陽(yáng)性率結(jié)果的比較分析本研究中手工法與儀器法血培養(yǎng)陽(yáng)性率分別為7.8%和8.1%，二者差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。儀器法的陽(yáng)性率遠(yuǎn)遠(yuǎn)低于龔興旺報(bào)道的血培養(yǎng)15.1%陽(yáng)性率[4]。根據(jù)本院的實(shí)際情況分析原因可能為以下幾點(diǎn)：(1)手工法多數(shù)標(biāo)本系臨床癥狀嚴(yán)重、并有明顯的敗血癥癥狀的患者血標(biāo)本，陽(yáng)性率較高。手工法耗時(shí)長(zhǎng)，需要觀(guān)察7 d，用肉眼觀(guān)察不易及時(shí)發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)的微小變化，需要細(xì)菌達(dá)到一定的量，瓊脂層有細(xì)菌生長(zhǎng)時(shí)才能觀(guān)察到，因而延長(zhǎng)了培養(yǎng)時(shí)間，嚴(yán)重影響醫(yī)生的診斷和治療，甚至患者治療好轉(zhuǎn)出院，檢驗(yàn)報(bào)告單還沒(méi)有發(fā)出，導(dǎo)致微生物檢驗(yàn)嚴(yán)重滯后于日益發(fā)展的臨床需求。輕度感染時(shí)，醫(yī)生習(xí)慣經(jīng)驗(yàn)用藥，只有患者癥狀嚴(yán)重，感染明確，經(jīng)驗(yàn)使用抗菌藥物無(wú)效時(shí)候開(kāi)血培養(yǎng)檢驗(yàn)，多為陽(yáng)性結(jié)果。(2)儀器法標(biāo)本采集不規(guī)范合格率較低。儀器法陽(yáng)性率與標(biāo)本采集瓶數(shù)和采集時(shí)間有關(guān)，需要在患者未使用抗菌藥物之前或是在患者高熱寒戰(zhàn)時(shí)采集血標(biāo)本，同時(shí)采集兩套標(biāo)本。血培養(yǎng)陽(yáng)性分離菌分布廣泛，不同病原菌間耐藥性亦不相同[5]，需要規(guī)范送檢了解血培養(yǎng)病原菌分布和耐藥性的監(jiān)測(cè)，指導(dǎo)臨床治療。但是本院正處在發(fā)展時(shí)期，年輕的新醫(yī)生較多，對(duì)血培養(yǎng)標(biāo)本的采集時(shí)間、采集部位、采集數(shù)量不清楚，導(dǎo)致標(biāo)本采集不合格，是導(dǎo)致儀器法陽(yáng)性率較低的主要原因。(3)抗菌藥物臨床應(yīng)用專(zhuān)項(xiàng)整治活動(dòng)中對(duì)住院患者使用抗菌藥物前的送檢率提出了要求和規(guī)定，某些醫(yī)師為完成指標(biāo)，無(wú)指征進(jìn)行血培養(yǎng)，增加了血培養(yǎng)標(biāo)本基數(shù)，導(dǎo)致儀器法陽(yáng)性率較低。(4)微生物檢驗(yàn)人員數(shù)量不足，對(duì)科室與臨床醫(yī)生關(guān)于規(guī)范標(biāo)本采集的宣教不到位，也是導(dǎo)致儀器法陽(yáng)性率較低的一個(gè)原因。由此可見(jiàn)，提高醫(yī)生對(duì)血培養(yǎng)檢驗(yàn)的認(rèn)識(shí)，規(guī)范護(hù)士采集方法，參照《血培養(yǎng)檢測(cè)規(guī)范化操作》采集標(biāo)本[6]，加強(qiáng)相關(guān)知識(shí)的宣傳教育，才能提高儀器法的陽(yáng)性率，發(fā)揮其優(yōu)勢(shì)。

3.2儀器法血培養(yǎng)瓶檢出細(xì)菌種類(lèi)較多近年來(lái)由于抗菌藥物的普遍使用及醫(yī)學(xué)技術(shù)的發(fā)展，使菌血癥的致病菌種類(lèi)有了較大變化，條件致病菌、苛養(yǎng)菌所致菌血癥有增多趨勢(shì)。兩種方法中均以革蘭陰性桿菌為主要病原菌，其中腸桿菌科細(xì)菌檢出率最高，其次是葡萄球菌屬細(xì)菌，與張凱等[7]、趙憶文等[8]報(bào)道的結(jié)果相似，也是革蘭陰性菌檢出數(shù)量占優(yōu)勢(shì)。據(jù)報(bào)道在美國(guó)、日本等已發(fā)現(xiàn)耐萬(wàn)古霉素的葡萄球菌[9-10]，我國(guó)目前雖未檢出對(duì)萬(wàn)古霉素耐藥的金黃色葡萄球菌，但此項(xiàng)感染防控工作依然需重視。采用手工法在615份血液中分離出12種48株病原菌，儀器法在1 062份血液中共分離出24種86株病原菌，在病原菌種類(lèi)上儀器法明顯優(yōu)于手工法，而對(duì)于腸桿菌科及葡萄球菌的鑒定兩種方法檢出率無(wú)明顯差異。儀器法對(duì)于苛養(yǎng)菌和鏈球菌明顯優(yōu)于手工法，對(duì)鏈球菌的檢出種類(lèi)有明顯提高，對(duì)革蘭陰性苛養(yǎng)菌檢出也有明顯優(yōu)勢(shì)，如多殺巴斯德菌、布魯氏桿菌這些對(duì)生長(zhǎng)要求高的細(xì)菌， FA(PF)和FN培養(yǎng)瓶中含有的活性炭可吸附抗菌藥物，使細(xì)菌的抑制得到解除，加之培養(yǎng)基中營(yíng)養(yǎng)豐富，保證了細(xì)菌正常的生長(zhǎng)繁殖。

本研究中儀器血培養(yǎng)法較手工血培養(yǎng)法陽(yáng)性率有小幅度提高，縮短了報(bào)告時(shí)間、增加了病原菌檢出種類(lèi)及準(zhǔn)確度，同時(shí)細(xì)菌的送檢標(biāo)本數(shù)有了大幅度提高，對(duì)于運(yùn)用細(xì)菌培養(yǎng)結(jié)果指導(dǎo)臨床醫(yī)師正確使用抗菌藥物治療提供了更大的支持。需要繼續(xù)加強(qiáng)與臨床醫(yī)師的溝通，提高血培養(yǎng)標(biāo)本送檢的意識(shí)，規(guī)范血培養(yǎng)采集方法，掌握血培養(yǎng)標(biāo)本的采集時(shí)間、部位和數(shù)量，降低污染率，進(jìn)一步提高儀器血培養(yǎng)法的陽(yáng)性率。

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2016-01-09修回日期：2016-05-01)

10.3969/j.issn.1673-4130.2016.15.045

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1673-4130(2016)15-2163-03