賀　偉

(甘肅省酒泉市人民醫(yī)院檢驗(yàn)科　735000)

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·論著·

溶血標(biāo)本對(duì)48項(xiàng)生化檢驗(yàn)結(jié)果的影響

賀偉

(甘肅省酒泉市人民醫(yī)院檢驗(yàn)科735000)

目的探討標(biāo)本溶血對(duì)生化檢驗(yàn)結(jié)果的影響，為檢驗(yàn)人員和臨床醫(yī)生對(duì)溶血標(biāo)本的生化檢驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行正確的分析提供依據(jù)。方法取未溶血標(biāo)本的血清進(jìn)行48項(xiàng)生化項(xiàng)目檢驗(yàn)，然后經(jīng)攪拌使標(biāo)本發(fā)生輕度溶血、中度溶血、重度溶血，3 000 r/min離心10 min，進(jìn)行相同的生化項(xiàng)目檢驗(yàn)，對(duì)未溶血、輕度溶血、中度溶血及重度溶血標(biāo)本的檢驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。結(jié)果輕度溶血血清測(cè)定中共有16項(xiàng)結(jié)果與未溶血標(biāo)本比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0．05);中度溶血與未溶血標(biāo)本檢驗(yàn)結(jié)果的比較有 25 項(xiàng)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0．05)；重度溶血標(biāo)本檢驗(yàn)有28項(xiàng)結(jié)果與未溶血標(biāo)本比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0．05)。結(jié)論標(biāo)本溶血對(duì)大部分生化檢驗(yàn)項(xiàng)目的結(jié)果可產(chǎn)生顯著性影響，在生化檢測(cè)分析中遇到標(biāo)本溶血但又必須報(bào)告時(shí)應(yīng)在報(bào)告單上注明，提醒醫(yī)師和患者引起注意；分析引起標(biāo)本溶血的原因，避免溶血現(xiàn)象的發(fā)生，保證檢驗(yàn)結(jié)果的真實(shí)、準(zhǔn)確。

標(biāo)本；溶血；生化檢驗(yàn)

生化檢驗(yàn)是臨床診斷疾病的常用手段，在疾病的診斷、判斷病情的嚴(yán)重程度和預(yù)后以及疾病病情的監(jiān)測(cè)、療效評(píng)估中發(fā)揮了重要作用。生化指標(biāo)作為常規(guī)檢查項(xiàng)目，種類繁多，標(biāo)本量大，結(jié)果的準(zhǔn)確性受到多種因素的影響，標(biāo)本發(fā)生溶血是臨床檢驗(yàn)工作中經(jīng)常遇到的情況。溶血分為病理性溶血和體外溶血，本文討論的是血液標(biāo)本離體后發(fā)生的溶血。有時(shí)在一些特殊情況下標(biāo)本采集不易造成采血困難，比如新生兒、嬰幼兒、長(zhǎng)期住院慢性病患者、大面積燒傷患者、全身多處損傷患者、超重者等；有時(shí)標(biāo)本不可再獲得，如轉(zhuǎn)院、死亡，或是標(biāo)本采集后馬上進(jìn)行了相關(guān)治療后又不得不進(jìn)行當(dāng)時(shí)病情下的相關(guān)檢驗(yàn)等，在這些情況下溶血標(biāo)本不能拒收。筆者擬通過(guò)了解標(biāo)本溶血程度對(duì)生化檢驗(yàn)結(jié)果的影響，正確地分析檢驗(yàn)結(jié)果。

1　材料與方法

1.1標(biāo)本來(lái)源標(biāo)來(lái)源于經(jīng)本院體檢中心檢查的健康成人共30例，男、女各15例，均于清晨空腹采集血液，其測(cè)得值均在正常參考范圍內(nèi)，分離出備用血清后，剩余的標(biāo)本用于對(duì)照試驗(yàn)，肉眼觀察無(wú)溶血、黃疸、混濁。

1.2儀器與試劑奧林巴斯Au5400 全自動(dòng)生化分析儀。鉀(K)、鈉(Na)、氯(Cl)使用貝克曼庫(kù)爾特生物技術(shù)有限公司生產(chǎn)的電極和相應(yīng)配套試劑；總膽汁酸(TBA)、腺苷脫氨酶(ADA)由浙江伊利康生物技術(shù)有限公司生產(chǎn)提供；其余項(xiàng)目試劑均來(lái)自北京九強(qiáng)生物技術(shù)有限公司。

1.3方法首先對(duì)30例未溶血標(biāo)本按常規(guī)操作方法在生化分析儀上進(jìn)行所有實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目的測(cè)定，測(cè)定3遍取平均值，然后攪動(dòng)血塊使標(biāo)本發(fā)生溶血，3 000 r/min離心10 min，肉眼觀察血清為淡紅色，在血球分析儀上測(cè)得血紅蛋白濃度，分為兩組:血紅蛋白濃度≤2 g/L為輕度溶血組(14例)，>2～≤4 g/L為中度溶血組(16例)，按相同方法進(jìn)行相同項(xiàng)目的測(cè)定，測(cè)定3遍取平均值；再次攪動(dòng)血塊離心后使標(biāo)本肉眼觀察為顯著紅色，測(cè)定血紅蛋白濃度>4 g/L為重度溶血標(biāo)本(30例)，再次上機(jī)進(jìn)行相同項(xiàng)目測(cè)定,測(cè)定3遍取平均值。48項(xiàng)常規(guī)生化檢驗(yàn)項(xiàng)目及其檢測(cè)方法如下：血清K、Na、Cl采用電極法，鈣(Ca)的檢測(cè)采用偶氮砷Ⅲ法，磷(IP)的檢測(cè)采用磷鉬酸還原法，葡萄糖(Glu)的檢測(cè)采用氧化酶法，尿素(Urea)、肌酐(Crea)、二氧化碳結(jié)合力(CO2-CP)、尿酸(UA) 的檢測(cè)采用酶法，丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(ALT)、天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(AST)、堿性磷酸酶(ALP)的檢測(cè)采用國(guó)際臨床化學(xué)聯(lián)合會(huì)推薦的方法(IFCC法)，γ-谷氨酰轉(zhuǎn)移酶(GGT)的檢測(cè)采用GPNA底物法，總蛋白(TP)的檢測(cè)采用雙縮脲法，清蛋白(ALB)的檢測(cè)采用溴甲酚綠法，總膽紅素(Tbil)、直接膽紅素(Dbil)的檢測(cè)采用釩酸鹽法，總膽汁酸(TBA)的檢測(cè)采用循環(huán)酶法，膽堿酯酶(CHE)的檢測(cè)采用肌酸激酶檢測(cè)試劑盒(DGKC法)，總膽固醇(CHO)、三酰甘油(TG)的檢測(cè)采用酶法，高密度脂蛋白(HDL)、低密度脂蛋白(LDL)的檢測(cè)采用直接法，載脂蛋白-A1(Apo-A1)、載脂蛋白-B(Apo-B)的檢測(cè)采用免疫比濁法，乳酸脫氫酶(LDH)的檢測(cè)采用L-P法，肌酸激酶(CK)、肌酸激酶同工酶(CK-MB)、α-羥丁酸脫氫酶(α-HBDH)的檢測(cè)采用DGKC法，腺苷脫氨酶(ADA)的檢測(cè)采用酶法，銅(Cu)、鋅(Zn)的檢測(cè)采用比色法，胱抑素C(Cys-C)的檢測(cè)采用免疫比濁法，腫瘤相關(guān)物質(zhì)(TSGF)的檢測(cè)采用比色法，鎂(Mg)的檢測(cè)采用二甲苯胺藍(lán)比色法，同型半胱氨酸(Hcy)的檢測(cè)采用酶法，抗O(ASO)、類風(fēng)濕因子(RF)、補(bǔ)體C3(C3)、補(bǔ)體C4(C4)、免疫球蛋白(Ig)G、IgA、IgM、超敏C反應(yīng)蛋白(hs-CRP)、β2-微球蛋白(β2-MG)的檢測(cè)采用免疫比濁法，鐵(Fe)的檢測(cè)采用亞鐵嗪法，超氧化物歧化酶(SOD)的檢測(cè)采用酶法。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)處理采用SPSS19.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，計(jì)量資料以均值表示，組間比較采用t檢驗(yàn)，以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2　結(jié)　果

輕度溶血標(biāo)本測(cè)定中共有16項(xiàng)指標(biāo)的檢測(cè)結(jié)果與未溶血標(biāo)本比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，其中K、Cl、LDH、α-HBDH、SOD、Hcy、AST、CK-MB、TP、ADA為顯著增高；Crea、Glu、CO2、Dbil、IP、Mg為顯著降低。中度溶血標(biāo)本測(cè)定有 25 項(xiàng)指標(biāo)的檢測(cè)結(jié)果與未溶血標(biāo)本相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，APO-B、CK、GGT、Cys-C、ALB、RF、Zn、ASO、TSGF 9個(gè)項(xiàng)目在輕度溶血中差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，但在中度溶血中發(fā)生了明顯的影響(P<0.05)。重度溶血標(biāo)本檢驗(yàn)結(jié)果除了Urea、UA、ALT、ALP、Tbil、CHE、CHO、HDL、LDL、Apo-A1、Cu、C3、C4、IgG、IgA、IgM、hs-CRP、Fe、β2-MG與未溶血標(biāo)本比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義外，其余28項(xiàng)結(jié)果與未溶血標(biāo)本比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見(jiàn)表1。

表1　未溶血標(biāo)本以及輕度溶血、中度溶血、重度溶血標(biāo)本的檢測(cè)結(jié)果均值

注：與未溶血標(biāo)本比較，*P<0.05。

3　討　論

通過(guò)對(duì)未溶血與輕度溶血標(biāo)本的檢驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，引起測(cè)定結(jié)果顯著性降低的項(xiàng)目有Crea、GLU、CO2-CP、Dbil、IP、Mg,引起顯著性增高的項(xiàng)目有K、Cl、LDH、α-HBDH、TP、SOD、Hcy、AST、CK-MB、ADA,輕度溶血對(duì)其余32個(gè)生化檢驗(yàn)項(xiàng)目的檢驗(yàn)結(jié)果無(wú)明顯影響。中度溶血與未溶血標(biāo)本檢驗(yàn)結(jié)果的比較又增加了9項(xiàng)，分別是Apo-B、CK、GGT、Cys-C、ALB、RF、Zn、ASO、TSGF。其中，引起顯著降低的項(xiàng)目是GGT、ASO、RF；其余6項(xiàng)為顯著性增高。重度溶血標(biāo)本的檢驗(yàn)結(jié)果在對(duì)輕、中度溶血受影響的項(xiàng)目同樣產(chǎn)生顯著性影響外，還對(duì)Na、Ca、TBA、TG產(chǎn)生顯著性的影響。隨著溶血程度的加深而逐漸增高的項(xiàng)目有K、CK、CK-MB、LDH、AST、α-HBDH、ADA、Apo-B、SOD、Zn、Hcy；隨著溶血程度的加深而逐漸降低的項(xiàng)目有IP、Glu、Crea、ALT、GGT、Dbil、ASO、RF；在本次試驗(yàn)組中，溶血引起的干擾較小無(wú)顯著性差異的項(xiàng)目有Urea、UA、ALT、ALP、Tbil、CHE、CHO、HDL、LDL、Apo-A1、Cu、C3、C4、IgG、IgA、IgM、hs-CRP、Fe、β2-MG。需引起重視的是溶血對(duì)血鉀、心肌酶類項(xiàng)目的干擾極為顯著，在輕度溶血時(shí)就可使結(jié)果產(chǎn)生極大變化，因此此類項(xiàng)目標(biāo)本溶血時(shí)，應(yīng)重新采集血樣進(jìn)行檢驗(yàn)，或與臨床溝通后必須要報(bào)告時(shí)應(yīng)在報(bào)告單上注明，以免導(dǎo)致誤診。輕度溶血對(duì)腎功能、肝功能、血脂檢驗(yàn)的部分項(xiàng)目產(chǎn)生的影響干擾較小，在重新采集血樣困難的情況下可以作為參考。

溶血是臨床生化檢驗(yàn)中常見(jiàn)的一種干擾因素，其干擾機(jī)制主要有以下幾個(gè)方面：(1)血細(xì)胞高濃度成分逸出，使血清分析物濃度增加。紅細(xì)胞內(nèi)AST是血漿的38倍，LDH濃度是血漿的180倍，鉀離子濃度是血清的22倍[1-2]。因此在本組實(shí)驗(yàn)中，僅輕度溶血就可導(dǎo)致結(jié)果增高，并且隨著溶血程度的加深而逐漸增高。α-HBDH在實(shí)驗(yàn)中也表現(xiàn)為溶血越嚴(yán)重升高越顯著，原理與LDH和AST相同。(2)血紅蛋白本身對(duì)吸光度的干擾。不同分析方法受血紅蛋白干擾程度不同，其中終點(diǎn)法更易受到血紅蛋白吸光度干擾。紅細(xì)胞破裂釋放的血紅蛋白會(huì)使最終反應(yīng)的吸光度增加，引起結(jié)果偏高[1,3]。在實(shí)驗(yàn)中TP、ALB、CHE、TG的測(cè)定隨著血紅蛋白濃度增高而顯著性增加，與多篇報(bào)道基本一致[1,4-5]。(3)某些物質(zhì)的血細(xì)胞內(nèi)濃度低于血漿時(shí)，則溶血相當(dāng)于血漿被稀釋，使這些血清成分特別是在發(fā)生重度溶血時(shí)檢測(cè)值降低，比如Na、Cl、Glu、GGT等[3]。(4)血紅蛋白還可競(jìng)爭(zhēng)性抑制分析物與試劑中的反應(yīng)物結(jié)合，使測(cè)定結(jié)果低于實(shí)際值。在膽紅素測(cè)定中，血紅蛋白對(duì)用重氮法檢測(cè)的Tbil產(chǎn)生嚴(yán)重的正干擾[2]。有作者研究證實(shí)釩酸鹽法抗血紅蛋白干擾能力優(yōu)于重氮法，在血紅蛋白濃度≤10 g/L時(shí)，對(duì)Tbil無(wú)影響，對(duì)Dbil有輕微負(fù)影響，與本次研究結(jié)果相符。(5)血清CK動(dòng)力學(xué)測(cè)定中，因紅細(xì)胞來(lái)源的腺苷酸激酶(Ak)參與其指示反應(yīng)，使結(jié)果假性增高，CK-MB結(jié)果隨著CK的增高而增高[3]。

標(biāo)本溶血對(duì)生化檢驗(yàn)結(jié)果的影響各個(gè)實(shí)驗(yàn)室報(bào)道結(jié)果不盡相同，對(duì)影響的具體項(xiàng)目的統(tǒng)計(jì)學(xué)結(jié)果存在較大差異[6-8]，這可能與各實(shí)驗(yàn)室使用的試劑、儀器、分析參數(shù)設(shè)置以及實(shí)驗(yàn)時(shí)溶血標(biāo)本的濃度不同等有關(guān)。如有文獻(xiàn)報(bào)道標(biāo)本溶血對(duì)ALB、TG、CHO測(cè)定無(wú)影響，而本實(shí)驗(yàn)室測(cè)得的ALB與溶血程度正相關(guān)，TG和CHO測(cè)定在重度溶血時(shí)結(jié)果明顯增高；又如有報(bào)道稱ALT和ALP與溶血程度呈正相關(guān)，而在本試驗(yàn)時(shí)均無(wú)影響；血清IP測(cè)定在本次試驗(yàn)中隨著溶血程度的加重而產(chǎn)生顯著性降低的影響，與賈章琳等[9]的報(bào)道結(jié)果完全不同:所以在分析溶血標(biāo)本對(duì)生化檢驗(yàn)結(jié)果的影響時(shí)，要以本實(shí)驗(yàn)室的實(shí)際統(tǒng)計(jì)結(jié)果為準(zhǔn)。標(biāo)本發(fā)生溶血是檢驗(yàn)工作中經(jīng)常遇到的問(wèn)題，引起溶血的常見(jiàn)原因有以下幾種情況：(1)使用注射器抽血時(shí)負(fù)壓過(guò)大，標(biāo)本中混入泡沫造成溶血；穿刺血管不順利(反復(fù)抽取)、壓脈帶壓迫血管時(shí)間較長(zhǎng)、患者血管不充盈反復(fù)拍打血管、未取下針頭直接注入試管，使血液注入試管中時(shí)壓力過(guò)大等因素均可引起溶血。(2)使用留置針抽血，留置針內(nèi)的血液也會(huì)引起溶血，此時(shí)應(yīng)放掉針內(nèi)的血液，再抽取血液作為標(biāo)本使用。(3)標(biāo)本采集后顛倒混勻力度過(guò)大或次數(shù)過(guò)多，試管內(nèi)壁不清潔或受到污染。(4)標(biāo)本在運(yùn)輸過(guò)程中發(fā)生較大的振蕩，或是運(yùn)輸中溫度過(guò)高或過(guò)低等因素均可造成溶血。(5)冬季將采集后的標(biāo)本放置窗臺(tái)上，溫度過(guò)低造成溶血；采集后不需及時(shí)檢測(cè)的標(biāo)本未加離心分離血清放置冰箱冷凍室保存或是標(biāo)本放置時(shí)間過(guò)長(zhǎng)造成溶血。(6)標(biāo)本在實(shí)驗(yàn)室離心分離時(shí)處理不當(dāng)，導(dǎo)致標(biāo)本溶血。

綜上所述，溶血對(duì)大多數(shù)生化檢驗(yàn)項(xiàng)目產(chǎn)生顯著性影響，了解標(biāo)本溶血對(duì)檢驗(yàn)結(jié)果的影響，為臨床醫(yī)生提供結(jié)果判斷依據(jù)，對(duì)檢驗(yàn)結(jié)果做出正確的分析和應(yīng)用，避免導(dǎo)致誤判的發(fā)生。所以在工作中遇到溶血的標(biāo)本，應(yīng)及時(shí)與臨床溝通，不能全部當(dāng)作不合格標(biāo)本拒收。檢驗(yàn)人員須在檢驗(yàn)報(bào)告單上備注標(biāo)本的溶血狀態(tài)，以提醒報(bào)告使用者的注意。對(duì)結(jié)果影響較大的項(xiàng)目應(yīng)盡可能重新采集檢驗(yàn)，保證檢驗(yàn)結(jié)果的真實(shí)、準(zhǔn)確。

[1]阿吉．定量測(cè)定標(biāo)本溶血對(duì)18項(xiàng)常規(guī)生化指標(biāo)檢驗(yàn)結(jié)果的影響及原因分析[J]．世界最新醫(yī)學(xué)信息文摘，2015，15(4)：168-169．

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Analysis on influence of hemolytic samples on 48-item biochemical test resuts

HE Wei

(DepartmentofClinicalLaboratory,JiuquanMunicipalPeople′sHospital,Jiuquan,Gansu735000,China)

ObjectiveTo discuss the influence of sample hemolysis on the biochemical testing results to provide the basis for the laboratory personnel and clinical doctors correctly analyzing the biochemical testing results of hemolytic samples.MethodsSerum from non-hemolytic samples was taken and performed the detection of 48 biochemical items.Then the sample was stirred for inducing the mild,moderate and severe hemolysis.Centrifugation was conducted at 3 000 r/min for 10 min.Finally the detections of the same biochemical testing items were performed again.The detection results of non-hemolysis,mild,moderate and severe hemolysis samples were statistically analyzed.ResultsAs compared with the non-hemolytic samples,the 16-item detection results in the mild hemolysis samples showed statistically significant difference,25-item detection results in the moderate hemolysis samples showed statistically significant difference and 28-item detection results in the severe hemolysis samples showed statistically significant difference (P<0.05),respectively.ConclusionThe sample hemolysis could produce the significant influence on the majority of biochemical testing items.Therefore,the sample hemolysis is encountered and the detection results must be reported in the biochemical detection,the clear indication should be given in the report for reminding the doctor and patient to arouse attention.The causes leading to the sample hemolysis should be analyzed for avoiding the occurrence of hemolysis phenomenon and ensuring the truthfullness and accuracy of the detection results.

samples;hemolysis;biochemical testing

2016-01-20修回日期：2016-05-03)

賀偉，女，主管檢驗(yàn)技師，主要從事臨床生物化學(xué)檢驗(yàn)。

10.3969/j.issn.1673-4130.2016.15.019

A

1673-4130(2016)15-2102-03