黃勤烽，黃少鈴，王美珠，陳　敏

(南京軍區(qū)福州總醫(yī)院檢驗科，福州 350025)

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·論著·

羅氏尿微量清蛋白檢測試劑盒性能評價*

黃勤烽，黃少鈴，王美珠，陳敏△

(南京軍區(qū)福州總醫(yī)院檢驗科，福州 350025)

目的評價羅氏第2代尿微量清蛋白(ALBU2)在Cobas 8000 C702全自動生化分析儀上的檢測性能。方法(1)精密度評價：以CLIA′88規(guī)定的允許誤差TEa為依據(jù)，要求重復(fù)精密度<1/4TEa，中間精密度<1/3TEa；(2)線性范圍及可報告范圍評價：采用EP6-A方案，并延伸計算平均稀釋回收率，以平均稀釋回收率在90%～110%，評價臨床可報告范圍；(3)攜帶污染評估：評估血清清蛋白對尿量微量清蛋白檢測的攜帶污染，以攜帶污染率≤0.5%標(biāo)準(zhǔn)判定；(4)方法比對分析：以Siemens BNⅡ為參考系統(tǒng)，將羅氏Cobas 8000 C702與BN2結(jié)果進行相關(guān)性比對分析。結(jié)果重復(fù)精密度：低濃度CV為1.98%，高濃度CV為1.64%；中間精密度：低濃度CV為4.35%，高濃度CV為1.20%。線性范圍驗證：測量范圍為5.6～413.55 mg/L；臨床可報告范圍：最大稀釋倍數(shù)為30倍，臨床可報告范圍為5.6～12 406.5 mg/L。攜帶污染率：血清清蛋白(42.6 g/L)對尿液微量清蛋白(6.9 mg/L)的攜帶污染為0.28%。室內(nèi)比對：標(biāo)本濃度在200 mg/L時，回歸直線為Y=0.896X+5.049，r2=0.994 4，醫(yī)學(xué)決定水平處系統(tǒng)偏移通過；當(dāng)標(biāo)本濃度在201～413.55 mg/L時，回歸直線為Y=0.848X-10.44，r2=0.917，醫(yī)學(xué)決定水平處系統(tǒng)偏移未通過。結(jié)論羅氏ALBU2在Cobas 8000 C702平臺上檢測能滿足臨床的需求，不同儀器間的比對，在不同濃度范圍內(nèi)有差異，應(yīng)根據(jù)各自儀器的系統(tǒng)建立獨立的參考范圍。

尿微量清蛋白；精密度；線性范圍；可報告范圍；攜帶污染；特定蛋白儀

尿微量清蛋白作為早期腎損傷的敏感指標(biāo)，在診斷糖尿病腎病、原發(fā)性高血壓以及冠狀動脈病變程度等都有重要意義[1-4]。為消除飲水對結(jié)果的影響，臨床檢驗當(dāng)中常以尿微量清蛋白/尿肌酐比值，尿微量清蛋白聯(lián)合胱抑素C以及β2-微球蛋白作為臨床診斷、病程監(jiān)測的可靠指標(biāo)[5-7]。目前臨床測定尿微量清蛋白的方法學(xué)主要是免疫比濁法，它具有準(zhǔn)確性高、靈敏度高、特異性強的特點[8]。本次試驗主要在羅氏Cobas 8000 C702全自動生化分析儀平臺上，對羅氏第2代尿微量清蛋白試劑(ALBU2)進行性能評價。

1　材料與方法

1.1一般資料分別準(zhǔn)備2份濃度接近醫(yī)學(xué)決定水平的新鮮尿液標(biāo)本，用作精密度試驗；2份濃度接近廠家聲明線性范圍(0～400 mg/L)上下限的新鮮尿液標(biāo)本，用作線性范圍驗證；1份濃度接近線性范圍下限的新鮮尿液標(biāo)本及1份清蛋白濃度在線性范圍內(nèi)的血清標(biāo)本，用作攜帶污染試驗；40份濃度覆蓋線性范圍的新鮮尿液標(biāo)本，用作比對試驗。

1.2儀器與試劑羅氏Cobas 8000 C702全自動生化分析儀，西門子 BNⅡ特定蛋白儀。羅氏ALBU2試劑(批號607851)，西門子尿微量清蛋白試劑(批號153996C)。羅氏ALBU2校準(zhǔn)品(C-PUC，批號176516)，質(zhì)控品(Precinorm PUC，批號176517/176518)；西門子尿微量清蛋白校準(zhǔn)品(批號083604)。

1.3方法

1.3.2線性范圍驗證依照CLSI的EP6-A文件要求，取兩個接近廠家聲明線性范圍(0～400 mg/L)上下限的新鮮尿液，按1L，0.9L+0.1H，0.8L+0.2H，0.7L+0.3H，0.6L+0.4H，0.5L+0.5H，0.4L+0.6H，0.3L+0.7H，0.2L+0.8H，0.1L+0.9H，1H的比例配制成11個系列濃度標(biāo)本，重復(fù)測定3次，在短時間內(nèi)測定完成。統(tǒng)計數(shù)據(jù)，剔除離群值，采用多項式回歸作為分析的評價方法，以實測值為Y，各濃度點為X，使用EXCEL軟件進行二元一次、二元二次、二元三次多項式回歸分析，選擇最小標(biāo)準(zhǔn)誤差的擬合曲線為最適模型。計算最適模型在每個濃度處的預(yù)期值，其與線性模型的偏離(Dli)應(yīng)<1/2TEa。

1.3.3可報告范圍驗證一份高濃度的新鮮尿液，濃度落在線性范圍內(nèi)，用廠家推薦的稀釋液(生理鹽水)進行5、10、20、30、40倍稀釋，每個濃度重復(fù)測3次，以樣品原倍結(jié)果作為預(yù)期值，稀釋后測定的結(jié)果為檢測值，計算各稀釋倍數(shù)的回收率，應(yīng)在90%～110%。

1.3.4攜帶污染根據(jù)CNAS CL-31《實驗室質(zhì)量和能力認(rèn)可在臨床生化檢測領(lǐng)域的應(yīng)用》說明，取一份血清標(biāo)本，連續(xù)測3次血清清蛋白，結(jié)果分別記錄為H1、H2、H3；另取一份新鮮尿液標(biāo)本，連續(xù)測3次尿微量清蛋白，結(jié)果分別記錄為L1、L2、L3；計算公式：攜帶污染率=(L1-L3)/(H3-L3)×100%，攜帶污染率≤0.5%判定符合要求。

1.3.5不同系統(tǒng)間的比對以BNⅡ為參考系統(tǒng)，準(zhǔn)備40份新鮮尿液標(biāo)本，分析包括正常(濃度在5.6～200 mg/L)和異常(濃度在201～413.55 mg/L)，濃度覆蓋全線性范圍，在短時間內(nèi)全部測定完成。結(jié)果采用線性擬合的方式，評估相關(guān)性，計算比對儀器和基準(zhǔn)儀器之間的回歸方程，相關(guān)系數(shù)(r2)，通過回歸方程，計算醫(yī)學(xué)決定性水平處的偏移，若偏移小于1/2TEa，則比對通過。

1.4統(tǒng)計學(xué)處理采用EXCEL 2007軟件分析數(shù)據(jù)。

2　結(jié)　果

2.1精密度評價

2.1.1重復(fù)精密度按CLIA′88要求，MAU分析允許的最大總誤差(TEa)為±20%，醫(yī)學(xué)決定水平水平1為25 mg/L，水平2為100 mg/L，重復(fù)精密度要求<1/4TEa，見表1。

2.1.2中間精密度按CLIA′88要求，中間精密度要求<1/3TEa，見表2。

表1　ALBU2重復(fù)精密度分析

表2　ALBU2中間精密度分析

2.2線性范圍驗證依照CLSI的EP6-A2文件的要求，數(shù)據(jù)擬合的最佳形式為多項式，多項式與直線擬合的偏差在每個濃度點均小于可接受范圍，可接受范圍<1/2 TEa，見圖1。多項式擬合與直線擬合的差值(%)分布圖(上下限分別為0±1/2TEa)見圖2。擬合后，ALBU2線性從1到11點成線性，分析測量范圍5.6～413.55 mg/L，符合廠家申明要求。

圖1　ALBU2線性范圍驗證多項式擬合

圖2　ALBU2多項式擬合擬合與直線擬合的差值(%)分布圖

2.3可報告范圍標(biāo)本經(jīng)5～40倍稀釋后，回收率落在90%～110%的最大稀釋倍數(shù)為30倍，故其可報告范圍為5.6～(413.55×30)mg/L，可以滿足臨床需求，見表3。

表3　ALBU2可報告范圍驗證

2.4攜帶污染數(shù)據(jù)分析血清清蛋白未對尿微量清蛋白測定造成攜帶污染，攜帶污染率≤0.5%，羅氏Cobas 8000 C702平臺在清洗防止攜帶污染上滿足臨床需求，見表4。

2.5比對試驗ALBU2濃度5.6～200 mg/L線性擬合后，回歸方程Y=0.896X+5.049，r2=0.994 4，計算醫(yī)學(xué)決定性水平處的偏移，偏移小于1/2TEa，比對通過，見圖3。ALBU2濃度201～413.55 mg/L線性擬合后，回歸方程Y=0.848X-10.44，r2=0.917，計算醫(yī)學(xué)決定性水平處的偏移，偏移大于1/2TEa，比對未通過，見圖4。

表4　ALBU2與血清清蛋白攜帶污染驗證

圖3　羅氏C702與西門子BNⅡ在≤200 mg/L的比對

圖4　羅氏C702與西門子BNⅡ在201～413.55 mg/L的比對

3　討　論

羅氏Cobas 8000 C702全自動生化分析儀，是一款新型生化免疫一體化分析平臺，具有良好的性能[9]。羅氏ALBU2配置有微量清蛋白抗原過剩檢測試劑盒，在采用清蛋白檢測試劑盒完成比濁反應(yīng)后，加入微量清蛋白抗原過剩檢測試劑作為第3種試劑，并對由此產(chǎn)生的吸光度變化進行評估，如果測出的吸光度超出了范圍，儀器將進行自動預(yù)稀釋，因此提高了檢測的速率，同時又降低了成本。

根據(jù)試驗分析表明，羅氏ALBU2重復(fù)精密度<1/4TEa，中間精密度<1/3TEa，符合要求，線性范圍驗證為5.6～413.55 mg/L，最大稀釋倍數(shù)30倍，可報告范圍符合5.6～(413.55×30) mg/L，符合廠家申明要求以及臨床需求。由于不同的儀器間，其儀器在清洗防止攜帶污染不盡相同，以羅氏Cobas 8000 C702平臺分析尿微量清蛋白，血清清蛋白對尿微量清蛋白的攜帶污染率≤0.5%，滿足CNAS CL-31《實驗室質(zhì)量和能力認(rèn)可在臨床生化檢測領(lǐng)域的應(yīng)用》說明。本次試驗以西門子BNⅡ特定蛋白儀器為參考系統(tǒng)，試劑校準(zhǔn)品為原裝配套檢測系統(tǒng)，具備完整的溯源體系。標(biāo)本濃度分布在200 mg/L以內(nèi)時有較好的相關(guān)性，醫(yī)學(xué)決定水平處偏移通過；當(dāng)濃度超過200 mg/L時相關(guān)性較差，醫(yī)學(xué)決定水平處偏移未通過。分析可能原因是西門子BNⅡ尿微量清蛋白每批試劑的線性范圍不一致，本批號線性為2.08～66.7 mg/L，因此稀釋倍數(shù)越大，誤差偏移就越大。有文獻以西門子BNⅡ特定蛋白儀器為參考系統(tǒng)，在奧林巴斯AU5400全自動生化分析儀上評價深圳邁瑞尿微量清蛋白試劑性能，在線性范圍內(nèi)有很好的相關(guān)性，未出現(xiàn)隨著濃度增高，比對相關(guān)性差[10]。

綜合上述試驗數(shù)據(jù)分析，羅氏ALBU2具有良好的精密度，線性范圍也較特定蛋白儀寬，最大稀釋倍數(shù)較高，可報告范圍寬，與西門子BNⅡ特定蛋白儀比對，在200 mg/L濃度內(nèi)有很好的相關(guān)性，能滿足臨床檢驗要求。目前羅氏全自動生化分析儀在各大醫(yī)院有較大的推廣率，能在生化儀上準(zhǔn)確測定微量清蛋白，對減少標(biāo)本周轉(zhuǎn)差錯及快速出具結(jié)果都大有益處。因此以羅氏全自動生化分析儀來測定尿微量清蛋白具有測定快速、簡便，價格便宜的優(yōu)點，但是應(yīng)建立羅氏ALBU2獨立的參考系統(tǒng)。

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Performance evaluation on Roche urine trace albumin detection reagent kit*

HUANG Qinfeng,HUANG Shaoling,WANG Meizhu,CHEN Min△

(DepartmentofClinicalLaboratory,FuzhouGeneralHospitalofNanjingMilitaryRegion,Fuzhou,Fujian350025,China)

ObjectiveTo evaluate the detection performance of the cobas8000 c702 fully automatic biochemical analyzer for detecting the second generation Roche urine trace albumin (ALBU2).Methods(1) The precise evaluation:with the allowable error stipulated by CLIA 88 as the basis,the requirements were the repeat precision <1/4TEa,and intermediate precision <1/3TEa;(2)the linear range and the evaluation of the reportable range:the EP6-A scheme was adopted,and extend to calculate the average recovery rate of dilution,the clinical reportable range was evaluated by the average dilution recovery of 90%-110%;(3) the carry over pollution assessment:the carry over pollution of serum albumin on urine trace albumin detection was evaluated by the judgment standard of carry over pollution rate of 0.5%;(4)the methodological comparative analysis:with SIEMENS BNⅡas the reference system,the Roche Cobas 8000 C702 and the BN2 results were performed the correlation contrastive analysis.ResultsThe repeat precision:low concentrationCV=1.98%.high concentrationCV=1.64%;intermediate precision:low concentrationCV=4.35%,high concentrationCV=1.20%;the linear range verification:the measurement range 5.6-413.55 mg/L;clinical reportable range:in the maximum diluted multiples of 30 times,the clinical reportable range was 5.6-12 406.5 mg/L;the carry over pollution rate:serum albumin (42.6 g/L) on urine trace albumin(6.9 mg/L),the carry over pollution rate was 0.28%;the indoor comparison:in the concentration within 200 mg/L,the regression line wasY=0.896X+5.049,the correlation coefficientr2=0.994 4,the system shift was passed at the medical decision level.When the specimen concentration within 201-413.55 mg/L,the regression line wasY=0.848X-10.44,the correlation coefficientr2=0.917,the system shift was not passed at the medical decision level.ConclusionThe detection of the Roche ALBU2 in the Cobas 8000 C702 platform can meet the clinical needs,the comparison among different instruments has difference in different concentration ranges,therefore the independent reference ranges should be established according to the each instrument system。

urine trace albumin;precision;linear range;reportable range;carry over pollution;specific protein instrument

2016-01-26修回日期：2016-05-20)

福建省2012年重點科技項目(2012Y0058)。

黃勤烽，男，主管檢驗技師，主要從事臨床生化檢驗?！?/p>

，E-mail:fzcmin@qq.com。

10.3969/j.issn.1673-4130.2016.15.003

A

1673-4130(2016)15-2055-03