陳秋帆，陳 穗（廣東省佛山市南海區(qū)羅村醫(yī)院康復(fù)科、急診科，廣東 佛山 528226）

論 著

針刺結(jié)合補(bǔ)陽還五湯對(duì)缺血性中風(fēng)大鼠腦能量代謝的影響

陳秋帆，陳 穗
（廣東省佛山市南海區(qū)羅村醫(yī)院康復(fù)科、急診科，廣東 佛山 528226）

目的：研究針刺結(jié)合補(bǔ)陽還五湯對(duì)缺血性中風(fēng)大鼠的腦能量代謝的影響。方法：120只健康的SD大鼠作為研究對(duì)象，隨機(jī)選擇8只為正常組，30天后8只為假手術(shù)組，其余按照四血管閉塞法造模分成模型組、湯劑組、針?biāo)幗M及陽性藥組各26只。正常組、假手術(shù)組及模型組均給予生理鹽水，湯劑組用補(bǔ)陽還五湯，針?biāo)幗M用針刺聯(lián)合補(bǔ)陽五湯劑，陽性藥組用腦心通，均干預(yù)4周。結(jié)果：針?biāo)幗M、湯劑組及陽性藥組腦組織ATP、ADP含量，及TAN、EC值均高，AMP降低，和模型組、假手術(shù)組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），前3組比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。結(jié)論：針刺結(jié)合補(bǔ)陽還五湯對(duì)缺血性中風(fēng)大鼠的腦能量代謝有良好的改善效用，能起到抗腦缺血損傷作用。

針刺；補(bǔ)陽還五湯；大鼠模型；缺血性中風(fēng)；腦能量代謝

腦中風(fēng)是基于腦內(nèi)動(dòng)脈血管硬化、狹窄、血栓脫落等導(dǎo)致腦組織血氧不足而壞死，并使相應(yīng)區(qū)域神經(jīng)功能出現(xiàn)障礙的病癥［1］。我們對(duì)大鼠進(jìn)行模擬研究針刺結(jié)合補(bǔ)陽還五湯治療腦中風(fēng)的效果，報(bào)道如下。

1 材 料

120只健康SD大鼠，均為雄性，SPF級(jí)別。大鼠平均體質(zhì)量為（250±15）g。在實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行適應(yīng)性飼養(yǎng)1周，再隨機(jī)選定8只為正常組，過30天后選定8只為假手術(shù)組。其余104只大鼠均通Pulsinelli四血管閉塞法制作全腦缺血-再灌注模型，成功造模之后基于隨機(jī)分組分成模型組、湯劑組、針?biāo)幗M及陽性藥組各26只。

2 方 法

2.1 儀器及試劑

研究?jī)x器：洗板機(jī)（南京德鐵HBS-4009），酶標(biāo)儀（北京普天光PT-3502A），分析天平（梅特勒-巧利多儀器公司ME104E型），超低溫冰箱（賽默飛世爾儀器公司702型），高速冷凍離心機(jī)智能生化培養(yǎng)箱（賽默飛世爾儀器公司Multifuge 11R型），勻漿機(jī)（德國IKA儀器公司D79219型），移液槍（上海佳安200μL、1000μL），手術(shù)器具包（上海通派生物科技）。

實(shí)驗(yàn)試劑：大鼠三磷酸腺苷酶（ATP）ELISA試劑盒，大鼠二磷酸腺苷酶（ADP）ELISA試劑盒，大鼠磷酸腺苷酶（AMP）ELISA試劑盒（均為武漢新啟迪生物科技生產(chǎn)），乙醇（天津大茂化學(xué)藥劑生產(chǎn)廠），水合氯醛（天津科密歐試劑公司），磷酸二氫鈉（天津大茂化學(xué)藥劑生產(chǎn)廠），磷酸氫二鈉（天津科密歐試劑公司），頭抱拉定注射液（汕頭金石粉針劑有限公司），腦心通膠囊（陜西步長(zhǎng)制藥有限公司），華佗牌30號(hào)0.5寸毫針1盒。

2.2 動(dòng)物模型制備

用Pulsinelli四血管閉塞法制作全腦缺血-再灌注模型。①所有大鼠進(jìn)入實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行為期一周的適應(yīng)性喂養(yǎng)，在造模前1天禁食；②造模進(jìn)行時(shí)，應(yīng)用調(diào)配好的10%水合氯醛安裝0.35mL/kg用量予以腹腔注射，在大鼠麻醉后，將施術(shù)部位毛發(fā)予以剃除；③使大鼠俯臥并固定在手術(shù)臺(tái)，將高頭部提高約2cm，應(yīng)用2%碘酒、75%酒精進(jìn)行有效消毒；④在枕骨后，第1頸椎水平正中線行一個(gè)長(zhǎng)為1.5cm縱切口，使背闊肌、斜方肌得以充分暴露，應(yīng)用無菌攝子把其往兩側(cè)予以純性分離，使第1頸椎橫突翼得以暴露，再找到左、右雙側(cè)橫突孔；⑤把已預(yù)熱好的電凝器緩緩置入雙側(cè)橫突孔內(nèi)2次，首次停留5s，第2次停留3s，對(duì)雙側(cè)椎動(dòng)脈有效燙凝，以構(gòu)造永久性閉塞，在手術(shù)口滴1～2滴頭抱拉定注射液進(jìn)行感染預(yù)防，再縫合后再應(yīng)用酒精消毒；⑥把大鼠仰臥并固定于手術(shù)臺(tái)，進(jìn)行消毒、備皮，在頸前正中部行一長(zhǎng)度約為1cm縱切口，把氣管兩側(cè)肌肉予以鈍性分離，探查到頸總動(dòng)脈，應(yīng)用無菌鑷子把迷走神經(jīng)予以有效分離，并置線標(biāo)記，在手術(shù)口處滴1～2滴頭孢拉定注射液，縫合1針，予以消毒；第2天，把清醒大鼠置入干燥器內(nèi)，應(yīng)用適量乙醚予以麻醉待四肢雍軟之后迅速取出，并讓其仰臥固定在手術(shù)臺(tái)，進(jìn)行消毒，把頸部切口開啟，找到之前置入的頸總動(dòng)脈標(biāo)記線，將頸總動(dòng)脈提起，待清醒予以夾閉，以構(gòu)成全腦缺血，15min后松開，恢復(fù)血液灌注，術(shù)后滴1～2滴頭孢拉定注射液，縫合，消毒；⑦造模結(jié)束后，對(duì)各組大鼠神經(jīng)功能缺損進(jìn)行評(píng)分，1～3分為成功、0分為失敗。

2.3 針刺穴位

選擇百會(huì)、水溝兩穴位，其中水溝穴在唇裂正中、鼻尖下端1mm部位、百會(huì)則在頂骨正中。

2.4 中藥湯劑

用補(bǔ)陽還五湯（黃芪120g，地龍、紅花、川芎、桃仁各3g，當(dāng)歸尾、赤芍各5g），置入5000mL燒瓶?jī)?nèi)，注入2000mL清水后和回流冷凝裝置相連，加熱沸騰之后進(jìn)行計(jì)時(shí)30min，趁熱將要藥液倒出，再往燒瓶注入2000mL清水，加熱到沸騰后計(jì)時(shí)30min，趁熱取液。最后將前后兩次藥液合并調(diào)整至所用濃度，冷卻密封保存。

2.5 干預(yù)方法

正常組、假手術(shù)組、模型組均按10mL/kg予0.9%生理鹽水。湯劑組按10mL/kg藥量給予濃度為1.496g/mL補(bǔ)陽還五湯湯劑。針?biāo)幗M予和湯劑組相同用量的補(bǔ)陽還五湯并輔以針刺，百會(huì)穴30號(hào)0.5寸華佗牌毫針向前沿皮刺0.5～1.0cm，水溝穴用相同型號(hào)毫針自穴位處向鼻中隔方向斜刺0.2～0.3cm。左手持水溝、右手持百會(huì)針柄，以120次/min左右捻轉(zhuǎn)1min，留針30min，次期間每5min捻轉(zhuǎn)1次、每次捻轉(zhuǎn)lmin。陽性藥組給與濃度為0.050g/ mL腦心通膠囊水溶液10mL/kg。

2.6 取樣及樣本處理

每日1次，干預(yù)3周后禁食，第2天用水合氯醛予以麻醉，麻醉起效后快速斷頭取腦，并妥善置于低溫冰盒內(nèi)，將腦膜、血管快速去除，應(yīng)用手術(shù)刀片切取雙側(cè)大腦缺血皮質(zhì)，應(yīng)用錫紙包好，并快速置入干冰內(nèi)速凍15min，再取出予以標(biāo)記，置入-80℃冰箱內(nèi)妥善保存，等待檢測(cè)。把保存的樣本取出，進(jìn)行稱重，在0.01MPBS中洗1次同時(shí)按照1∶9比例注入生理鹽水，放置到冰水內(nèi)予以勻漿。勻漿后，置入高速冷凍離心機(jī)內(nèi)，5000rmp離心10min，選取上清液檢測(cè)。應(yīng)用各自酶聯(lián)免疫試劑盒，采取酶聯(lián)免疫吸附法化測(cè)定各組樣本腦組織的ATP、ADP、AMP等含量。

2.7 統(tǒng)計(jì)處理

用SPSS20.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，計(jì)量數(shù)據(jù)用均數(shù)和標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，用t檢驗(yàn)，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

3 結(jié) 果

各組腦組織液ATP、ADP含量比較見表1。

表1 各組腦組織液中ATP、ADP含量比較 （μmol/g，±s）

表1 各組腦組織液中ATP、ADP含量比較 （μmol/g，±s）

注：與正常組及假手術(shù)組比較，*P＜0.05；與模型組比較，△P＜0.05。

組別　n　ATP　ADP正常組　8　8.02±0.34　4.72±0.54假手術(shù)組　8　7.97±0.31　4.65±0.32模型組　26　2.64±0.29*　1.32±0.31*湯劑組　26　4.88±0.52△　2.47±0.26△針?biāo)幗M　26　5.87±0.37△　2.92±0.35△陽性藥組　26　5.22±0.43△　2.45±0.26△

各組腦組織液AMP、TAN及EC值比較見表2。

表1 各組腦組織液AMP、TAN及EC值比較 （μmol/g，±s）

表1 各組腦組織液AMP、TAN及EC值比較 （μmol/g，±s）

注：與正常組及假手術(shù)組比較，*P＜0.05；與模型組比較，△P＜0.05。

組別　n　AMP　TAN　EC正常組　8　1.32±0.24　13.94±0.52　0.71±0.02假手術(shù)組　8　1.35±0.26　13.85±0.47　0.68±0.04模型組　26　4.67±0.41*　8.16±0.28*　0.35±0.04*湯劑組　26　3.38±0.52△　9.35±0.52△　0.47±0.01△針?biāo)幗M　26　2.84±0.38△　9.97±0.37△　0.55±0.03△陽性藥組　26　3.52±0.44△　9.41±0.44△　0.48±0.02△

4 討 論

腦中風(fēng)又分成缺血性中風(fēng)和出血性中風(fēng)［2］。研究發(fā)現(xiàn)，能量代謝障礙通常和腦缺血損傷存在密切關(guān)系。腦缺血導(dǎo)致能量代謝異常主要因腦缺血、能量被耗竭所致［3，4］。其中一些因素會(huì)導(dǎo)致神經(jīng)細(xì)胞能量耗竭，另一些因素則能讓細(xì)胞存活，在一定積極干預(yù)下可完全恢復(fù)。實(shí)踐表明，針刺、中藥等均是有效干預(yù)手段，可減輕腦缺血損傷，改善能量代謝異常。

通過造模成功大鼠實(shí)施不同干預(yù)方法，干預(yù)后和模型組相比，針?biāo)幗M、湯劑組、陽性藥組腦組織中的ATP、ADP、TAN及EC含量均得到顯著提升，并可使AMP的含量降低。而湯劑組、針?biāo)幗M、陽性藥間無明顯差異，針?biāo)幗M略高于兩者?？芍鞲深A(yù)方法均在一定程度上可改善大鼠腦組織中腺苷酸系統(tǒng)代謝水平，主要表現(xiàn)為ATP、ADP、AMP含量上變化，以及TAN、EC值的調(diào)節(jié)效用。

［1］ 武削，黃偉青，文銳玲，等.改良二血管阻斷加低血巧法制作大鼠全腦缺血再灌注模型［J］.中國現(xiàn)代藥物應(yīng)用，2012，6（17）：4-5.

［2］ 劉亞明，郭繼龍，劉必巧，等.中藥地龍的活性成分及藥理作用研究進(jìn)展［J］.山西中醫(yī)，2011，27 （3）：44-45.

［3］ 邱勇波，劉錦，武飛.黃芪化學(xué)成分及藥理作用研究進(jìn)展［J］.中國療養(yǎng)醫(yī)學(xué)，2011，20（5）：435-436.

［4］ 張義，任玉蘭，王興麗，等.現(xiàn)代針灸治療中風(fēng)偏疲選穴處方規(guī)律研究［J］.遼寧中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào)，2012，14（9）；61-64.

［Abstract］Objective：To study the effect of acupuncture combined with Buyang Huanwu Decoction on brain energy metabolism of ischemic stroke rats. Method： 120 healthy SD rats were taken as the study object. 8 rats were selected as the normal group and 8 rats were selected as the sham operation group randomly. The rest rats were divided into the model group，decoction group， combination of acupuncture and Chinese herbs group and positive medicine group after models established by the four vessel occlusion method， with 26 rats in each group. The normal group， the sham operation group and the model group were given normal saline. The decoction group were given Buyang Huanwu Decoction. Combination of acupuncture and Chinese herbs group were treated with acupuncture combined with Buyang Huanwu Decoction. The positive medicine group were treated with Naoxintong. All the group were treated for 4 weeks. Result： The content of ATP and ADP， the value of TAN and EC increased and AMP decreased in combination of acupuncture and Chinese herbs group， decoction group and positive medicine group. There was statistical significance compared with that of the model group and the sham operation group （P＜0.05）. There was no statistical significance among the former three groups（P＞0.05）. Conclusion： Acupuncture combined with Buyang Huanwu Decoction has good improvement effect on brain energy metabolism of ischemic stroke rats，with anti cerebral ischemic injury effect.

Acupuncture；Buyang Huanwu Decoction；Rat model；Ischemic stroke；Brain energy metabolism

R246.633 ［文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼］B

1004-2814（2016）07-0639-02

2014年佛山市醫(yī)學(xué)類科技公關(guān)項(xiàng)目（2014AB000562）

2016-04-13