李子華，張偉偉

(阜陽(yáng)市食品藥品檢驗(yàn)檢測(cè)中心，安徽 阜陽(yáng)　236015)

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高效液相色譜法測(cè)定傷風(fēng)停膠囊中橙皮苷的含量

李子華，張偉偉

(阜陽(yáng)市食品藥品檢驗(yàn)檢測(cè)中心，安徽 阜陽(yáng)236015)

摘要：目的建立測(cè)定傷風(fēng)停膠囊中橙皮苷含量的高效液相色譜(HPLC)法。方法采用Waters C18柱(5 μm，150 mm×4.6 mm)，流動(dòng)相為乙腈-0.1%磷酸水溶液(18∶82)，流速：1.0 mL·min-1，檢測(cè)波長(zhǎng)283 nm。結(jié)果橙皮苷在9.58～95.76 mg·L-1范圍內(nèi)，其峰面積與濃度呈良好的線(xiàn)性關(guān)系Y=0.231 9X-0.021 7，R=0.999 9，回收率為99.2%，RSD為0.60%。結(jié)論該方法結(jié)果準(zhǔn)確，重現(xiàn)性好，可用于測(cè)定傷風(fēng)停膠囊中橙皮苷的含量。

關(guān)鍵詞：色譜法,高壓液相;橙皮苷;回收率

傷風(fēng)停膠囊用于外表風(fēng)寒，惡寒發(fā)熱，頭痛，閉塞等見(jiàn)上述證候者。處方中有麻黃、荊芥、白芷、蒼術(shù)、陳皮、甘草等中藥材，其中陳皮中主要成分橙皮苷為二氫黃酮類(lèi)化合物，具有理氣健脾、燥濕化痰、抗炎，抗病毒等多種藥理作用[1-2]，本文通過(guò)HPLC法測(cè)定該藥中橙皮苷的含量，經(jīng)方法學(xué)考察，結(jié)果比較滿(mǎn)意。

1　儀器與試藥

1.1儀器Thermo UItiMate3000高效液相色譜儀，DAD3000檢測(cè)器，變色龍7.2軟件工作站，梅特勒XPE205DR電子天平(0.01 mg)，ELMA-E100H超聲清洗儀。

1.2試藥橙皮苷對(duì)照品(中國(guó)藥品生物制品檢定所，批號(hào)110721-201115，含量：95.3%)；傷風(fēng)停膠囊(規(guī)格：標(biāo)示裝量每粒裝0.35 g，批號(hào)：WXGA1517,WXGA1410,WXJA1324)；甲醇為色譜純，水為純化水，磷酸為分析純。

2　方法與結(jié)果

2.1色譜條件與系統(tǒng)適用性實(shí)驗(yàn)Waters C18柱(5 μm，4.6 mm×150 mm)色譜柱；流動(dòng)相乙腈-0.1%磷酸水溶液(18∶82)，流速：1.0 mL·min-1；檢測(cè)波長(zhǎng)：283 nm柱溫30℃，進(jìn)樣量10 μL。理論板數(shù)按橙皮苷計(jì)不低于3 000，橙皮苷保留時(shí)間約為16.7 min。

2.2對(duì)照品溶液的制備精密稱(chēng)取橙皮苷對(duì)照品25.12 mg置25 mL量瓶中加甲醇使其溶解并稀釋至刻度，搖勻，制成0.9576 g·L-1的溶液作為儲(chǔ)備液。

2.3供試品溶液的制備取樣品20粒，傾出內(nèi)容物，精密稱(chēng)取裝量差異項(xiàng)的內(nèi)容物約1 g精密加入甲醇50 mL超聲30 min使溶解，放冷，用甲醇補(bǔ)足損失的重量，搖勻，濾過(guò)，即得。

2.4陰性對(duì)照溶液的制備按處方和制法制備不含橙皮苷的陰性樣品，再按制備供試品溶液同法制備陰性對(duì)照溶液。

2.5專(zhuān)屬性試驗(yàn)分別取對(duì)照品溶液，供試品和陰性對(duì)照溶液分別注入液相色譜儀，記錄色譜圖。樣品與對(duì)照品在同一保留時(shí)間有相同的峰，陰性對(duì)照溶液無(wú)相應(yīng)的峰，表明陰性對(duì)照溶液對(duì)測(cè)定無(wú)干擾(圖1)。

2.6線(xiàn)性關(guān)系考察精密量取2.2項(xiàng)下的對(duì)照品儲(chǔ)備液1 mL分別置100、50、25、20、10 mL量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻。取上述5個(gè)濃度的對(duì)照品溶液10ul分別注入液相色譜儀，測(cè)定峰面積，濃度(X)對(duì)峰面積(Y)進(jìn)行線(xiàn)性回歸，橙皮苷的回歸方程為Y=0.231 9X-0.021 7，R=0.999 9。 橙皮苷在9.58～95.76 mg·L-1范圍內(nèi)峰面積與濃度線(xiàn)性關(guān)系良好。

A.對(duì)照品 tR=16.767

B.樣品 tR=16.773

C.陰性對(duì)照溶液 圖1　HPLC色譜圖

2.7精密度試驗(yàn)取對(duì)照品溶液，按相同的色譜條件，連續(xù)進(jìn)樣5次，按峰面積算結(jié)果橙皮苷RSD為0.71%，精密度良好。

2.8重復(fù)性試驗(yàn)取同一批號(hào)(批號(hào)：WXGA1517)樣品6份分別按2.3項(xiàng)制備供試品溶液，分別進(jìn)樣6次，測(cè)定峰面積，結(jié)果橙皮苷含量分別為：2.05、2.10、2.08、2.09、2.06、2.09 mg·g-1，RSD為0.93%，重復(fù)性良好。

2.9穩(wěn)定性試驗(yàn)取同一批號(hào)(批號(hào)：WXGA1517)供試品溶液，分別在0、2、6、8、24 h進(jìn)樣測(cè)定峰面積，結(jié)果RSD為1.1%，表明供試品溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定。

表1　回收率測(cè)定結(jié)果

表2　樣品含量測(cè)定結(jié)果(mg/粒)

2.10回收率試驗(yàn)取樣品適量9份(約相當(dāng)橙皮苷1 mg)(批號(hào)：WXGA15172含量為0.73 mg/片)置50 mL量瓶中，分別加2.2對(duì)照品儲(chǔ)備液各1.7、2.0、2.5 mL，用流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，濾過(guò)，按色譜條件測(cè)定其含量，計(jì)算回收率，見(jiàn)表1。

2.11樣品測(cè)定按2.2項(xiàng)制備供試品及對(duì)照品溶液，各取10 μL進(jìn)入液相色譜儀，按外標(biāo)法以峰面積計(jì)算含量。見(jiàn)表2。

3　討論

在流動(dòng)相選用上查閱相關(guān)文獻(xiàn)[3]并試用了甲醇-水-醋酸(35∶61∶4)和乙腈-0.1%磷酸(21∶79)，甲醇-水-醋酸(35∶61∶4)有前拖尾現(xiàn)象，峰型不理想，柱效低，可能與該品種其他成分干擾有關(guān)，有待分析。綜合考慮本文選乙腈-0.1%磷酸水溶液(18∶82)作為流動(dòng)相保留時(shí)間穩(wěn)定，無(wú)拖尾，柱效高。

在測(cè)定波長(zhǎng)的選擇上采用DAD光譜掃描，發(fā)現(xiàn)在283nm有最大吸收，，與文獻(xiàn)[4-6]報(bào)道一致，選擇283作為測(cè)定波長(zhǎng)。

樣品提取[7-8]選用甲醇-水(68∶22)，乙醇-水(68∶22)及甲醇的采用超聲15、20和30 min處理，發(fā)現(xiàn)在30 min甲醇提取含量更高。

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doi:10.3969/j.issn.1009-6469.2016.07.017

(收稿日期：2016-03-08，修回日期：2016-05-11)

Determination of hesperidin in Shangfengting Capsules by HPLC

LI Zihua,ZHANG Weiwei

(FoodandDrugInspectionandTestingCenter,Fuyang,Anhui236015,China)

Abstract:ObjectiveTo establish an HPLC method for the determination of hesperidin in Shangfengting Capsules.MethodsWaters C18column (5 μm，150 mm× 4.6 mm)was adopted with mobile phase of acetonitrile -0.1% phosphoric acid(18∶82).The flow rate was 1.0 mL· min-1,and the detection wavelength was 283 nm.ResultsHesperidin had a good linear relationship in the range between 9.58 mg·L-1and 95.76 mg·L-1.The coefficient of recovery was 99.2% and RSD was 0.60%.ConclusionThe method is accurate,reproducible and can be used to determine the content of hesperidin in Shangfengting capsules.

Key words:Chromatography,high pressure liquid;Hesperidin;Retrieving rate