高權(quán)利，蘭天馳，李彥明，張　靖，劉　陽，趙　力，熊偉曼

(漢中市動(dòng)物疾病預(yù)防控制中心，陜西 漢中723000)

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試驗(yàn)研究

不同類型豬瘟疫苗不同劑量的免疫比對試驗(yàn)研究

高權(quán)利，蘭天馳，李彥明，張靖，劉陽，趙力，熊偉曼

(漢中市動(dòng)物疾病預(yù)防控制中心，陜西 漢中723000)

為研究不同來源、不同劑量和不同生產(chǎn)工藝的豬瘟疫苗免疫仔豬后抗體效價(jià)之間的區(qū)別,本研究采用正向間接血凝試驗(yàn)(IHA)對某規(guī)?；i場進(jìn)行豬瘟疫苗免疫檢測和分析。結(jié)果表明：不同來源相同劑量的豬瘟疫苗免疫仔豬抗體效價(jià)差別不明顯；豬瘟細(xì)胞苗和豬瘟脾淋苗相同免疫劑量比對效果不顯著；仔豬抗體水平和免疫劑量呈正相關(guān)，增加免疫劑量可以很好的提高免疫效果；豬瘟母源抗體效價(jià)隨著仔豬日齡的增長而呈逐漸下降的趨勢；23日齡仔豬母源抗體效價(jià)合格率達(dá)到100%，抗體效價(jià)均值8.9log2，29日齡合格率為80%，抗體效價(jià)均值6.9 log2，所以考慮群體免疫合格率和抗體效價(jià)均值，仔豬豬瘟疫苗應(yīng)該在29日齡左右進(jìn)行首免。

豬瘟疫苗；細(xì)胞膜；脾淋苗；免疫劑量；抗體水平

豬瘟(Swine fever，Hog cholera)是世界范圍內(nèi)最重要的病毒性疾病,是由黃病毒科(Flaviviridae)瘟病毒屬(Pestvirus)的豬瘟病毒引起的一種急性、熱性傳染病,俗稱豬霍亂。該病以發(fā)病急、高熱稽留、組織器官出血性病灶和脾梗死為特征性病變，腸系膜的壞死性潰瘍見于亞急性和慢性病例。豬瘟被OIE列為A類傳染病，我國將其列為一類傳染病。目前，我國對豬瘟疫病采取以疫苗免疫為主的綜合防控措施，雖然顯著降低了發(fā)病率和死亡率，但是仍然不能很好的控制豬瘟疫病。

疫苗質(zhì)量、免疫程序以及母源抗體等因素是影響豬瘟疫苗免疫效果的關(guān)鍵因素。本實(shí)驗(yàn)采用正向間接血凝試驗(yàn)(IHA)方法，分別對不同廠家生產(chǎn)的疫苗、不同生產(chǎn)工藝和不同的免疫劑量誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生抗體水平的消長規(guī)律進(jìn)行研究，為合理免疫和防控豬瘟提供科學(xué)依據(jù)。

1　材料與方法

1.1試驗(yàn)用疫苗

采用不同生產(chǎn)工藝不同生產(chǎn)廠家的疫苗進(jìn)行比對。豬瘟脾淋苗a，由國內(nèi)某一生物制品公司生產(chǎn)，豬瘟脾淋苗b和豬瘟細(xì)胞苗c由國內(nèi)另外一生物制品公司生產(chǎn)。

1.2主要試劑

豬瘟間接血凝抗體檢測試劑盒購自中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院蘭州獸醫(yī)研究所(抗原、陽性血清、陰性血清、稀釋液批號：2013113005)

1.3試驗(yàn)分組

試驗(yàn)在漢中市兩個(gè)中型豬場(場A、場B)開展。場A開展豬瘟脾淋苗a和豬瘟脾淋苗b的比對，場B開展豬瘟脾淋苗a和豬瘟細(xì)胞苗c的比對。每個(gè)場選取40頭健康狀況良好、體重基本一致、未經(jīng)豬瘟疫苗免疫的仔豬，分為2個(gè)組，場A為第一組，場B為第二組，每組4欄，每欄仔豬10～12頭。為了避免因母源抗體不同引起的免疫抗體效價(jià)的差異，每欄的仔豬均來自同一窩母豬。

1.4免疫日齡

場A：在38日齡進(jìn)行首免；場B：在23日齡進(jìn)行首免。

1.5免疫劑量

場A用豬瘟脾淋苗a和豬瘟脾淋苗b進(jìn)行免疫，場B用豬瘟脾淋苗a和豬瘟細(xì)胞苗c進(jìn)行免疫。見表1。

表1　試驗(yàn)動(dòng)物分組與疫苗注射劑量

1.5血樣采集

共采血五次，第一次采血在首免當(dāng)天，查明仔豬的母源抗體情況；首免后的第14 d、第21 d、第28 d分別采血，第28 d采血后進(jìn)行第二次免疫，二免后第21 d進(jìn)行第五次采血，主要檢測免疫抗體效價(jià)。

1.6試驗(yàn)方法

試驗(yàn)方法采用豬瘟正向間接血凝抗體檢測方法，待檢血清使用前經(jīng)56℃水浴滅活30 min，在96孔110°V型醫(yī)用血凝板上先加入稀釋液50 μL，將待檢血清50 μL分別加入1～6排的第1孔中，與稀釋液混勻后，吸取50 μL，加入第2孔中依次做倍比稀釋至第10孔，第10孔混勻后吸取50 μL棄掉；在血凝板的第7排加陽性血清50 μL，倍比稀釋至第10孔，混勻后從該孔吸取50 μL棄掉；在血凝板的第8排第一孔加陰性血清，倍比稀釋至第3孔，混勻后棄掉50 μL，第8排的5～7孔為稀釋液對照，每孔僅加入50 μL稀釋液。血清稀釋孔和稀釋液對照孔加血凝抗原25 μL/孔。微型振蕩器振蕩2～3 min或用手依次四邊輕拍，直至血球分布均勻。封膜板封板，室溫下靜止2～3 h判定結(jié)果。以呈現(xiàn)50%紅細(xì)胞凝集為該血清的間接血凝抗體效價(jià)。

2　結(jié)果

2.1仔豬母源抗體消長規(guī)律

新生仔豬未做任何免疫,分別檢測23、29、38日齡仔豬血清中豬瘟抗體(表2)。從表2可以看出，23日齡所有仔豬的母源抗體均達(dá)到保護(hù)水平，抗體效價(jià)合格率100%(30/30)抗體效價(jià)均值8.9 log2,29日齡下降到80%(8/10)，抗體效價(jià)均值6.9 log2，38日齡下降到58%(28/48)抗體效價(jià)均值6.4 log2。23日齡仔豬的高母源抗體效價(jià)比例最大，達(dá)到93.3(28/30),到29日齡時(shí)，迅速下降到60%(18/30)，到38日齡時(shí)下降到35.4%(17/48)。

表2　仔豬母源抗體效價(jià)

2.2不同免疫劑量免疫仔豬的抗體效果比較

不同來源的豬瘟脾淋疫苗不同免疫劑量免疫仔豬的抗體效果比較,從表3第一組可知，通過表面數(shù)據(jù)分析1頭份的豬瘟脾淋苗b免疫的豬群三次免疫抗體效價(jià)高于1頭份豬瘟脾淋苗a免疫豬群三次免疫的抗體效價(jià),經(jīng)過統(tǒng)計(jì)學(xué)T檢驗(yàn)得出三次抗體效價(jià)差別沒有顯著意義(P>0.05)；2頭份的豬瘟脾淋苗b免疫豬群產(chǎn)生的抗體均值和2頭份豬瘟脾淋苗a免疫豬群產(chǎn)生的抗體均值差別不大。2頭份豬瘟脾淋苗a、b免疫豬群的效果要明顯好于1頭份豬瘟脾淋苗a、b免疫豬群的效果(P>0.01),說明2頭份的疫苗免疫效果高于1頭份在統(tǒng)計(jì)學(xué)上是成立的，應(yīng)該廣泛應(yīng)用于實(shí)踐中。

表3　場A不同類型和劑量豬瘟疫苗免疫仔豬抗體檢測結(jié)果

2.3不同生產(chǎn)工藝的豬瘟疫苗相同劑量、不同劑量免疫效果比較

通過表4第二組數(shù)據(jù)得知，豬瘟細(xì)胞苗和豬瘟脾淋苗相同免疫劑量比對效果不明顯(P>0.05)； 2頭份豬瘟脾淋苗A、細(xì)胞苗C免疫豬群產(chǎn)生的抗體效果明顯好于1頭份豬瘟淋苗A、細(xì)胞苗C免疫豬群產(chǎn)生的抗體效果(P<0.01)，說明2頭份免疫劑量產(chǎn)生的抗體效價(jià)要明顯好于1頭份免疫產(chǎn)生的抗體效價(jià)。

表4　場B不同類型和劑量豬瘟疫苗免疫仔豬抗體檢測結(jié)果

4　討論

4.1雖然疫苗來自兩個(gè)不同的生產(chǎn)廠家，由不同的生產(chǎn)工藝生產(chǎn)，但是注射后應(yīng)急反應(yīng)都很小，局部無腫脹，沒有仔豬死亡現(xiàn)象。

4.2雖然不同來源相同免疫劑量的豬瘟疫苗免疫豬群產(chǎn)生的抗體效果會有所不同，但是隨著科學(xué)技術(shù)不斷進(jìn)步，行業(yè)信息不斷交流，同時(shí)國家對生物制品的管理越來越嚴(yán)格，這種差距會越來越小。

4.3主動(dòng)免疫的抗體效價(jià)與免疫劑量在一定范圍內(nèi)呈正相關(guān)，隨著免疫劑量的增加抗體水平相應(yīng)增加，且差異明顯，但是劑量不能過大，過大劑量的免疫可能造成免疫麻痹或者免疫耐受，從而影響免疫效果。另外仔豬的抗體水平與免疫次數(shù)呈正相關(guān)，增加免疫次數(shù)可以提高抗體水平，在實(shí)踐中，除了增加劑量和次數(shù)能提高抗體水平外，更重要的是增加免疫次數(shù)可提高免疫記憶，使抗體水平提高的更快、更高。

4.4通過表3可以看出豬瘟細(xì)胞苗的效果要好于豬瘟脾淋苗,但是經(jīng)過統(tǒng)計(jì)學(xué)分析這兩種不同廠家不同類型的疫苗免疫效果差異不顯著。

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Study on the Immune Comparison Test of Different Swine Vaccines at Different Doses

GAO Quan-li, LAN Tian-chi, LI Yan-ming, ZHANG Jing, LIU Yang, ZHAO Li, XIONG Wei-man

(HanzhongAnimalDiseasePreventionandControlCenter,HanzhongShaanxi723000China)

This study was conducted to evaluate the difference of antibody titer among different sources, doses and production engineering of swine fever vaccines using the method of indirect hemagglutination (IHA) to detect and analyze the swine fever vaccines in a scaled pig farm. The results showed that the difference of antibody titer of different sources and the same dose of swine fever vaccine to piglets was not obvious. The comparison effect between swine fever cell vaccine and swine fever spleen-lymph vaccine was not significant. The antibody levels of piglets was positively correlated with immune dose, which meant that increasing immune dose could commendably improve immune effect. There was a gradually decreasing trend of maternal antibody titer along with the increasing age of piglets. The acceptability of maternal antibody titer of piglets at 23 days of age was 100 %, and the average value of antibody titer was 8.9 log2; and the acceptability of maternal antibody titer of piglets at 29 days of age was 80 %, and the average value of antibody titer was 6.9 log2. Therefore, comprehensive evaluation of the immune acceptability and the average value of antibody titer suggested that the swine fever vaccine of piglets should be firstly immunized at about 29 days of age.

Swine fever vaccine; cell vaccine; spleen-lymph vaccine; immune dose; antibody level

1004-6704(2016)04-0001-03

2016-05-18

高權(quán)利(1962- ),男，陜西長安人，本科，高級畜牧師，從事畜牧獸醫(yī)技術(shù)推廣工作。

S 852.65+1

A