曲　哲，劉　佩，姚　園

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MMP-9在心肌缺血再灌注中的作用和機(jī)制研究

曲哲，劉佩，姚園

武漢大學(xué)人民醫(yī)院(湖北武漢 430060)，E-mail：yinh74@126.com

摘要：目的探討血清基質(zhì)金屬蛋白酶-9(MMP-9)在心肌缺血再灌注中的表達(dá)和作用機(jī)制。方法建立大鼠急性心肌缺血再灌注模型，構(gòu)建MMP-9 siRNA慢病毒，并分為對(duì)照組、缺血再灌注(I/R)組、I/R+control-siRNA組、 I/R+MMP-9-siRNA組。觀(guān)察并記錄術(shù)后28 d各組大鼠生存情況，Western Blot 檢測(cè)在大鼠 I/R術(shù)后1 d，7 d，14 d，28 d心肌中MMP-9的表達(dá)；M型超聲評(píng)價(jià)各組大鼠心功能改變；Real time PCR法檢測(cè)干擾素-γ(IFN-γ)、 白介素-6(IL-6)、腫瘤壞死因子-α(TNF-α)的變化。結(jié)果I/R+ MMP-9 siRNA組大鼠生存率達(dá)80%，生存率顯著提高，與I/R組比較，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。I/R組和I/R+control-siRNA組左室收縮末期內(nèi)徑(LVESD)、左室舒張末期內(nèi)徑(LVEDD)以及左心室質(zhì)量指數(shù)(LVMI)增加(P<0.05)，對(duì)I/R組大鼠進(jìn)行MMP-9 siRNA干預(yù)后，可見(jiàn)3個(gè)指標(biāo)減少，與I/R組比較，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。I/R術(shù)后，MMP-9蛋白表達(dá)明顯增加，與術(shù)后1 d比較，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。當(dāng)缺血再灌注時(shí)IFN-γ、IL-6、TNF-α急劇增加(P<0.05)，MMP-9 siRNA干預(yù)后，可見(jiàn)IFN-γ、IL-6、TNF-α不同程度的減低，與I/R組大鼠比較，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。結(jié)論以MMP-9 siRNA作為靶標(biāo)可減輕缺血再灌注損傷和心室重構(gòu)，改善心室功能。

關(guān)鍵詞：心肌缺血再灌注；基質(zhì)金屬蛋白酶-9；siRNA；炎性因子

急性心肌梗死(AMI)是臨床上很常見(jiàn)的急危重癥，隨著現(xiàn)代生活節(jié)奏的加快，飲食習(xí)慣的改變以及人口老齡化和社會(huì)、心理等因素的影響，目前我國(guó)急性心肌梗死的發(fā)病率高達(dá)45/10萬(wàn)～55/10萬(wàn)[1-2]。急性心肌梗死可導(dǎo)致較長(zhǎng)時(shí)間心肌組織缺血，當(dāng)重新恢復(fù)血液灌流時(shí)，其造成冠脈流量下降，收縮功能降低，血管反應(yīng)性改變，進(jìn)而造成更為明顯和嚴(yán)重的再灌注損傷和心肌功能障礙，稱(chēng)為心肌缺血再灌注損傷(myocardial ischemia reperfusion injury，MIRI)[3]。MIRI過(guò)程包括細(xì)胞外基質(zhì)的重構(gòu)，使得動(dòng)脈擴(kuò)張來(lái)維持血管正常的張力。激活的駐留成纖維細(xì)胞和招募的單核/巨噬細(xì)胞釋放細(xì)胞因子和生長(zhǎng)因子影響細(xì)胞外基質(zhì)的產(chǎn)生和降解。細(xì)胞外基質(zhì)的降解組分進(jìn)一步招募更多的炎性細(xì)胞到損傷組織，其中基質(zhì)金屬蛋白酶(matrix metallo proteinases，MMPs)是一組依賴(lài)于鋅離子的以降解細(xì)胞外基質(zhì)成分作為底物的蛋白水解酶，心肌細(xì)胞、心肌成纖維細(xì)胞和巨噬細(xì)胞均能分泌MMPs[4-5]。本研究擬通過(guò)心肌缺血再灌注大鼠模型心肌MMP-9的表達(dá)，分析其在缺血再灌注損傷中的作用和機(jī)制，為將MMP-9作為診斷、治療和評(píng)估預(yù)后的生物標(biāo)記物提供依據(jù)。

1材料與方法

1.1材料與儀器PVDF膜購(gòu)自Pall Life Sciences公司，Western blot相關(guān)化學(xué)試劑購(gòu)自上海碧云天生物技術(shù)有限公司，ECL試劑購(gòu)自Amersham Biosciences公司，兔抗鼠 MMP9單抗，羊抗兔辣根過(guò)氧化物酶(HRP)標(biāo)記IgG二抗購(gòu)自美國(guó)Cell signaling公司。RNA提取試劑盒，反轉(zhuǎn)錄試劑盒，lipo2000試劑購(gòu)自美國(guó)Invitrogen公司。手術(shù)器械和顯微鏡購(gòu)自上海醫(yī)用儀器廠(chǎng)。酶標(biāo)儀購(gòu)自美國(guó)BD公司。DNA擴(kuò)增儀購(gòu)自美國(guó)PE Gene Amp PCR System 2400。其他常用試劑購(gòu)自上海生工生物有限公司。

1.2實(shí)驗(yàn)動(dòng)物選取清潔級(jí) Wistar 大鼠80只，雄性，鼠齡6周～8周，體重 230 g±20 g。由本院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。嚴(yán)格遵守?zé)o特殊病原菌(SPF)要求分籠飼養(yǎng)。本研究經(jīng)醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)批準(zhǔn)進(jìn)行。

1.3方法

1.3.1動(dòng)物分組實(shí)驗(yàn)動(dòng)物常規(guī)適應(yīng)性飼養(yǎng)1周后進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。取同批次同周齡的大鼠按照體重標(biāo)記后，以隨機(jī)數(shù)字表法將大鼠隨機(jī)分為4組，每組20只。 對(duì)照組； 缺血再灌注(I/R)組； I/R+control-siRNA組；I/R+MMP-9-siRNA組。

1.3.2大鼠急性心肌缺血再灌注模型麻醉后，將大鼠仰臥位固定四肢于操作臺(tái)上。胸前區(qū)脫毛，手術(shù)區(qū)消毒，經(jīng)口明視下氣管插管，呼吸機(jī)輔助呼吸(潮氣量4 mL 、呼吸頻率80 次/min)。經(jīng)胸骨左側(cè)第四肋間開(kāi)口，鈍性分離皮下肌肉，暴露心臟。以7-0 尼龍線(xiàn)穿過(guò)左心耳下緣(1～2)mm 處的2/3 心肌層，結(jié)扎左側(cè)冠脈，實(shí)驗(yàn)過(guò)程中心電圖實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)，以大鼠心肌顏色變白且心電圖ST 段持續(xù)弓背抬高(>1/2 R波)呈單峰曲線(xiàn)作為模型成功標(biāo)志。結(jié)扎45 min后，去除塑料管，撤除結(jié)扎線(xiàn)。以心肌恢復(fù)紅潤(rùn)且ST 段下降作為再灌注模型成功標(biāo)志。

1.3.3MMP-9 siRNA慢病毒構(gòu)建及包裝針對(duì)基質(zhì)金屬蛋白酶8靶基因設(shè)計(jì)siRNA序列，序列由Santa Cruz合成，序列號(hào)sc-35950，由3個(gè)靶向特異性的含20～25堿基的siRNA構(gòu)成；control siRNA是非靶向20～25 nt siRNA，序列號(hào) sc-37007。合成小發(fā)卡RNA(short hairpin RNA，siRNA)結(jié)構(gòu)的DNA，與經(jīng)AgeΙ和EcoRΙ酶切的pSIL-RFP連接、轉(zhuǎn)化大腸桿菌感受態(tài)細(xì)胞，構(gòu)建成攜帶MMP-9-siRNA慢病毒質(zhì)粒載體(pSIL-RFP/MMP9-siRNA)，PCR及測(cè)序鑒定后，Western blot篩選出攜帶最佳siRNA的慢病毒質(zhì)粒載體，并利用慢病毒包裝質(zhì)粒(pHelper1.0和pHelper2.0)將其制備成MMP8-siRNA慢病毒，并測(cè)定病毒滴度為1×1010pfu/L。PCR和DNA測(cè)序證實(shí)合成的含基質(zhì)金屬蛋白酶8短發(fā)卡RNA慢病毒載體寡核苷酸鏈正確插入pSIL-RFP載體，表明實(shí)驗(yàn)成功構(gòu)建基質(zhì)金屬蛋白酶8的RNA干擾慢病毒表達(dá)載體。

1.3.4Western blot檢測(cè)MMP-9蛋白表達(dá)變化Western Blot 檢測(cè)在大鼠 I/R術(shù)后1 d，7 d，14 d，28 d心肌中MMP-9的表達(dá)。取心肌提取蛋白：加裂解液，在冰上裂解并研磨15 min～30 min，5 s × 4次超聲破碎細(xì)胞，4 ℃離心15 min，轉(zhuǎn)移上清至新的Ep 管中，蛋白定量后于-20℃保存，用于Western blot實(shí)驗(yàn)。分離蛋白利用10% SDS-PAGE電泳，并將膠用半干轉(zhuǎn)膜法轉(zhuǎn)移至PVDF膜，去除非特異性背景利用室溫，5% 脫脂奶粉作用，2 h。分別加入一抗1∶1 000 稀釋的HPV16 E7單抗，搖床，4℃，過(guò)夜，PBST洗滌，室溫，避光條件下加入1∶2 000羊抗兔二抗，孵育30 min，PBST洗滌，化學(xué)發(fā)光劑顯色1 min，X片曝光成像，觀(guān)察結(jié)果。利用蛋白圖像處理系統(tǒng)軟件和Quantity one軟件分別掃描X膠片和條帶密度測(cè)定。分別重復(fù)實(shí)驗(yàn)四次，統(tǒng)計(jì)分析。

1.3.5各組大鼠形態(tài)學(xué)和生存狀態(tài)分析觀(guān)察各組大鼠形態(tài)學(xué)變化，記錄大鼠生存狀況，并于術(shù)后28 d記錄各組大鼠生存率。

1.3.6評(píng)價(jià)各組大鼠I/R術(shù)后心功能改變分別于術(shù)后28 d利用M型超聲評(píng)價(jià)各組大鼠I/R術(shù)后心功能改變，左心室質(zhì)量指數(shù)，心室收縮及舒張內(nèi)徑。仰臥位固定實(shí)驗(yàn)大鼠，右手持15L8超聲探頭，將超聲探頭置于大鼠胸骨旁，取胸骨旁左室短軸乳頭肌水平切面，獲得清晰2D圖像后，轉(zhuǎn)換M型超聲心動(dòng)圖，轉(zhuǎn)動(dòng)軌跡球，測(cè)量左室舒張末內(nèi)徑(LVEDD)和左室收縮末內(nèi)徑(LVESD)，并根據(jù)公式計(jì)算左心室質(zhì)量指數(shù)。

1.3.7Real-time PCR檢測(cè)大鼠干擾素-γ(IFN-γ)、白介素-6(IL-6)、TNF-α表達(dá)變化依據(jù)基因序列合成引物，引物合成由上海英駿生物技術(shù)有限公司完成(見(jiàn)表1)。采用Trizol試劑提取各組心肌細(xì)胞，根據(jù)試劑盒說(shuō)明，進(jìn)行DNA反轉(zhuǎn)錄合成。對(duì)目的基因進(jìn)行Real-time PCR檢測(cè)。反應(yīng)條件：55℃ 1 min，92 ℃ 30 s，58℃ 45 s，72 ℃ 35 s，共進(jìn)行35個(gè)循環(huán)。進(jìn)行數(shù)據(jù)收集，利用PCR反應(yīng)儀軟件，將GAPDH為參照，根據(jù)熒光定量，計(jì)算出所有樣品以及標(biāo)準(zhǔn)品的起始循環(huán)數(shù)(CT)，以標(biāo)準(zhǔn)品CT值為依據(jù)，繪制出標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)，再根據(jù)2-△Ct法進(jìn)行半定量分析。

表1　引物序列

2結(jié)果

2.1各組大鼠大體觀(guān)察和生存率分析對(duì)照組大鼠仍保持正常狀態(tài)，皮毛柔順光滑，發(fā)育正常，飲食、精神狀況正常，反應(yīng)靈敏；缺血再灌注(I/R)組大鼠于術(shù)后出現(xiàn)精神萎靡不振，反應(yīng)遲緩，毛發(fā)稀疏光澤度減少，飲食不佳，且出現(xiàn)發(fā)紺以及肢端水腫；I/R+control-siRNA組大鼠狀態(tài)類(lèi)似于缺血再灌注組大鼠；而I/R+ MMP-9 siRNA組可見(jiàn)MMP-9 siRNA干預(yù)后，大鼠飲食恢復(fù)較好，精神狀況、活動(dòng)狀況隨著干預(yù)時(shí)間的延長(zhǎng)而轉(zhuǎn)好，皮毛較對(duì)照組光滑，且稀疏程度減少。I/R+MMP-9 siRNA組大鼠生存率達(dá)80%，生存率顯著提高，與I/R組比較，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。詳見(jiàn)表2。

表2　各組大鼠生存率分析

2.2MMP-9siRNA對(duì)I/R大鼠術(shù)后心功能改變的影響利用M型超聲評(píng)價(jià)在術(shù)后28 d對(duì)各組大鼠心功能進(jìn)行評(píng)估，發(fā)現(xiàn)在I/R后，心臟功能發(fā)生明顯改變，左室收縮末期內(nèi)徑和左室舒張末期內(nèi)徑在術(shù)后出現(xiàn)增加，與對(duì)照組比較差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，而control-siRNA組兩個(gè)指標(biāo)也顯著增加，與對(duì)照組比較差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)，當(dāng)對(duì)I/R組大鼠進(jìn)行MMP-9siRNA干預(yù)后，可見(jiàn)LVESD和LVEDD出現(xiàn)減小，與I/R組比較，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。同樣，左心室質(zhì)量指數(shù)(LVMI)出現(xiàn)與LVESD和LVEDD相似的變化，即I/R組和control-siRNA組顯著增加，與對(duì)照組比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；而經(jīng)MMP-9siRNA干預(yù)后，可見(jiàn)降低，與I/R組比較，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，說(shuō)明I/R后心功能出現(xiàn)顯著降低，而經(jīng)MMP-9- siRNA干預(yù)可顯著改善心功能指標(biāo)。詳見(jiàn)表3。

表3　MMP-9siRNA干預(yù)后對(duì)I/R大鼠心功能的影響(±s)

2.3MMP-9在I/R大鼠心肌中的表達(dá)變化提取心肌組織蛋白，利用Western Blot 檢測(cè)在大鼠心肌中 I/R術(shù)后1 d，7 d，14 d，28 d MMP-9的表達(dá)變化。在大鼠心肌中 I/R術(shù)后，MMP-9蛋白表達(dá)明顯增加，術(shù)后14 d和28 d表達(dá)增加明顯，與術(shù)后1 d比較，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05或P<0.01)，說(shuō)明心肌組織中MMP-9蛋白的表達(dá)在缺血再灌后隨著時(shí)間的延長(zhǎng)而增加(見(jiàn)圖1、圖2)。

圖1　MMP-9在I/R大鼠心肌中的表達(dá)變化

注：與術(shù)后比較，*P<0.05，**P<0.01

2.4MMP-9對(duì)I/R大鼠炎性因子表達(dá)的影響進(jìn)一步利用Real time PCR法檢測(cè)干擾MMP-9表達(dá)對(duì)I/R大鼠炎性因子表達(dá)的影響。當(dāng)缺血再灌注時(shí)IFN-γ、IL-6、TNF-α急劇增加，與對(duì)照組比較，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，MMP-9- siRNA干預(yù)后，可見(jiàn)IFN-γ、IL-6、TNF-α不同程度的減低，與I/R組大鼠比較，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。詳見(jiàn)圖3～圖5。

注：與對(duì)照組比較，*P<0.05；與I/R組比較，#P<0.05。

注：與對(duì)照組比較，*P<0.05；與I/R組比較，#P<0.05。

注：與對(duì)照組比較，*P<0.05；與I/R組比較，#P<0.05。

3討論

心肌缺血再灌注損傷，可出現(xiàn)一系列治療后病情惡化現(xiàn)象，尤其表現(xiàn)在急性心肌梗死經(jīng)PCI治療后，可以表現(xiàn)為心功能不全、嚴(yán)重心律失常、心源性休克、心功能衰竭、心源性猝死等。心肌缺血再灌注損傷可進(jìn)一步發(fā)生心臟重構(gòu)，甚至引起心力衰竭、心臟破裂等嚴(yán)重并發(fā)癥[6-8]。 心肌缺血再灌注損傷發(fā)生的相關(guān)機(jī)制尚未完全闡明，同時(shí)如何減輕心肌缺血再灌注損傷也成為目前醫(yī)學(xué)界研究熱點(diǎn)之一[9]。關(guān)于MIRI發(fā)生機(jī)制的研究眾多，目前主流有三個(gè)學(xué)說(shuō)，包括白細(xì)胞損傷學(xué)說(shuō)、鈣離子學(xué)說(shuō)、自由基損傷學(xué)說(shuō)，由炎癥反應(yīng)，鈣離子的參與，以及細(xì)胞損傷壞死等造成自由基損傷，從而引起觸發(fā)級(jí)聯(lián)放大式效應(yīng)，引起一系列病理生理過(guò)程[10-12]。

眾多基質(zhì)金屬蛋白酶家族的表達(dá)和活性均有所變化，例如在心肌梗死中可見(jiàn)到MMP-2的含量增加，而其活性也明顯提高，并證明其中發(fā)揮重要病理作用。有實(shí)驗(yàn)表明，在動(dòng)物心肌梗死模型以及心肌梗死發(fā)生左室重構(gòu)的病人中，可以見(jiàn)到MMP-1、MMP-2、MMP-3的表達(dá)增加，活性亦有所增強(qiáng)。研究發(fā)現(xiàn)，MMP-1表達(dá)水平在高血壓心肌肥厚組與非肥厚組進(jìn)行比較明顯降低，而且MMP-1活性在心肌肥厚的高血壓病病人中降低的更明顯[13]。本研究證實(shí)，在I/R損傷動(dòng)物模型中，MMP-9的表達(dá)增加，且隨著損傷的時(shí)間延長(zhǎng)而增加更加明顯。MMP-9的表達(dá)增加，大鼠死亡率也明顯增加，經(jīng)MMP-9siRNA干預(yù)后，可見(jiàn)大鼠精神狀態(tài)轉(zhuǎn)好、飲食恢復(fù)較好，活動(dòng)能力增強(qiáng)，而死亡率與I/R組比較有明顯減少。

細(xì)胞外基質(zhì)ECM的合成與降解保持動(dòng)態(tài)平衡，而在研究中證實(shí)基質(zhì)金屬蛋白酶家族和/或 TIMP 表達(dá)和活性改變，平衡被打破，ECM 過(guò)度沉積過(guò)多，導(dǎo)致心肌間質(zhì)纖維化和血管重塑，血管周?chē)w維化，因此使心室心肌順應(yīng)性進(jìn)一步下降，心肌收縮功能下降，導(dǎo)致心臟衰竭的發(fā)生[14]。本研究結(jié)果證實(shí)，缺血再灌注大鼠心臟功能發(fā)生明顯改變，左室收縮末期內(nèi)徑和左室舒張末期內(nèi)徑在缺血再灌注術(shù)后出現(xiàn)增加，當(dāng)對(duì)I/R組大鼠進(jìn)行MMP-9- siRNA干預(yù)后，可見(jiàn)左室收縮末期內(nèi)徑和左室舒張末期內(nèi)徑出現(xiàn)減小，而代表心肌功能改變的左室質(zhì)量指數(shù)顯著增加，結(jié)果與以往研究一致，說(shuō)明缺血再灌注心功能出現(xiàn)顯著降低。但經(jīng)MMP-9- siRNA干預(yù)可顯著改善心功能指標(biāo)。

心肌損傷后炎癥以及免疫應(yīng)答均參與其中，因此可在心肌缺血再灌注損傷過(guò)程中發(fā)揮作用。炎癥過(guò)程中巨噬細(xì)胞可通過(guò)吞噬壞死細(xì)胞以及組織碎片，或直接分泌細(xì)胞因子、生長(zhǎng)因子等調(diào)節(jié)其他細(xì)胞參與免疫應(yīng)答以及心肌缺血再灌注損傷的調(diào)節(jié)，再膠原合成、分泌、瘢痕形成、炎癥發(fā)生等?；|(zhì)金屬蛋白酶家族以及組織型基質(zhì)金屬蛋白酶抑制劑也主要作用在細(xì)胞外基質(zhì)，參與合成分泌炎性因子等作用，而炎性細(xì)胞因子分泌增加，促進(jìn)炎癥發(fā)生，導(dǎo)致細(xì)胞外基質(zhì)的大量損失[15-16]。本研究證實(shí)當(dāng)缺血再灌注時(shí)IFN-γ、IL-6、TNF-α急劇增加，MMP-9- siRNA干預(yù)后，可顯著抑制IFN-γ、IL-6、TNF-α的分泌，說(shuō)明干預(yù)MMP-9有利于減輕心肌缺血再灌注引起的炎癥反應(yīng)。

本研究證實(shí)以MMP-9為靶點(diǎn)，進(jìn)行 siRNA干預(yù)，可減少炎性因子分泌，減輕炎癥反應(yīng)，可能對(duì)抑制缺血再灌注的損傷，逆轉(zhuǎn)血管重構(gòu)有較好作用，為臨床預(yù)防、診治心肌缺血再灌注損傷的分子靶點(diǎn)選擇提供理論依據(jù)。

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(本文編輯王雅潔)

中圖分類(lèi)號(hào)：R542.2R285.5

文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A

doi：10.3969/j.issn.1672-1349.2016.13.014

文章編號(hào)：1672-1349(2016)13-1483-05

(收稿日期：2015-08-12)

The Effects and Mechanisms of MMP-9 on Myocardial Ischemia Reperfusion Injury

Qu Zhe，Liu Pei，Yao Yuan

Renmin Hospital of Wuhan University， Wuhan 430060，Hubei，China

Abstract：ObjectiveTo explore the expression， effects and mechanisms of matrix metallo proteinases 9(MMP-9)on myocardial ischemia reperfusion injury (MIRI).Methods Acute myocardial ischemia reperfusion rat models and MMP-9 siRNA lentivirus were established.The animals were divided into control group，ischemia reperfusion group(I/R group)，I/R+control-siRNA group，I/R+MMP-9-siRNA group.The survival rate was observed after 28 days of operation.The changes of heart function were analyzed by M type ultrasonics.MMP-9 expression in the myocardium after 1 d，7 d，14 d，28 d after operation was detected by western blot.Real-time PCR was used to detect M1 macrophage markers interferon-gamma (IFN-γ)，interleukin-6(IL-6)，tumor necrosis factor-alpha (TNF-α).Results The survival rate in I/R+MMP-9 siRNA group significantly increased compared with I/R group (P<0.05).LVESD and LVEDD in I/R group and I/R+control-siRNA group increased with significant difference compared with the control group(P<0.05).After MMP-9 siRNA treatment，LVESD and LVEDD reduced significantly compared with I/R group(P<0.05).Similar changes could be seen in left ventricular mass index(LVMI).MMP-9 protein increased significantly after 14 days and 28 days of operation (P<0.05).The levels of IFN-γ，IL-6，TNF-α increased dramatically in I/R group and reduced at different degrees after MMP-9 siRNA treatment compared with I/R group (P<0.05).Conclusion MMP-9 can participate in MIRI and ventricular remodeling.MMP-9 siRNA can reduce the cardiac injury and improve ventricular function.

Key words：myocardial ischemia reperfusion injury；matrix metallo proteinases 9；siRNA；inflammatory cytokines