汪　佳，安　峰，申葉春，謝麗娟，王鐘華

(河北北方學(xué)院附屬第一醫(yī)院，河北 張家口 075061)

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Id-1和VEGF在涎腺腺樣囊性癌中的表達(dá)及臨床意義

汪佳，安峰，申葉春，謝麗娟，王鐘華

(河北北方學(xué)院附屬第一醫(yī)院，河北 張家口 075061)

[摘要]目的探討DNA結(jié)合分化抑制蛋白-1(Id-1)和血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(VEGF)在涎腺腺樣囊性癌中的表達(dá)及與腫瘤侵襲、轉(zhuǎn)移的關(guān)系。方法采用免疫組織化學(xué)方法檢測(cè)Id-1和VEGF在60例涎腺腺樣囊性癌組織與癌旁正常組織中的表達(dá)情況，分析二者的表達(dá)與涎腺腺樣囊性癌臨床病理特征的關(guān)系及二者表達(dá)的相關(guān)性。結(jié)果涎腺腺樣囊性癌組織中Id-1和VEGF陽(yáng)性表達(dá)率均明顯高于癌旁正常組織(P均<0.05)；有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、肺轉(zhuǎn)移者Id-1和VEGF陽(yáng)性表達(dá)率高于無(wú)轉(zhuǎn)移者(P均<0.05)，Ⅲ+Ⅳ期者高于Ⅰ+Ⅱ期者(P<0.05)，中低分化者明顯高于高分化者(P<0.05)，有脈管浸潤(rùn)者明顯高于無(wú)脈管浸潤(rùn)者(P<0.05)，而不同性別、年齡及腫瘤部位患者Id-1和VEGF陽(yáng)性表達(dá)率比較差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P均>0.05)；Id-1和VEGF在涎腺腺樣囊性癌組織中的表達(dá)呈正相關(guān)(r=0.469,P<0.05)。結(jié)論Id-1和VEGF與涎腺腺樣囊性癌的侵襲、轉(zhuǎn)移密切相關(guān)，兩者可能在涎腺腺樣囊性癌的演進(jìn)中存在協(xié)同作用，相互影響。

[關(guān)鍵詞]涎腺腺樣囊性腫瘤；Id-1；VEGF；浸潤(rùn)轉(zhuǎn)移

涎腺腺樣囊性癌(salivary adenoid cystic carcinoma，SACC)系口腔涎腺上皮組織發(fā)生的惡性腫瘤，病理類型以腺癌多見(jiàn)，惡性度較高，早期即可出現(xiàn)局部蔓延或沿神經(jīng)及血管向遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移[1]。SACC組織呈侵襲性生長(zhǎng)，復(fù)發(fā)和遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移是SACC患者預(yù)后較差的重要原因，而新生血管的形成是腫瘤侵襲、轉(zhuǎn)移的基礎(chǔ)[2]。DNA結(jié)合分化抑制蛋白-1(Id-1)能促進(jìn)細(xì)胞增殖，誘導(dǎo)腫瘤血管生成，其表達(dá)沉默、缺失與乳腺癌、食管癌、子宮內(nèi)膜癌等多種惡性腫瘤的發(fā)生、進(jìn)展密切相關(guān)[3-5]。血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(VEGF)是體內(nèi)特異性極高的血管內(nèi)皮分裂原，能刺激血管內(nèi)皮細(xì)胞增殖遷移，促進(jìn)腫瘤血管形成[6]。目前，國(guó)內(nèi)關(guān)于Id-1在SACC組織表達(dá)的相關(guān)報(bào)道較少，其在SACC組織中的浸潤(rùn)轉(zhuǎn)移機(jī)制并不明確，本實(shí)驗(yàn)以Id-1和SACC的關(guān)系為中心，通過(guò)免疫組化方法檢測(cè)Id-1和VEGF在SACC組織中的表達(dá)及與臨床病理特征之間的關(guān)系，并分析二者的相關(guān)性，旨在為探索SACC發(fā)生、浸潤(rùn)、轉(zhuǎn)移的機(jī)制及精準(zhǔn)化治療提供科學(xué)依據(jù)。

1臨床資料

1.1一般資料收集2013年6月—2015年6月在我院口腔科行手術(shù)切除的60例SACC患者組織標(biāo)本，癌組織標(biāo)本取自癌灶中心處，癌旁正常組織標(biāo)本經(jīng)病理證實(shí)為正常組織。所有患者術(shù)前均未接受放化療治療，男36例，女24例；年齡39～61(52±2.7)歲；2005版WHO涎腺腺樣囊性腫瘤病理分型：篩孔型22例，實(shí)體型18例，管狀型20例；TNM分期Ⅰ+Ⅱ期33例，Ⅲ+Ⅳ期27例；小涎腺22例，大涎腺38例。

1.2試劑兔抗人單克隆濃縮型Id-1抗體、兔抗人濃縮型VEGF單克隆抗體均購(gòu)于香港abcam公司, DAB顯色試劑盒購(gòu)于武漢博士德公司。

1.3免疫組化染色方法10%福爾馬林溶液固定標(biāo)本，石蠟包埋，切片厚度為4 μm，HE染色。80 ℃烤箱烤片30 min，乙醇脫水，滅活內(nèi)源性過(guò)氧化物酶，枸櫞酸緩沖液高溫水化修復(fù)；PBS沖洗，加一抗(1∶100)、二抗(1∶200)。室溫下DAB顯色，蘇木精復(fù)染，乙醇分化、沖洗、梯度乙醇脫水，松節(jié)油透明，樹(shù)膠封片。PBS代替一抗作為陰性對(duì)照。

1.4Id-1、VEGF陽(yáng)性判定標(biāo)準(zhǔn)[7]Id-1和VEGF均以細(xì)胞質(zhì)中出現(xiàn)棕黃色顆粒為陽(yáng)性表達(dá)，根據(jù)著色細(xì)胞占視野細(xì)胞總數(shù)的百分比及著色細(xì)胞染色強(qiáng)弱評(píng)分計(jì)算總積分。著色細(xì)胞占視野細(xì)胞總數(shù)的百分比≤5%為0分，6%～25%為1分，26%～50%為2分，51%～75%為3分，> 75%為4分；細(xì)胞染色無(wú)著色為陰性計(jì)0分，細(xì)胞染色弱(+)計(jì)1分，中() 計(jì)2分，強(qiáng)() 計(jì)3分。上述2項(xiàng)積分相乘，0分為(-),1～4分為(+),5～8分為(),9～12分為(),(+)～()均視為陽(yáng)性。

1.5統(tǒng)計(jì)學(xué)方法運(yùn)用SPSS 17.0統(tǒng)計(jì)軟件統(tǒng)計(jì)并分析數(shù)據(jù)。計(jì)數(shù)資料用百分率表示，采用2檢驗(yàn)；計(jì)量資料用±s表示，相關(guān)性分析采用Spearmen檢驗(yàn)，P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2結(jié)果

2.1SACC組織和癌旁正常組織中Id-1和VEGF的表達(dá)情況Id-1和VEGF在SACC 組織和癌旁正常組織中的表達(dá)定位于細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞膜，呈棕黃色或棕褐色顆粒，見(jiàn)圖1～4。Id-1和VEGF在SACC 組織中的陽(yáng)性表達(dá)率分別為68.33%(41/60)和76.67%(46/60)，在癌旁正常組織中的陽(yáng)性表達(dá)率分別為13.33%(8/60)和16.67%(10/60)，Id-1和VEGF在SACC 組織中的陽(yáng)性表達(dá)率明顯高于癌旁正常組織(2=18.956，21.117，P均<0.05)。

2.2Id-1和VEGF表達(dá)與SACC臨床病理參數(shù)的關(guān)系有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、肺轉(zhuǎn)移者Id-1和VEGF陽(yáng)性表達(dá)率高于無(wú)轉(zhuǎn)移者(P均<0.05)，Ⅲ+Ⅳ期者高于Ⅰ+Ⅱ期者(P<0.05)，中低分化者明顯高于高分化者(P<0.05)，有脈管浸潤(rùn)者明顯高于無(wú)脈管浸潤(rùn)者(P<0.05)，而不同性別、年齡及腫瘤部位者Id-1和VEGF陽(yáng)性表達(dá)率比較差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P均>0.05)。見(jiàn)表1。

圖1　癌旁正常組織中Id-1表達(dá)情況(SP×200)

圖2　癌旁正常組織中VEGF表達(dá)情況(SP×200)

圖3　SAAC組織中Id-1表達(dá)情況(SP×200)

圖4　SAAC組織中VEGF表達(dá)情況(SP×200)

2.3SACC組織中Id-1和VEGF表達(dá)的相關(guān)性SAAC組織中Id-1和VEGF共同陽(yáng)性35例，共同陰性8例，表達(dá)一致率為71.67%(43/60)，兩者呈明顯正相關(guān)(r=0.469，P<0.05)。見(jiàn)表2。

表1　Id-1和VEGF表達(dá)與SACC臨床病理參數(shù)間的關(guān)系

表2　SACC組織中Id-1和VEGF表達(dá)的相關(guān)性　例

3討論

Id-1系螺旋-環(huán)-螺旋(HLH)轉(zhuǎn)錄因子家族重要成員，其在正常組織中呈不表達(dá)狀態(tài)或低表達(dá)，而在惡性腫瘤及體外培養(yǎng)的腫瘤細(xì)胞系中均呈高表達(dá)趨勢(shì)[8-9]。大多數(shù)HLH結(jié)構(gòu)存在一個(gè)堿性HLH因子(bHLH)與其緊密相鄰，二者相互結(jié)合形成異質(zhì)二聚體，其堿性區(qū)與目標(biāo)DNA結(jié)合，誘導(dǎo)啟動(dòng)子中的E-盒樣結(jié)構(gòu)的靶基因轉(zhuǎn)錄并整合成所謂的“E-box”DNA序列，從而調(diào)控細(xì)胞增殖分化[8]。Id-1通過(guò)與E2A結(jié)合形成特異性復(fù)合物抑制E2A活化P21，激活CDK2誘導(dǎo)Rb蛋白磷酸化，而Rb蛋白的磷酸化在腫瘤增殖中發(fā)揮重要作用，能抑制細(xì)胞分裂周期中G1/S停滯，促使細(xì)胞分裂周期順利進(jìn)行[9]。Lee等[10]報(bào)道Id-1表達(dá)上調(diào)能激活Raf-1及MAPK激酶信號(hào)傳導(dǎo)途徑，抑制細(xì)胞凋亡，參與腫瘤發(fā)生發(fā)展。

VEGF作為一種特異性極高的血管內(nèi)皮分裂原，對(duì)腫瘤血管基質(zhì)形成及腫瘤惡性生物學(xué)行為均有非常重要的影響。VEGF能促進(jìn)內(nèi)皮細(xì)胞變形、遷移，分裂和增殖，通過(guò)與相應(yīng)受體結(jié)合引起一系列信號(hào)傳導(dǎo)，釋放FGF、EGF等因子來(lái)誘導(dǎo)內(nèi)皮細(xì)胞生成新生血管[11]；此外，VEGF增加微血管通透性致血漿蛋白外滲，為腫瘤新生血管的生成提供必要的細(xì)胞外基質(zhì)，通過(guò)加速金屬蛋白酶、間質(zhì)膠原酶等蛋白的合成，促使血管間質(zhì)纖維和基底膜屏障的降解，促進(jìn)腫瘤血管生成[12]。

Ling等[13]研究發(fā)現(xiàn)，Id-1在前列腺癌組織中的異位表達(dá)可誘導(dǎo)VEGF 表達(dá)水平升高，通過(guò)應(yīng)用RNA干擾抑制Id-1的表達(dá)，發(fā)現(xiàn)VEGF 的表達(dá)水平也明顯下調(diào)。Lee等[14]研究報(bào)道Id-1在肝細(xì)胞癌組織中能通過(guò)缺氧誘導(dǎo)因子(HIF)誘導(dǎo)VEGF的活化，從而促進(jìn)癌細(xì)胞的血行轉(zhuǎn)移，但具體機(jī)制還需進(jìn)一步探討。本研究結(jié)果表明，Id-1和VEGF在SACC組織中的陽(yáng)性表達(dá)遠(yuǎn)高于正常組織，Id-1和VEGF的表達(dá)與SACC的分化程度、TNM分期、肺轉(zhuǎn)移、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和脈管浸潤(rùn)均具有相關(guān)性，且兩者在SACC組織中的表達(dá)水平呈明顯正相關(guān)。

綜上所述，Id-1的異常表達(dá)參與SACC的發(fā)生、演進(jìn)，并與血行轉(zhuǎn)移等惡性生物學(xué)行為密切相關(guān)，其誘導(dǎo)VEGF的過(guò)表達(dá)可能是促進(jìn)其浸潤(rùn)、轉(zhuǎn)移的重要途徑之一，因而對(duì)二者作用機(jī)制的深入探討將有望為SACC精準(zhǔn)化治療提供科學(xué)依據(jù)。

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[作者簡(jiǎn)介]汪佳，男，醫(yī)師，主要從事口腔頜面頭頸部腫瘤臨床研究。 [通信作者]安峰，E-mail：yfyanfen@163.com

[基金項(xiàng)目]河北省張家口市科學(xué)技術(shù)研究與發(fā)展計(jì)劃指令項(xiàng)目(11110012D)；河北北方學(xué)院自然科學(xué)面上項(xiàng)目(2013010)

doi:10.3969/j.issn.1008-8849.2016.21.002

[中圖分類號(hào)]R739.8

[文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼]A

[文章編號(hào)]1008-8849(2016)21-2286-04

[收稿日期]2016-01-10

Clinical significance of Id-1and VEGF expression in salivary adenoid cystic carcinoma

WANG Jia, AN Feng, SHEN Yechun, XIE Lijuan, WANG Zhonghua

(The First Affiliated Hospital of Hebei North University, Zhangjiakou 075061, Hebei, China)

Abstract:Objective It is to investigate the expression of DNA binding inhibitor of Differentiation-1(Id-1) and vascular endothelial growth factor (VEGF) in salivary adenoid cystic carcinoma (SACC), and approach its relationship with invasion and metastasis. Methods The expression of Id-1 and VEGF in 60 cases of SACC group and 60 cases of tumor adjacent normal tissues were detected by immunohistochemical method. The relationship between their expression and clinic pathologic features in SACC and their correlation were analyzed. Results The positive expression rates of Id-1 and VEGF protein in SACC tissues were significantly higher than those in the normal tissues (all P<0.05), those in patients with lymph node metastasis and lung metastasis were significantly higher than those without metastasis (all P<0.05), those in stage Ⅲ+Ⅳ were higher than those in Ⅰ+Ⅱ stage (all P<0.05), those with low differentiation were significantly higher than those in high differentiation (all P<0.05), those with vascular invasion group were significantly higher than those without vascular invasion (all P<0.05), but there were no significant differences with positive expression rates of Id-1 and VEGF in gender, age and tumor size (all P>0.05). There was positive correlation between the positive expression rates of Id-1 and VEGF in SACC tissues (r=0.469, P<0.05). Conclusion The expression of Id-1 and VEGF are closely correlated to the invasion and metastasis of SACC and they may both play an important role in the progression of SACC.

Key words:salivary adenoid cystic carcinoma; DNA binding inhibitor of differentiation-1; vascular endothelial growth factor; clinical significances; invasion; metastasis.