劉　平，程棟梁，羅衛(wèi)民，袁玲玲

(湖北省十堰市太和醫(yī)院(湖北醫(yī)藥學院附屬醫(yī)院),湖北 十堰 442000)

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P57kip2和AQP1在肺腺癌中的表達及其臨床意義

劉平，程棟梁，羅衛(wèi)民，袁玲玲

(湖北省十堰市太和醫(yī)院(湖北醫(yī)藥學院附屬醫(yī)院),湖北 十堰 442000)

[摘要]目的探討P57kip2和AQP1在肺腺癌組織中的表達特點及與腫瘤轉移的關系。方法采用免疫組織化學方法(SP法)檢測60例肺腺癌患者手術切除標本癌組織及癌旁正常組織中P57kip2和AQP1的表達水平，分析二者的表達與肺腺癌臨床病理特征的關系。結果在肺腺癌組織中P57kip2陽性表達率明顯低于正常肺組織(P<0．05)，AQP1陽性表達率明顯高于正常肺組織(P<0.05)；有淋巴結轉移者肺腺癌組織中P57kip2陽性表達率明顯低于無淋巴結轉移者(P<0．05)，AQP1陽性表達率明顯高于無淋巴結轉移者(P<0．05)。P57kip2和AQP1在肺腺癌中的表達呈負相關 (r=-0.47，P<0.05)。結論P57kip2和AQP1可能與肺腺癌的發(fā)生發(fā)展有關，二者聯(lián)合檢測可作為評估肺腺癌轉移與預后的指標。

[關鍵詞]肺腺癌； P57kip2 ；AQP-1

肺癌是我國最常見的一種惡性腫瘤，其自然預后差、病死率高，而淋巴結轉移和血液轉移是影響肺癌預后的重要因素。P57kip2是新發(fā)現(xiàn)的一種重要細胞周期素依賴蛋白激酶抑制因子(CKI)，與腫瘤發(fā)生發(fā)展有著密切聯(lián)系[1]。水通道蛋白1(AQP1)在血管內皮細胞和毛細血管上皮細胞中高表達，與細胞的增殖分化相關， 且在腫瘤的侵襲和轉移中發(fā)揮作用[2]。本研究通過檢測P57kip2和AQP1在肺腺癌組織和正常肺組織中的表達，探討二者與肺腺癌發(fā)生發(fā)展的關系。

1臨床資料

1.1一般資料收集2013年1月—2015年1月在我院實施肺腺癌手術的60例患者標本，患者術前均未進行放化療或中醫(yī)中藥治療；無其他部位良惡性腫瘤病史；均經(jīng)術后病檢證實為腺上皮細胞癌；癌組織標本取腫瘤中央部位的新鮮組織，癌旁正常組織標本取距離腫瘤邊緣5 cm以遠的正常肺組織，剔除病變較大且腫瘤距離肺邊緣小于5 cm者。

1.2主要試劑即用型兔抗人P57kip2單克隆抗體(福州邁新公司)； AQP1兔抗人多克隆抗體、SABC免疫組化試劑盒、DAB試劑盒(武漢博士德生物工程有限公司)；超敏即用型SP通用型免疫組織化學試劑盒、DAB顯色試盒及多聚賴氨酸(北京中山生物技術有限公司)。

1.3P57kip2和AQP1檢測方法標本經(jīng)常規(guī)甲醛固定、包埋，制作蠟塊，用于免疫組織化學染色。以已知P57kip2和AQP1表達陽性的肺組織作為陽性對照，以PBS代替一抗作為陰性對照。讀片采用雙盲法，由2位高年資病理科醫(yī)師分別閱片。每張切片隨機觀察5個高倍視野(×400)，參考文獻[3-4]方法按著色強度和陽性細胞數(shù)所占比例計分:無著色為0分,淡黃色為1 分,棕黃色為2 分,棕褐色為3分； 陽性細胞數(shù)0～5%為0 分,6%～25%為1 分,26%～50%為2分,50%以上為3分。兩項得分之和作為結果判定的最后得分，0～2分為陰性，3～4分為弱陽性，5～6分為強陽性。

2結果

2.1肺腺癌和正常肺組織中P57kip2和AQPl的表達在肺腺癌組織中，P57kip2陽性表達率低于正常肺組織(P<0.05)，AQP1陽性表達率明顯高于正常肺組織(P<0.05)，見表1。P57kip2主要表達于肺實質細胞的細胞核或胞漿；在肺腺癌組織中，AQP1大量表達于血管內皮細胞以及腫瘤細胞胞膜、胞漿；在正常肺組織中，AQP1散在表達于毛細血管內皮細胞，見圖1～4。

表1　肺腺癌與正常肺組織中P57kip2和AQP1表達情況

注：①與正常肺組織比較，P<0.05。

圖1　P57kip2在正常肺組織中的表達(IHC×400)

圖2　P57kip2在肺腺癌組織中的表達(IHC×400)

2.2P57kip2和AQPl的表達與肺腺癌臨床病理參數(shù)間的關系有淋巴結轉移者肺腺癌組織中P57kip2陽性表達率低于無淋巴結轉移者(P<0.05)，AQP1陽性表達率明顯高于無淋巴結轉移者(P<0.05)；且不同TNM分期間P57kip2和AQPl陽性表達率差異也有統(tǒng)計學意義(P均<0.05)；但不同年齡、性別、分化程度患者二者陽性表達率比較差異均無統(tǒng)計學意義(P均>0.05)。見表2。

圖3　AQP1在正常肺組織中的表達 (IHC×400)

圖4　AQP1在肺腺癌組織中的表達( IHC×400)

2.3肺腺癌組織中AQPl和P57kip2表達的相關性P57kip2和AQP1在肺腺癌中的表達呈負相關(r=-0.47，P<0.05)。見表3。

3討論

肺癌是全球病死率最高的上皮源性惡性腫瘤,每年約140萬人死于肺癌[5]。另據(jù)統(tǒng)計，肺癌的發(fā)病率和病死率均居各類惡性腫瘤第1位，我國每年約有65萬肺癌新發(fā)病例和52萬死亡病例，且肺癌患者中有80%～85%為非小細胞肺癌[6]。非小細胞肺癌中主要是鱗癌和腺癌，以往多以肺鱗癌為主，隨著肺癌發(fā)病因素、環(huán)境和社會等因素的變化，原發(fā)性肺腺癌已經(jīng)取代了鱗狀細胞癌成為肺癌最常見的組織學類型[7]。 早期診斷是降低肺癌病死率的重要手段,盡管臨床診治水平和分子生物學技術的發(fā)展對肺癌的診治起到了一定的促進作用,但是目前對于肺癌的早期診斷仍存在一定的困難，因此尋找好的肺癌預測及預后評價指標顯得尤為必要。

腫瘤細胞增殖分化和轉移是導致肺癌預后不佳的重要因素。因此，研究肺癌細胞增殖分化和轉移的規(guī)律，對于肺癌的早期診斷、治療以及預后評估都有重要的臨床意義。UICC(Union for International Cancer Control)的TNM分期系統(tǒng)是評估肺癌患者預后的最常用指標，但UICC分期僅能反映腫瘤在確診時的發(fā)展情況。實際上在同一TNM分期的肺癌患者中，有些可以存活相當一段時間而無復發(fā)或轉移，而大部分患者因腫瘤復發(fā)或轉移而預后較差。鑒于惡性腫瘤發(fā)生發(fā)展的差異性和復雜性,目前臨床上應用的一些可靠指標其應用和指導意義是有限的。因此，將TNM分期系統(tǒng)與一些分子生物學指標相結合，探究能夠影響肺癌患者預后的因素，從而進行針對性治療，無疑能使患者受益更多。

表2　 P57kip2和AQP1的表達與肺腺癌臨床病理參數(shù)關系

表3　肺腺癌組織中AQP1和P57kip2表達的相關性　　例

P57kip2與多種腫瘤的發(fā)生有密切關系。Kavanagh等[8]研究發(fā)現(xiàn)，多種腫瘤的發(fā)生發(fā)展過程中均存在P57kip2表達下降或不表達。近年來的研究也表明，P57kip2在皮膚血管瘤[1]、子宮內膜癌[3]、非小細胞肺癌、乳腺癌[9]等良惡性腫瘤中存在表達下降的現(xiàn)象，且其表達下降與腫瘤的分化程度、轉移情況等存在相關性。P57kip2表達強度越高，發(fā)生侵襲和轉移的風險越小，相對預后也越好。本研究結果顯示，P57kip2在肺腺癌組織中的表達水平明顯低于正常肺組織，且與腫瘤淋巴結轉移情況存在相關性，提示其在肺腺癌的發(fā)生和發(fā)展過程中起重要作用，并可能與腫瘤的侵襲轉移及預后相關。通過對P57kip2低表達的肺腺癌進行一定的干預，促進其正常表達，可能會對腫瘤的增殖分化和侵襲轉移起到抑制作用，進而達到改善腫瘤預后的目的。

已有多項研究證實，腫瘤細胞的增殖分化與水分子的跨細胞膜轉運密切相關，為達到癌細胞迅速增殖和擴散轉移的要求，癌細胞比正常細胞更需要水分子的快速跨膜轉運[10-11]。水通道蛋白是哺乳動物細胞內廣泛分布的通道蛋白之一，目前共發(fā)現(xiàn)13種水通道蛋白，其中AQP1是研究的較深入的一種。AQP1是一個廣泛表達在心肌細胞膜和毛細血管內皮的通道蛋白[12]，其在腫瘤細胞增殖、腫瘤轉移和新生血管的生成中發(fā)揮重要作用，并影響腫瘤的分化和患者的預后[13]；AQP1表達陽性的腫瘤細胞其遷移能力、運動特性等均高于AQP1表達陰性的腫瘤細胞，且前者具有更強的侵襲性，可能與AQP1表達的上調導致出入細胞的水分增多有關[14-15]。本研究結果顯示AQP1在肺腺癌組織中的表達水平明顯高于正常肺組織，且有淋巴結轉移者肺腺癌組織中AQP1陽性表達率高于無淋巴結轉移者。提示AQP1在肺腺癌的發(fā)生和進展過程中可能發(fā)揮著重要的作用。目前已經(jīng)證實重金屬化合物、乙酰唑胺、托吡酯等在動物實驗中能有效調節(jié)水通道蛋白的表達[16]，研究和應用AQP1調節(jié)劑有望達到改善肺癌患者預后的效果。

目前P57kip2和AQP1與腫瘤的相關性均受到學者的重視，但P57kip2和AQP1表達的相關性尚缺乏研究，本研究應用Spearman 等級相關分析二者之間表達的相關性，結果顯示P57kip2和AQP1在肺腺癌中的表達呈明顯負相關。推測在肺腺癌發(fā)生發(fā)展過程中，P57kip2的低表達使其對AQP1的抑制作用減弱，AQP1表達明顯增多，致使腺癌細胞大量增殖，促進了腫瘤的發(fā)生發(fā)展。當然，由于樣本量的限制，上述機制尚需重復實驗進一步論證。

綜上所述， P57kip2和AQP1在肺腺癌發(fā)生、侵襲轉移過程中具有一定作用，通過聯(lián)合檢測二者在肺腺癌中的表達可以為肺腺癌的治療和預后評估帶來新的理念。AQP1抑制劑的臨床研究可能為肺癌的綜合治療提供一種新的方向。

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[作者簡介]劉平，女，碩士，主要從事腫瘤的基礎和臨床病理研究。 [通信作者]程棟梁，E-mail：chengdonglp@163.com

[基金項目]湖北省教育廳科研項目(B2015477)

doi:10.3969/j.issn.1008-8849.2016.21.004

[中圖分類號]R734.2

[文獻標識碼]A

[文章編號]1008-8849(2016)21-2293-04

[收稿日期]2015-12-10

Expression of aquaporin-1 and P57kip2in pulmonary adenocarcinoma and their clinical significance

LIU Ping, CHENG Dongliang, LUO Weimin, YUAN Lingling

(Shiyan Taihe Hospital, Shiyan 442000, Hubei, China)

Abstract:Objective It is to investigate the expression characteristics of P57kip2 and aquaporin-1(AQP1) in adenocarcinoma of lung and those correlation with tumor metastasis. Methods Immunohistochemical method (SP method) was used to detect the expression of P57kip2and AQP1 in 60 cases of adenocarcinoma tissue and the normal tissue of the adenocarcinoma patients. The relationship between the expression of P57kip2, AQP1 and the clinicopathological characteristics of lung adenocarcinoma was analyzed. Results The expression positive rate of P57kip2in adenocarcinoma tissue was significantly lower than that in normal tissue, and the expression positive rate of AQP1 in adenocarcinoma tissue was significantly higher than that in normal tissue, there were significant difference (all P<0.05). The expression positive rate of P57kip2in adenocarcinoma tissue with lymph node metastasis was significantly lower than that without lymph node metastasis, and the expression positive rate of AQP1 in adenocarcinoma tissue with lymph node metastasis was significantly higher than that without lymph node metastasis, there were significant difference (all P<0.05). There was a negative correlation between the expression of P57kip2and AQP1 in adenocarcinoma tissue (r=-0.47, P<0.05). Conclusion The low express of P57kip2and high express of AQP1 may be associated with the genesis and the development of human adenocarcinoma of lung. The combined detection of AQP1 and P57kip2may be used in assessing the metastasis and predicting the clinical prognosis of adenocarcinoma.

Key words:adenocarcinoma of lung; P57kip2; aquaporin-1