尹立輝　武術(shù)杰　　　劉亞亮　　　溫娜　王麗蘭　王雪松

(長春大學(xué),長春，130012)　　　(吉林省技秾種業(yè)有限公司)　　　　　(中邦園林股份有限公司)

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多倍體萱草的離體快繁技術(shù)1)

尹立輝武術(shù)杰劉亞亮溫娜王麗蘭王雪松

(長春大學(xué),長春，130012)(吉林省技秾種業(yè)有限公司)(中邦園林股份有限公司)

摘要以多倍體萱草的嫩葉、生長點(diǎn)、腋芽、花蕾、花瓣和花莖作外植體進(jìn)行離體快繁技術(shù)研究。結(jié)果表明：以幼嫩的花蕾和花瓣為外植體最為適宜；以MS+6-BA 0.5 mg/L+NAA 0.2 mg/L+2,4-D 0.7 mg/L為最適誘導(dǎo)培養(yǎng)基，誘導(dǎo)分化率可達(dá)74%以上；以MS+6-BA 2.0 mg/L+NAA 0.2 mg/L為最適繼代增殖培養(yǎng)基，增殖系數(shù)可達(dá)5.8；以MS+6-BA 1.0 mg/L+NAA 0.2 mg/L+IBA 0.02 mg/L+馬鈴薯20 g/L為壯苗培養(yǎng)基。培養(yǎng)1～2周后轉(zhuǎn)入MS+NAA 0.04 mg/L的生根培養(yǎng)基中，其平均根長、根長勢等最為理想，生根率達(dá)100%，且移栽后成活率高，生長健壯。

關(guān)鍵詞多倍體萱草；花蕾；花瓣；離體快繁

多倍體萱草，百合科萱草屬。花色鮮艷，園林中多用于花境或路旁栽植，是優(yōu)良的園林地被植物。但其自然分蘗繁殖的速度慢，遠(yuǎn)不能滿足商品化生產(chǎn)的需要。而利用組培快繁技術(shù)，可以極大地提高萱草的繁殖數(shù)量，加快繁殖速度，實(shí)現(xiàn)規(guī)?；a(chǎn)。目前已有一些關(guān)于萱草組培快繁的研究，張潔茹、畢曉穎、蘭麗婷[1-4]等對(duì)誘導(dǎo)培養(yǎng)、增殖培養(yǎng)、生根培養(yǎng)、移栽等過程進(jìn)行了研究，但由于萱草品種間差異性大、特異性強(qiáng)，因此結(jié)果不盡相同。不同學(xué)者研究的不同萱草品種、不同外植體的培養(yǎng)方法和培養(yǎng)基配方都存在較大差異[5-7]，因此，開展多倍體萱草組培快繁研究具有重要價(jià)值。筆者對(duì)多倍體萱草從外植體選取部位至煉苗移栽進(jìn)行了系統(tǒng)的研究，為其規(guī)?；a(chǎn)提供了依據(jù)。

1材料與方法

于長春公園選取成年、健壯、無病菌的植株移栽于長春大學(xué)溫室過渡培養(yǎng)備用。各階段培養(yǎng)以MS為基礎(chǔ)培養(yǎng)基，附加不同質(zhì)量濃度的6-BA、IBA、NAA、2，4-D、蔗糖(30g/L)，瓊脂(9g/L)等，pH=5.8。所有培養(yǎng)條件均為溫度(25±2)℃、光照強(qiáng)度1 500～2 000lx、光照時(shí)間12h/d。

外植體的建立：取多倍體萱草的嫩葉、生長點(diǎn)、腋芽、花蕾、花瓣、花莖為外植體，洗衣粉液泡洗后，用自來水沖洗1～2h；然后在75%酒精中浸泡10s后，用無菌水沖洗；再轉(zhuǎn)入0.1%的升汞(加1～2滴吐溫)液中浸泡12min后，用無菌水沖洗，以備接種。

誘導(dǎo)培養(yǎng)：將外植體接種于誘導(dǎo)培養(yǎng)基上，每種外植體接種40瓶，每瓶4株，培養(yǎng)期間觀察萌芽及生長狀況。出愈率=出現(xiàn)愈傷組織外植體數(shù)量÷接種外植體數(shù)量×100%；誘導(dǎo)分化率=已分化的外植體數(shù)量÷接種外植體數(shù)量×100%；污染率=污染的外植體數(shù)量÷接種外植體數(shù)量×100%；褐變率=褐變外植體數(shù)量÷接種外植體數(shù)量×100%；增殖倍數(shù)=繼代后芽苗數(shù)量÷繼代前芽苗數(shù)量；生根率=生根的組培苗數(shù)量÷接種組培苗數(shù)量×100%。

繼代培養(yǎng)：將誘導(dǎo)培養(yǎng)基上萌發(fā)的生長良好、健壯的嫩芽切下轉(zhuǎn)接到繼代培養(yǎng)基中培養(yǎng)。

壯苗培養(yǎng)：將瓶內(nèi)苗木轉(zhuǎn)至壯苗培養(yǎng)基中培養(yǎng)，觀察生長狀況。生根培養(yǎng)：將瓶內(nèi)苗高剪至2～3cm，轉(zhuǎn)至生根培養(yǎng)基中，觀察生根狀況及苗木生長狀況。

2結(jié)果與分析

2.1多倍體萱草誘導(dǎo)培養(yǎng)

從表1可見，將不同外植體接于同一培養(yǎng)基上，以花蕾和花瓣為外植體出愈率和誘導(dǎo)率最高，大約在1周左右開始膨大變綠，并且有淡黃綠色的愈傷組織顆粒產(chǎn)生(見圖1)。在培養(yǎng)10d時(shí)觀察，均無不定芽產(chǎn)生；在培養(yǎng)15d左右發(fā)現(xiàn)，以花瓣和花蕾為外植體在Y3培養(yǎng)基上和Y4基上有不定芽產(chǎn)生(見圖2)；且20d時(shí)在Y4培養(yǎng)基上，以花蕾和花瓣為外植體的誘導(dǎo)率均達(dá)74%以上。以花瓣為外植體的誘導(dǎo)率最高，達(dá)78%，不定芽濃綠健壯。各培養(yǎng)基中以嫩葉為外植體接種后其愈傷組織出現(xiàn)晚，且不宜誘導(dǎo)分化，褐化率最高。

表1　外植體誘導(dǎo)分化

序號(hào)外植體出愈率/%嫩葉生長點(diǎn)腋芽花蕾花瓣花莖Y181921303220Y261524423722Y3102835403931Y4256571858882Y551418253111Y682229373423

序號(hào)外植體誘導(dǎo)率/%嫩葉生長點(diǎn)腋芽花蕾花瓣花莖Y118811109Y236622014Y371920252824Y4125155747868Y5022480Y621116182212

2.2多倍體萱草繼代培養(yǎng)

將誘導(dǎo)芽剪取轉(zhuǎn)接到繼代培養(yǎng)基上，25d左右繼代一次。繼代增殖培養(yǎng)結(jié)果見表2?？梢?，NAA質(zhì)量濃度為0.1mg/L時(shí)，隨著6-BA質(zhì)量濃度的增加，增殖倍數(shù)增加；6-BA質(zhì)量濃度達(dá)2.0mg/L時(shí)，增殖倍數(shù)最大，達(dá)3.8倍。NAA質(zhì)量濃度為0.2mg/L時(shí)，隨著6-BA質(zhì)量濃度的增加，增殖倍數(shù)增加；6-BA質(zhì)量濃度達(dá)2.0mg/L時(shí)，增殖倍數(shù)最大，達(dá)5.8倍，且該增殖培養(yǎng)基中苗木生長速率快，葉較寬、濃綠，苗木健壯(見圖3)。

圖1　多倍體萱草的愈傷組織誘導(dǎo)

圖2　多倍體萱草的愈傷組織分化

培養(yǎng)基(MS)質(zhì)量濃度/mg·L-1NAA6-BA增殖倍數(shù)試管苗長勢0 0 1.2±0.2+0.11.02.8±0.2++1.53.0±0.2+++2.03.8±0.2+++2.53.5±0.2+++3.03.4±0.2+++0.21.04.2±0.2+++1.54.0±0.2+++2.05.8±0.2++++2.53.3±0.2+++3.03.0±0.2++

注：表中數(shù)值為平均值±標(biāo)準(zhǔn)差；供試樣品均為40瓶，每瓶4株；+為發(fā)育不良(根少、細(xì))，++為發(fā)育較好(根較少、細(xì)長)，+++為發(fā)育良好(根較多、粗長)，++++為發(fā)育很好(根多、粗長)；試驗(yàn)過程中出現(xiàn)少量褐化現(xiàn)象，分別在褐化的培養(yǎng)基中加入0.25%活性炭，褐化效果消除不明顯。

2.3多倍體萱草壯苗培養(yǎng)

經(jīng)過增殖培養(yǎng)，試管苗整體長勢較弱，且有玻璃化現(xiàn)象，影響移栽后的成活率，因此生根前將試管苗轉(zhuǎn)入MS+6-BA1.0mg/L+NAA0.2mg/L+IBA0.02mg/L+馬鈴薯20g/L培養(yǎng)基中進(jìn)行壯苗培養(yǎng)(見圖4)，以提高瓶苗質(zhì)量。

圖3　多倍體萱草的繼代增殖培養(yǎng)基

圖4　多倍體萱草的壯苗培養(yǎng)基

2.4多倍體萱草生根培養(yǎng)

將生長健壯，高2～3cm的無根幼苗轉(zhuǎn)入生根培養(yǎng)基中，大約1周左右開始分化出根的生長點(diǎn)，25d后的生根情況見表3?？梢姡娌菰贛S+0.04mg/LNAA培養(yǎng)基中平均根長可達(dá)7cm，生根率達(dá)100%，且根毛密集、粗長、白潤，生長健壯(見圖5)。

2.5多倍體萱草煉苗與移栽

將組培苗從培養(yǎng)瓶中取出，洗凈根部培養(yǎng)基。將根部置于盛滿水的容器中，罩上透明塑料薄膜，保持溫度和濕度，3d后清洗根部培養(yǎng)基后移栽。移栽后成活率達(dá)98%以上。

表3　不同生根培養(yǎng)基對(duì)萱草生根的影響

注：供試樣品均為40瓶，每瓶4株；++為發(fā)育較好(根較少、細(xì)長)，+++為發(fā)育良好(根較多、粗長)，++++為發(fā)育很好(根多、粗長)。

圖5　多倍體萱草的生根培養(yǎng)基

3結(jié)論與討論

以幼嫩的花蕾和花瓣為多倍體萱草最佳外植體，培養(yǎng)1周左右愈傷組織開始膨大，15d左右出現(xiàn)不定芽，大大縮短了獲得無菌幼苗的時(shí)間。最適誘導(dǎo)培養(yǎng)基為MS+NAA0.2mg/L+6-BA0.5mg/L+2,4-D0.7mg/L；最適增殖培養(yǎng)基為MS+NAA0.2mg/L+6-BA2.0mg/L；最適壯苗培養(yǎng)基為MS+6-BA1.0mg/L+NAA0.2mg/L+IBA0.02mg/L+馬鈴薯20g/L；最適生根培養(yǎng)基為MS+0.04mg/LNAA。煉苗可直接在盛滿水的容器中進(jìn)行，3d后即可移栽，套袋保濕，加強(qiáng)管理，成活率達(dá)98%。

此外，試驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)種植于不同基質(zhì)中的生根苗其長勢各不相同。栽植于草炭土中的植株長勢要明顯好于園土+草炭的基質(zhì)，即萱草適宜生長在通氣透水性好的草炭土中；但在透氣性差的園土+草炭中也能生長，只是長勢較弱。試驗(yàn)中出現(xiàn)的褐化問題還是沒有更好的辦法解決，有待于進(jìn)一步研究。

參考文獻(xiàn)

[1]張潔茹，劉曉嘉，陳麗飛，等.矮壯素對(duì)萱草組培苗生根及移栽的影響[J].東北林業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)，2014，42(7):95-99.

[2]張潔茹，劉曉嘉，陳麗飛，等.萱草優(yōu)良單株花莖離體快繁[J].東北林業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)，2014，42(2):73-77.

[3]畢曉穎，王寧.萱草花莖離體培養(yǎng)與快速繁殖[J].東北林業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)，2012，40(11):56-59，158.

[4]蘭麗婷，李沖，任爽英，等.萱草新品種組培再生體系的建立[J].東北林業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)，2011，39(4)：14-17.

[5]姜鳳英,欒紹武,吳志剛,等.多倍體萱草“金娃娃”的離體培養(yǎng)研究[J].遼寧農(nóng)業(yè)科學(xué),2007(1)：51-52.

[6]路光,王巖,涂傳煒.大花萱草—金娃娃組培苗繼代增殖因素的研究[J].北方園藝,2006(6)：139-140.

[7]王曉娟,金樑,陳家寬.大花萱草不同外植體誘導(dǎo)愈傷組織的比較研究[J].生命科學(xué)研究,2005,9(3)：242-246.

第一作者簡介：尹立輝，女，1978年11月生，長春大學(xué)園林學(xué)院，講師。E-mail：51442591@qq.com。

收稿日期：2015年5月20日。

分類號(hào)Q813.1

RapidinVitroPropagationofPolyploidHemerocallis fulva//

YinLihui,WuShujie

(ChangchunUniversity,Changchun130012,P.R.China);LiuYaliang(JilinJinongSeedIndustryLimitedCompany);WenNa,WangLilan,WangXuesong(ZhongbangGardenLimitedCompany)//JournalofNortheastForestryUniversity，2016,44(8)：41-43,67.

TheexperimentwasconductedtostudytherapidinvitropropagationofpolyploidyHemerocallis fulvawithtenderleaf,growingpoint,axillarybud,bud,petalandscapeasexplants.Theyoungbudandpetalwerethemostsuitableexplants.MS+6-BA0.5mg/L+NAA0.2mg/L+2,4-D0.7mg/Lwasthemostsuitableinducingmedium,andtheinducingdifferentiationratewas74%.MS+6-BA2.0mg/L+NAA0.2mg/Lwasthemostsuitablesubculturemedium,andproliferationcoefficientwas5.8.MS+6-BA1.0mg/L+NAA0.2mg/L+IBA0.02mg/L+Potato20g/Lwasthestrongseedlingmedium.After1-2weeks,tissuecultureseedlingwastransferredtotherootingmediumofMS+NAA0.04mg/L.Theaveragerootlengthandrootgrowthoftissuecultureseedlingswerethemostidealwiththerootingrateof100%,thesurvivalratewashigh,andthegrowthwasstrong.

KeywordsPolyploid Hemerocallis fulva; Bud; Petal; Rapid in vitro propagation

1)吉林省科學(xué)技術(shù)開發(fā)(委托)項(xiàng)目(2010220001000250)。

責(zé)任編輯：戴芳天。