李曉艷 劉超 何平有 郁宏偉/瑞普(保定)生物藥業(yè)有限公司
豬細(xì)小病毒病滅活疫苗的安全性和抗體消長規(guī)律的研究
李曉艷 劉超 何平有 郁宏偉/瑞普(保定)生物藥業(yè)有限公司
豬細(xì)小病毒病是由細(xì)小病毒科豬細(xì)小病毒(PPV)感染豬引起的胚胎感染及死亡,而母豬并不表現(xiàn)明顯癥狀的豬繁殖障礙性疾病。妊娠前期的母豬易感染,主要引起母豬流產(chǎn)、胎兒死亡、胎兒畸形、木乃伊胎、弱胎及不孕等,同時還可引起仔豬發(fā)生皮炎和腹瀉,與豬圓環(huán)病毒協(xié)同感染是導(dǎo)致斷奶仔豬多系統(tǒng)衰竭綜合癥的主要原因之一。本病目前已廣泛分布于世界各地,并呈現(xiàn)出與豬藍(lán)耳病毒、圓環(huán)病毒感染、豬偽狂犬病毒以及豬瘟病毒混合感染的嚴(yán)重態(tài)勢,給世界范圍內(nèi)的養(yǎng)豬業(yè)造成了極大的損失。
目前,對于由PPV引起的豬繁殖障礙尚缺乏有效的治療方法,唯一的防制措施就是對易感豬進行疫苗免疫。不同廠家生產(chǎn)的疫苗免疫,其免疫效果參差不齊,豬體免疫后有時出現(xiàn)發(fā)熱、食欲不振、接種部明顯紅腫塊、疫苗免疫后保護率低和疫苗持續(xù)期較短。針對目前情況,我公司對豬細(xì)小病毒病滅活疫苗的抗體消長規(guī)律和安全性研究,現(xiàn)報告如下。
(一)病毒毒株、細(xì)胞與血清
豬細(xì)小病毒RP株、ST細(xì)胞均由瑞普(保定)生物藥業(yè)有限公司經(jīng)揚州優(yōu)邦公司轉(zhuǎn)讓資源克隆獲得;犢牛血清購自Hyclone公司;豬細(xì)小病毒標(biāo)準(zhǔn)陽性血清購自美國VMRD公司;陰性血清由本公司研發(fā)中心實驗室制備并保存。
(二)參考疫苗
進口疫苗產(chǎn)地:德國,批號:20150501。
(三)試劑
胰酶購自GIBCO公司;BEI購自FLUCA公司。
(一)疫苗制備
按照“豬細(xì)小病毒病滅活疫苗規(guī)程草案”制備3批疫苗,批號分別為20150301批、20150402批和20150403批。
(二)安全性試驗
1.乳鼠安全性試驗。取3~5日齡乳鼠25只,隨機分為5組,5只/組,分別免疫3批疫苗,0.1 ml/只,觀察10 d,同時設(shè)進口疫苗對照和空白對照組。
2.仔豬安全性試驗。取4~6周齡仔豬25頭,隨機分為5組,5頭/組,其中3組分別皮下注射3批疫苗,4 ml/只,觀察21 d,同時設(shè)進口疫苗對照和空白對照組。
(三)疫苗HI抗體消長情況
取體重350 g~400 g健康豚鼠25只,隨機分為5組,5只/組,其中3組分別皮下注射3批疫苗,0.5 ml/只,并設(shè)進口疫苗對照和空白對照組,免前先心臟采血1 ml,免后每月采血,連續(xù)采血6月,分離血清后檢測HI抗體滴度。
(一)疫苗制備
采用同步接毒的方式,病毒接種劑量為培養(yǎng)液體積的1%,結(jié)果運用單克隆ST細(xì)胞培養(yǎng)純化后的PPV病毒制備的滅活疫苗其抗原含量比克隆前增加1個~2
圖1 豬細(xì)小病毒病滅活疫苗HI抗體比較
表1 豬細(xì)小病毒病滅活疫苗HI抗體檢測結(jié)
豬用滅活疫苗的安全高效和副作用小是此項研究的關(guān)鍵。病毒滴度高,細(xì)胞培養(yǎng)物的牛血清含量低,滅活劑濃度低且中和徹底是滅活疫苗研究要重點著手解決的問題。
本研究運用單克隆細(xì)胞株培養(yǎng)純化的PPV毒株,極大的提高豬細(xì)小病毒的病毒滴度,降低生產(chǎn)成本。病毒液采用新型滅活劑二乙烯亞胺(BEI)對豬細(xì)小病毒(PPV)進行滅活,通過滅活驗證以及安全性試驗。表明對PPV的滅活是徹底的、安全的,疫苗免疫乳鼠、仔豬均無不良反應(yīng),免疫豚鼠后產(chǎn)生較高的抗體水平。
本試驗將豬細(xì)小病毒病滅活疫苗接種豚鼠進行抗體消長規(guī)律的研究,在免疫后14 d全部產(chǎn)生抗體反應(yīng),免疫后60 d血清HI抗體達到高峰(1∶5 405),免疫后180 d仍可達到1∶256,與進口疫苗的對比結(jié)果顯示,3批豬細(xì)小病毒滅活疫苗均已達到同類進口疫苗標(biāo)準(zhǔn)。
(略)