陳巨清/石家莊市牧工商 楊振燕/河北蔚縣農(nóng)牧局

雞群細(xì)菌分離鑒定及藥敏試驗(yàn)案例分析

陳巨清/石家莊市牧工商 楊振燕/河北蔚縣農(nóng)牧局

大腸桿菌病和沙門氏菌病，是目前危害養(yǎng)雞業(yè)最常見(jiàn)的細(xì)菌性疫病。大腸桿菌和沙門氏菌混合感染是目前禽病流行中的主要趨勢(shì)，一旦感染死亡率較高，從而引起更為嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失。兩種細(xì)菌血清型種類較多，不同地區(qū)差別較大，不同菌株之間不產(chǎn)生交叉保護(hù)作用，極易產(chǎn)生耐藥性。本文針對(duì)山東省某一養(yǎng)殖戶發(fā)病雞群，根據(jù)臨床癥狀和剖檢病變初步診斷為大腸桿菌和沙門氏菌感染，為了進(jìn)一步確診送檢病料至實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)。

一、材料與方法

（一）材料

1.病料來(lái)源。山東某養(yǎng)殖戶雞群23日齡，出現(xiàn)死淘增加，日死淘1‰～2‰，雞群有部分雞出現(xiàn)羽毛蓬松，精神不振，拉白色稀糞。剖檢死雞80%以上出現(xiàn)心包炎、肝周炎，腸黏膜脫落，其它無(wú)明顯病變。初步診斷為大腸桿菌、沙門氏菌感染，取四只死雞送至實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行檢測(cè)。

2.材料。麥康凱培養(yǎng)基，自制藥敏片，解剖刀，解剖剪，鑷子，顯微鏡，細(xì)菌生化反應(yīng)管，37℃溫箱。

（二）方法

1.細(xì)菌分離培養(yǎng)。將送檢的4只死雞進(jìn)行剖檢，取肝臟無(wú)菌接種到麥康凱培養(yǎng)基上，經(jīng)過(guò)37℃培養(yǎng)24 h。

2.細(xì)菌形態(tài)學(xué)觀察。取在麥康凱培養(yǎng)基上培養(yǎng)24 h可疑菌落，抹片，進(jìn)行革蘭氏染色鏡檢。

3.生化試驗(yàn)。挑取疑似大腸桿菌和沙門氏菌菌落經(jīng)過(guò)純化培養(yǎng)后，用細(xì)菌生化反應(yīng)管進(jìn)行生化鑒定。

4.藥敏試驗(yàn)。將10%氨芐西林鈉、5%恩諾沙星、5%阿莫西林、10%強(qiáng)力霉素、10%氟苯尼考、10%粘桿菌素、硫酸頭孢噻呋鈉、10%林可霉素8種抗生素制成藥敏片，將被檢細(xì)菌涂布接種于普通瓊脂平板上，間隔一定距離貼上各種藥敏片，于37℃溫箱培養(yǎng)24 h，結(jié)果判斷依據(jù)《紙片法抗菌藥物敏感試驗(yàn)操作標(biāo)準(zhǔn)（第四版）》進(jìn)行。

二、結(jié)果

（一）細(xì)菌分離培養(yǎng)

麥康凱培養(yǎng)基上1#、2#、3#、4#均長(zhǎng)出米粒大小，桃紅色菌落及淡橘黃色菌落（見(jiàn)圖1）。

（二）細(xì)菌形態(tài)學(xué)觀察

挑取可疑菌落革蘭氏染色，400倍鏡檢，可見(jiàn)G-中等桿菌，疑似大腸桿菌（見(jiàn)圖2），G-短桿菌，疑似沙門氏菌（見(jiàn)圖3）。

圖1 麥康凱培養(yǎng)菌落

圖2 G-中等桿菌

圖3 G-短桿菌

（三）生化試驗(yàn)

1.挑取疑似大腸桿菌的細(xì)菌分別做枸櫞酸鹽試驗(yàn)、靛基質(zhì)試驗(yàn)、MR試驗(yàn)、VP試等生化試驗(yàn)，均符合大腸桿菌的生化特性（見(jiàn)表1）。

表1鑒定疑似大腸桿菌生化試驗(yàn)結(jié)果

2.挑取疑似沙門氏桿菌的細(xì)菌分別做色氨酸肉湯、賴氨酸、氨基酸對(duì)照、尿素、氰化鉀、氰化鉀對(duì)照、山梨醇、甘露醇、水楊苷、丙二酸鹽、ONPG等生化試驗(yàn)，均符合沙門氏桿菌的生化特性（見(jiàn)表2）。

（四）藥敏試驗(yàn)

藥敏試驗(yàn)表明：分離出的大腸桿菌、沙門氏菌對(duì)恩諾沙星、頭孢噻呋敏感，對(duì)氨芐西林鈉、粘桿菌素中敏，其它低敏或耐藥。

見(jiàn)表3，表4。

表2疑似沙門氏桿菌的生化試驗(yàn)結(jié)果

三、方案制定及效果

方案：10%氨芐西林鈉1 g兌水1.5 L水，配合10%粘桿菌素1 g兌水1.5 L水，連用四天。

效果：連用四天后，糞便明顯好轉(zhuǎn)（見(jiàn)圖4，圖5），死淘也有所下降（表5），治療結(jié)果明顯。

圖4 用藥前拉稀糞料糞

圖5 用藥后糞便正常

表3 藥敏試驗(yàn)結(jié)果

表4 判定標(biāo)準(zhǔn)

表5 用藥前后死淘情況

四、討論

1.隨著養(yǎng)殖設(shè)備的更新?lián)Q代，飼養(yǎng)技術(shù)的提高，飼養(yǎng)密度也越來(lái)越大，這對(duì)雞舍環(huán)境和生物安全要求越來(lái)越高，否則雞群極容易發(fā)生細(xì)菌感染，造成損失。

2.近年來(lái)，為了防治某些細(xì)菌感染，在飼料和治療中常盲目使用一些抗菌藥物，以致產(chǎn)生許多耐藥菌株。大腸桿菌和沙門氏菌易產(chǎn)生對(duì)抗生素的耐受性，而且多重耐藥現(xiàn)象嚴(yán)重。因此，有條件的應(yīng)做藥敏試驗(yàn)，根據(jù)藥敏試驗(yàn)結(jié)果選擇敏感藥物。

3.從藥敏試驗(yàn)結(jié)果可以看出該雞群對(duì)很多藥物產(chǎn)生耐藥性，恩諾沙星敏感，但目前屠宰企業(yè)已將氟喹諾酮類列為禁用藥，所以該病例不能使用恩諾沙星。頭孢噻呋鈉也是敏感藥物，但是雞群23日齡，使用成本較高，因此選擇10%氨芐西林鈉與10%粘桿菌素配伍使用。

4.10%氨芐西林鈉與10%粘桿菌素配伍使用，從雞只死淘情況以及糞便改善情況來(lái)看取得較好效果，10%氨芐西林鈉與10%粘桿菌素在雞上的休藥期是7 d，不會(huì)造成藥物殘留，且成本不高。