劉　莉，平智廣，詹芳芳，戚敏杰，黃　忻

(鄭州大學(xué)：1.基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院組織學(xué)與胚胎學(xué)教研室； 2.公共衛(wèi)生學(xué)院流行病與衛(wèi)生統(tǒng)計(jì)學(xué)教研室，鄭州 450001)

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CIDE B/C基因多態(tài)性與高三酰甘油血癥相關(guān)性研究*

劉莉1，平智廣2△，詹芳芳2，戚敏杰2，黃忻1

(鄭州大學(xué)：1.基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院組織學(xué)與胚胎學(xué)教研室； 2.公共衛(wèi)生學(xué)院流行病與衛(wèi)生統(tǒng)計(jì)學(xué)教研室，鄭州 450001)

[摘要]目的通過分析CIDE B/C基因多態(tài)性的人群分布特征，探明CIDE B/C基因多態(tài)性與中國河南漢族人群血三酰甘油(TG)水平的關(guān)系。方法選取528例無親緣關(guān)系研究對象，男198例，女330例，平均年齡(52.23 ±13.41)歲，以1.70 mmol/L為TG界值，將研究對象分為高三酰甘油血癥(HTG)組(181例)和正常三酰甘油組(NTG組，347例)。檢測CIDE B/C基因的7個SNP，采用SHEsis進(jìn)行基因單倍型研究，分析兩種基因的單倍型與TG的關(guān)系。結(jié)果分析顯示rs2144492、rs2281472、rs2144493位點(diǎn)與TG有關(guān)，其中rs2144492的A等位基因、rs2281472和rs2144493的C等位基因具有保護(hù)作用，攜帶上述等位基因的個體TG水平相對較低。CIDE B基因的ATCC單倍型在NTG組比例較高，具有保護(hù)作用，OR及其95%CI為0.698 (0.490～0.992)。結(jié)論CIDE B/C基因多態(tài)性及CIDE B基因的ATCC單倍型對HTG的發(fā)生風(fēng)險存在一定作用。

[關(guān)鍵詞]甘油三酯類；CIDE;基因多態(tài)性;單倍型

慢性代謝性疾病已成為影響生命質(zhì)量和增加各國財(cái)政負(fù)擔(dān)的全球性重要公共衛(wèi)生問題[1]。高三酰甘油血癥(hypertriglyceridemia，HTG)作為患病率很高的代謝異常，已成為冠心病、高血壓、2型糖尿病、非酒精性肝病等的主要危險因素之一[2]。大量研究證實(shí)，遺傳因素在HTG的發(fā)生、發(fā)展中確實(shí)起著重要作用[3-5],雖有單位點(diǎn)突變導(dǎo)致的少數(shù)病例，但大多數(shù)研究顯示HTG是由多個基因共同作用的結(jié)果。

CIDE (cell death-inducing DNA fragmentation factor 45-like effector)家族包括CIDE A、CIDE B和CIDE C[小鼠中CIDE C被稱為脂肪特異性蛋白27 (fat special protein 27,FSP27)][6]主要分布于棕色脂肪組織(brown adipose tissue,BAT)，肝臟和白色脂肪組織(white adipose tissue，WAT)[7]。該家族最初被認(rèn)為與哺乳動物的細(xì)胞凋亡有關(guān)[6,8]。近來研究發(fā)現(xiàn)CIDE蛋白在脂質(zhì)貯存、脂滴形成、脂質(zhì)分解等脂質(zhì)代謝過程中發(fā)揮重要作用，并與肥胖、糖尿病、脂肪肝等疾病的發(fā)生、發(fā)展有關(guān)[9-11]。然而，迄今為止，關(guān)于CIDE家族與血三酰甘油(triglyceride，TG)的研究主要集中在動物實(shí)驗(yàn)和細(xì)胞水平，而人群中CIDE基因多態(tài)性與TG的關(guān)系仍未被揭示。

由于HTG是多基因遺傳的復(fù)雜性疾病，發(fā)病往往為多個微效基因共同作用所致，而且單倍型致病研究是探索基因多態(tài)性與疾病關(guān)系的一個重要途徑[12]。因此，本研究將對人群CIDE B和CIDE C基因的7個多態(tài)性位點(diǎn)及單倍型與TG水平的關(guān)系進(jìn)行了分析。

1資料與方法

1.1一般資料通過現(xiàn)場橫斷面調(diào)查獲得528例無親緣關(guān)系漢族個體，其中男198例，女330例，平均年齡(52.23±13.41)歲。根據(jù)TG水平將研究對象分為HTG組(TG≥1.70 mmol/L)和正常TG組(NTG組，TG<1.70 mmol/L)[13]。HTG組181例，男62例，女119例，平均年齡(53.41±11.22)歲；NTG組347例，男136例，女211例，平均年齡(51.62±14.39)歲。兩組間性別、年齡比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，具有可比性。

1.2方法

1.2.1單核苷酸多態(tài)性(SNP)檢測所有調(diào)查對象抽取肘靜脈血2 mL，血清用于測量TG水平，白細(xì)胞用于提取DNA并檢測SNP。

表1　CIDE B和CIDE C基因7個SNP位點(diǎn)信息

*W：野生型等位基因；M：突變型等位基因。

表2　CIDE B和CIDE C基因7個SNP位點(diǎn)引物信息

表3　兩組CIDE B和CIDE C基因SNP位點(diǎn)等位基因、基因型分布

1.2.2SNP的選擇在CIDE B和CIDE C基因上分別選擇了4個和3個SNP，篩選依據(jù)為滿足下列條件之一：(1)已報道與TG或代謝異常有關(guān)；(2)具有雜合性且最小等位基因頻率(minor allele frequency，MAF)>0.05；(3) 所在基因片段能夠引起功能性改變。所選SNP位點(diǎn)的詳細(xì)信息見表1。

1.2.3基因分型采用Promega公司的基因組DNA提取試劑盒按說明書操作提取DNA，并采用瓊脂糖凝膠電泳檢測DNA質(zhì)量。采用snapshot或連接酶技術(shù)(ligase detection reaction，LDR)進(jìn)行SNP分型。引物信息見表2。

2結(jié)果

2.1兩組SNP分布特征CIDE B和CIDE C基因分型在NTG組和HTG組的分布見表3。各位點(diǎn)均滿足哈溫平衡(Hardy-Weinberg equilibrium，HWE)，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。

表4　SNP單位點(diǎn)與TG水平的Logistic回歸結(jié)果

2.2SNPs單位點(diǎn)與TG水平的關(guān)系采用Logistic回歸按加性遺傳模式對各位點(diǎn)與高TG的關(guān)系進(jìn)行分析，結(jié)果見表4。rs2144492、rs2281472、rs2144493位點(diǎn)與TG水平的關(guān)系差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，其中rs2144492的A等位基因、rs2281472和rs2144493的C等位基因具有保護(hù)作用，攜帶上述等位基因的個體TG水平相對較低。rs17222536位點(diǎn)因A等位基因頻率較低，估計(jì)誤差較大，故其OR值及其95%CI未列出。

2.3單倍型與TG的關(guān)系采用SHEsis在線軟件分別估算CIDE B、CIDE C基因SNP的連鎖不平衡系數(shù)(表5、6)，根據(jù)D′和r2可知CIDE B、CIDE C基因的SNPs位點(diǎn)存在連鎖不平衡，進(jìn)而估計(jì)各基因的單倍型及其頻率，計(jì)算相應(yīng)的頻數(shù)，整理結(jié)果見表7。CID E/B基因常見單倍型為CCTT(50.38%)、CTTT(30.78%)和ATCC(17.23%)，CIDE C基因常見單倍型為GAA(77.94%)和GCG(21.12%)。結(jié)果顯示,CIDE B基因的ATCC單倍型在組間存在差異，其在HTG組的比例較低，具有保護(hù)作用，OR及95%CI為0.698(0.490～0.992)。

表5　CIDE B 各SNP的連鎖不平衡參數(shù)

表6　CIDE C 各SNP的連鎖不平衡參數(shù)

表7　CIDEB、CIDEC單倍型組間分布頻率[n(%)]

3討論

本研究檢測了CIDE B/C基因的多態(tài)性，并分析了基因多態(tài)性、單倍型與TG水平的關(guān)系。研究發(fā)現(xiàn),rs2144492、rs2281472、rs2144493位點(diǎn)與TG水平具有統(tǒng)計(jì)學(xué)關(guān)聯(lián)，其中rs2144492的A等位基因、rs2281472和rs2144493的C等位基因具有保護(hù)作用，那么，rs2144492的G等位基因、rs2281472和rs2144493的T等位基因則是危險等位基因。此前雖未見有關(guān)多態(tài)性與HTG風(fēng)險之間的相關(guān)報道，但本研究的結(jié)果依然得到了有關(guān)CIDE B/C的功能研究的支持。

CIDE家族包括3種蛋白：CIDE A、CIDE B和CIDE C(或稱Fsp27)，其在哺乳動物中，分別主要表達(dá)于棕色脂肪、肝臟和白色脂肪[15]?？紤]到成人體內(nèi)棕色脂肪較少，因此本研究重點(diǎn)研究了CIDE B和CIDE C基因。近年研究表明，CIDE蛋白與脂質(zhì)代謝調(diào)節(jié)密切相關(guān)[16]。CIDE家族所有成員都在脂滴的聚集、融合中發(fā)揮重要作用[17-20]。研究表明CIDE B在能量儲存和消耗中發(fā)揮重要作用，CIDE B缺失小鼠表現(xiàn)出能耗升高，血漿TG水平降低，胰島素敏感性和血游離脂肪酸增加[21]。其原因是VLDL包裹TG是在CIDE B的介導(dǎo)下完成的，CIDE B可調(diào)控TG和膽固醇水平[22]。CIDE C屬脂滴相關(guān)蛋白，可抑制脂肪分解，從而導(dǎo)致TG在脂肪細(xì)胞中的積累[23]。即使在非脂肪細(xì)胞中，CIDE C依然可以在誘導(dǎo)小脂滴融合為大脂滴的過程中發(fā)揮至關(guān)重要的作用，其分泌不足可導(dǎo)致小鼠脂滴分散、脂肪分解率升高[24]。而純合子無義突變可致人體部分性脂肪代謝障礙,以及含多個小脂滴的脂肪細(xì)胞的出現(xiàn)[25]。這些結(jié)果均表明,CIDE C在脂質(zhì)代謝、能量貯存及血TG水平調(diào)節(jié)中發(fā)揮重要作用。遺憾的是，之前的研究多為動物實(shí)驗(yàn)或細(xì)胞水平的研究，尚少見CIDE B/C人群基因多態(tài)性與血TG水平之間關(guān)系的研究。因此，本研究的結(jié)果將為明確CIDE B、CIDE C基因與TG水平的關(guān)系并將相應(yīng)的遺傳因素作為防治脂質(zhì)代謝紊亂疾病的分子靶點(diǎn)提供理論依據(jù)。

雖然目前少見這7個多態(tài)性位點(diǎn)與HTG關(guān)系的研究供對比。但已有報道：PGC-1、PPAR和PLIN等重要的脂滴相關(guān)蛋白，其基因多態(tài)性均與HTG相關(guān)，而與細(xì)胞內(nèi)脂質(zhì)代謝關(guān)系密切的CIDE B/C，其與PGC-1、PPAR和PLIN等蛋白極其密切的關(guān)系亦漸漸被揭示，這些研究間接支持了本研究結(jié)果。PGC-1在將細(xì)胞質(zhì)中的TG裝配入VLDL分泌小室并促進(jìn)VLDL分泌中起著重要的作用，而該功能是通過誘導(dǎo)CIDE B行使的[26]。Kim等[23]研究發(fā)現(xiàn)在調(diào)節(jié)脂肪細(xì)胞中脂質(zhì)代謝及脂質(zhì)貯存方面舉足輕重的PPARγ2是通過誘導(dǎo)CIDE C而發(fā)揮作用的。FSP27與PLIN在調(diào)節(jié)脂肪細(xì)胞中脂滴的大小方面發(fā)揮協(xié)同作用[27]。目前，已有多項(xiàng)研究表明PGC-1[28]、PPAR[2]、PLIN[29]等的基因多態(tài)性與脂代謝有關(guān)。本研究亦證實(shí)與PGC-1、PPAR、PLIN關(guān)系密切的CIDE B/C基因多態(tài)性也與TG相關(guān)。

綜上所述，本研究通過檢測中國河南漢族人群CIDE B/C多態(tài)性并通過單位點(diǎn)和單倍型分析證實(shí)了CIDE B/C多態(tài)性與TG水平有關(guān)。另外，CIDE B/C與其他脂代謝相關(guān)基因的交互作用也值得進(jìn)一步研究。

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doi:論著·臨床研究10.3969/j.issn.1671-8348.2016.15.010

*基金項(xiàng)目：國家自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目(81001280，81202277)；河南省科技攻關(guān)項(xiàng)目(112102310198)。

作者簡介：劉莉(1977-)，副教授，碩士，主要從事慢性非傳染性疾病分子學(xué)發(fā)病機(jī)制研究?！魍ㄓ嵶髡撸珽-mail:ping_zhg@163.com。

[中圖分類號]R589.2

[文獻(xiàn)標(biāo)識碼]A

[文章編號]1671-8348(2016)15-2061-04

(收稿日期：2015-11-18修回日期：2016-01-07)

The relation between gene polymorphisms of CIDE B/C and hypertriglyceridemia*

Liu Li1,Ping Zhiguang2△,Zhan Fangfang2,Qi Minjie2,Huang Xin1

( 1.TeachingandResearchSectionofHistologyandEmbryology,BasicMedicalCollege;2.TeachingandResearchSectionofEpidemiologyandHealthStatistics,CollegeofPublicHealth,ZhengzhouUniversity,Zhengzhou,Henan450001,China)

[Abstract]ObjectiveTo determine the possible effect of CIDEB/C gene polymorphism and haplotypes on hypertriglyceridemia (HTG) in Han group.Methods528 unrelated subjects were selected (198 males,330 females) with the mean age of 52.23±13.41 years old.According to the criteria of triglyceride (TG) ≥1.70 mmol/L(150 mg/dl),181 persons were arranged into HTG (hypertriglyceridemia) group and 347 persons were in NTG(normal triglyceride) group.A total of 7 SNPs in CIDEB and CIDEC genes were detected.The relationship between these ten SNPs and TG were analyzed under additive inheritance pattern by logistic regression.SHEsis online were used to get the haplotypes and their effects on TG.Resultsrs2144492,rs2281472 and rs2144493 were associated with TG.The frequency of ATCC,haplotype of CIDEB,was higher in NTG group.OR and its 95% confidence interval was 0.698[0.490～0.992].ConclusionATCC of CIDE B/C gene polymorphism may be related to the occurrence of HTG.

[Key words]triglycerides;CIDE;gene polymorphism;haplotype