朱海振，耿　濤，李雪濤，林　盛，韓　靜，江飛龍，陳光朋，譚詩(shī)生△，陳正堂▲

(1.貴州省人民醫(yī)院腫瘤科，貴陽(yáng) 550002；2.第三軍醫(yī)大學(xué)新橋醫(yī)院全軍腫瘤研究所，重慶 400037；3.瀘州醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院腫瘤科，四川瀘州 646000)

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利用分子信標(biāo)檢測(cè)microRNA并成像肺癌干細(xì)胞的實(shí)驗(yàn)研究*

朱海振1，耿濤1，李雪濤2，林盛3，韓靜2，江飛龍2，陳光朋2，譚詩(shī)生1△，陳正堂2▲

(1.貴州省人民醫(yī)院腫瘤科，貴陽(yáng) 550002；2.第三軍醫(yī)大學(xué)新橋醫(yī)院全軍腫瘤研究所，重慶 400037；3.瀘州醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院腫瘤科，四川瀘州 646000)

[摘要]目的利用miR-155分子信標(biāo)(MB)檢測(cè)CD133+CD326+肺癌干細(xì)胞(LCSCs)中高表達(dá)的miR-155并成像肺癌干細(xì)胞。方法采用對(duì)A549細(xì)胞逆向誘導(dǎo)及紫杉醇富集的方法，通過(guò)流式細(xì)胞儀從A549細(xì)胞中分選出CD133+CD326+細(xì)胞，并對(duì)其干性進(jìn)行鑒定。以殼聚糖納米(CS)作為載體轉(zhuǎn)染miR-155 MB，激光共聚焦顯微鏡檢測(cè)miR-155 MB對(duì)LCSCs中miR-155的識(shí)別功能并成像，并采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR(qRT-PCR)進(jìn)一步驗(yàn)證。結(jié)果分選的CD133+CD326+細(xì)胞在干細(xì)胞培養(yǎng)基中成球生長(zhǎng)，干性相關(guān)基因CD133、CD326、OCT-4、Nanog表達(dá)為A549細(xì)胞的3.27、3.39、6.01、3.42倍(P<0.05)，在細(xì)胞數(shù)為1×104數(shù)量下仍具備成瘤能力。CS轉(zhuǎn)染miR-155 MB后在A549及LCSCs中均可看到較強(qiáng)的紅色熒光，以LCSCs中熒光信號(hào)最強(qiáng)(P<0.05)，且熒光信號(hào)強(qiáng)弱趨勢(shì)與qRT-PCR檢測(cè)的miR-155的表達(dá)趨勢(shì)較一致。結(jié)論利用miR-155 MB能夠檢測(cè)LCSCs中高表達(dá)的miR-155并使其成像，為監(jiān)測(cè)并發(fā)現(xiàn)肺癌干細(xì)胞提供新思路。

[關(guān)鍵詞]腫瘤干細(xì)胞；肺腫瘤；A549；分子信標(biāo)

近年來(lái)，我國(guó)肺癌發(fā)病率呈快速增長(zhǎng)趨勢(shì)[1]。目前臨床上尚缺乏特異的、敏感的肺癌早期診斷分子靶標(biāo)。腫瘤干細(xì)胞被認(rèn)為是腫瘤產(chǎn)生、發(fā)展、復(fù)發(fā)、轉(zhuǎn)移的根源,尋找肺癌干細(xì)胞有可能成為早期診斷的新突破點(diǎn)[2]。大量研究表明微小RNA(miRNA)廣泛參與了腫瘤的發(fā)生、發(fā)展、轉(zhuǎn)移等，識(shí)別肺癌干細(xì)胞相關(guān)miRNA并使之成像有可能成為肺癌早期診斷的重要策略[3]。分子信標(biāo)(MB)是一種分子內(nèi)互補(bǔ)形成發(fā)卡結(jié)構(gòu)的熒光標(biāo)記的寡核苷酸序列，是一個(gè)非常敏感的檢測(cè)DNA、RNA和miRNA的方法，已被廣泛用于基因定量分析、疾病診斷和活體成像等研究領(lǐng)域[4]。因此，本研究擬利用miR-155 MB檢測(cè)CD133+CD326+肺癌干細(xì)胞(LCSCs)中高表達(dá)的miR-155并成像LCSCs，為監(jiān)測(cè)并發(fā)現(xiàn)LCSCs提供新的理論依據(jù)。

1材料與方法

1.1材料A549肺腺癌細(xì)胞系購(gòu)自美國(guó)典型菌種保藏中心(ATCC)。選擇6周齡健康裸鼠，由第三軍醫(yī)大學(xué)新橋醫(yī)院動(dòng)物中心提供。主要試劑：PRMI-1640、DMEM/F12培養(yǎng)基購(gòu)自Hyclone公司；重組人胰島素、重組人堿性成纖維生長(zhǎng)因子(bFGF)、牛血清清蛋白(BSA)粉劑購(gòu)自美國(guó)Sigma公司；重組人表皮生長(zhǎng)因子(EGF)購(gòu)自美國(guó)Pepro Tech公司；標(biāo)準(zhǔn)胎牛血清(FBS)購(gòu)自天津?yàn)?；鼠抗人CD133-PE、CD326-FITC流式抗體購(gòu)自德國(guó)美天旎；山羊抗人CD326一抗購(gòu)自美國(guó)Santa Cruz；兔抗人CD133購(gòu)自美國(guó)abcam；逆轉(zhuǎn)錄及實(shí)時(shí)熒光定量PCR(qRT-PCR)試劑盒購(gòu)自日本 TaKaRa公司；CD133、CD326、OCT-4、Nanog引物，部分堿基經(jīng)過(guò)鎖核酸修飾的miR-155 MB，陰性對(duì)照隨機(jī)序列分子信標(biāo)(RS MB)即不和任何基因組序列結(jié)合的RS MB由上海生工合成；hsa-miR-155引物購(gòu)于廣州銳博生物公司；殼聚糖納米(CS)由四川廣漢恒宇新材料公司惠贈(zèng)。

1.2方法

1.2.1CD133+CD326+細(xì)胞的分選及培養(yǎng)CD133+CD326+細(xì)胞培養(yǎng)液DMEM/F12的配置：500 mL的DMEM/F12培養(yǎng)基內(nèi)加入2 g BSA，500 μL(50 μg/μL)重組人胰島素，500 μL(20 ng/μL)EGF，500 μL(10 ng/μL)bFGF，5 mL青霉素-鏈霉素雙抗。根據(jù)本課題組前期研究報(bào)道的分選干細(xì)胞[2]的方法，對(duì)A549細(xì)胞進(jìn)行逆向誘導(dǎo)及紫杉醇富集，富集后根據(jù)抗體說(shuō)明書(shū)，加入相對(duì)應(yīng)的鼠抗人CD133-PE和CD326-FITC流式抗體，濃度為1∶11，37 ℃水浴鍋內(nèi)孵育30 min，無(wú)菌磷酸鹽緩沖液(PBS)充分洗滌后，避光流式細(xì)胞儀上機(jī)分選，分選后置入干細(xì)胞培養(yǎng)液中培養(yǎng)并進(jìn)行形態(tài)學(xué)觀察。

1.2.2免疫熒光取成球生長(zhǎng)的CD133+CD326+細(xì)胞懸液，滴在載玻片并進(jìn)行甩片，800 r/min，離心5 min，4%的多聚甲醛固定10 min，漂洗后滴加0.1%的聚乙二醇辛基苯基醚(Triton)液，洗滌后滴加5%BSA封閉液，37 ℃孵育20 min，加入PBS稀釋的一抗兔抗人CD133和山羊抗人CD326，濃度均為1∶200，于4 ℃冰箱孵育過(guò)夜，充分漂洗后加入羊抗兔CD133-FITC及驢抗山羊CD326-CY3二抗，二抗的濃度均為1∶400，37 ℃孵育30 min，漂洗后4′,6-二脒基-2-苯基吲哚(DAPI)染細(xì)胞核，抗熒光淬滅劑封片，激光共聚焦顯微鏡觀察CD133和CD326的表達(dá)并拍照。

1.2.3干性基因檢測(cè)根據(jù)干細(xì)胞相關(guān)基因Oct-4、Nanog、CD133、CD326序列設(shè)計(jì)qRT-PCR引物，以甘油醛-3-磷酸脫氫酶(GAPDH)作為內(nèi)參，引物均由上海生工合成，序列如下：GAPDH上游5′-CCA CTC CTC CAC CTT TGA C-3′，下游5′-CCA CTC CTC CAC CTT TGA C-3′；CD326上游5′-AGT AAA AGT TTG CGG ACT GCA C-3′，下游5′-CTG GAA ATA ACC AGC ACA ACA A-3′；CD133上游5′-TCT CTA TGT GGT ACA GCC G-3′，下游5′-TGA TCC GGG TTC TTA CCT G-3′；Nanog上游5′-ATT TGC GGC CGC ATG AGT GTG GGT CTT C-3′，下游5′-CGG GAT CCT CAT ATT TCA CCT GGT GGA G-3′；Oct-4上游5′-AAG CTG CTG AAA CAG AAG AGG-3′，下游5′-ACA CGG TTC TCA ATG CTA GTC-3′。常規(guī)Trizol試劑提取A549、CD133+CD326+細(xì)胞總RNA，逆轉(zhuǎn)錄成cDNA及qRT-PCR操作均按照Takara試劑說(shuō)明書(shū)操作。每個(gè)目的基因及內(nèi)參做3個(gè)復(fù)孔。以GAPDH基因?yàn)閮?nèi)參基因，以CD133、CD326、Nanog、Oct-4作為目的基因，以A549細(xì)胞相對(duì)應(yīng)的表達(dá)量為1，計(jì)算CD133+CD326+細(xì)胞中干性相關(guān)基因的表達(dá)相對(duì)于A549細(xì)胞的倍數(shù)關(guān)系，實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次。

1.2.4裸鼠成瘤實(shí)驗(yàn)雄性裸鼠18只，分為6組，每組3只，分別注射A549細(xì)胞數(shù)目為1×104、1×105和1×106，注射CD133+CD326+細(xì)胞數(shù)目為1×103、1×104和1×105。選取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期生長(zhǎng)狀態(tài)良好且能傳代的A549及CD133+CD326+細(xì)胞，無(wú)菌PBS充分洗滌后計(jì)數(shù)細(xì)胞數(shù)目，于小鼠右下背部皮下注射相對(duì)應(yīng)數(shù)目的CD133+CD326+細(xì)胞及A549細(xì)胞，每只總體積為150 μL。隨后每3天觀察細(xì)胞成瘤情況。

1.2.5激光共聚焦檢測(cè)對(duì)miR-155的識(shí)別成像功能及熒光強(qiáng)度分析取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的A549、LCSCs種板于激光共聚焦專用培養(yǎng)皿內(nèi)，參考本課題組前期研究文獻(xiàn)[5]方法，按照WCS∶WMB質(zhì)量比為7∶1的比例將MB和CS混合，漩渦震蕩60 s，室溫靜置30 min，自組裝方法合成CS-mir-155 MB及CS-RS MB，miR-155 MB和RS MB的終濃度為200 nmol/L，37 ℃細(xì)胞培養(yǎng)箱內(nèi)孵育120 min，無(wú)菌PBS充分漂洗后加入300 μL Hoechst 33342染細(xì)胞核，37 ℃ 20 min，漂洗后加入200 μL無(wú)菌PBS，激光共聚焦顯微鏡觀察并拍照。拍照后，每個(gè)培養(yǎng)皿內(nèi)加入1 mL細(xì)胞裂解液，使細(xì)胞充分裂解。取96孔黑板，每組加入100 μL細(xì)胞裂解液，設(shè)置6個(gè)復(fù)孔，Varioskan Flash多功能酶標(biāo)儀檢測(cè)各組Cy5的熒光強(qiáng)度。

1.2.6qRT-PCR驗(yàn)證常規(guī)Trizol試劑提取A549、LCSCs總RNA， 逆轉(zhuǎn)錄成cDNA及qRT-PCR操作均按照Takara試劑說(shuō)明書(shū)操作。每個(gè)目的基因及內(nèi)參做3個(gè)復(fù)孔。以U6基因?yàn)閮?nèi)參基因，以miR-155作為目的基因，以A549細(xì)胞miR-155表達(dá)量為1，計(jì)算LCSCs中miR-155的表達(dá)相對(duì)于A549細(xì)胞的倍數(shù)關(guān)系，實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次。

2結(jié)果

2.1A549及CD133+CD326+細(xì)胞形態(tài)學(xué)觀察倒置顯微鏡下觀察到普通A549細(xì)胞為貼壁生長(zhǎng)狀態(tài)，細(xì)胞形態(tài)為多角形、梭形。分選的CD133+CD326+細(xì)胞在干細(xì)胞培養(yǎng)基中培養(yǎng)后成球形生長(zhǎng)，每個(gè)細(xì)胞球可見(jiàn)到由幾個(gè)到幾十個(gè)細(xì)胞融合而成球，細(xì)胞膜圓整，細(xì)胞質(zhì)折光度較好，見(jiàn)圖1。

A：A549細(xì)胞；B：CD133+CD326+細(xì)胞。

圖1A549細(xì)胞及CD133+CD326+細(xì)胞形態(tài)學(xué)觀察(×200)

圖2免疫熒光檢測(cè)CD133+CD326+細(xì)胞中CD133和CD326的表達(dá)(×400)

2.2免疫熒光結(jié)果分選的成球干細(xì)胞既有表達(dá)CD133的綠色熒光信號(hào)，又有表達(dá)CD326的紅色熒光信號(hào)，二者在細(xì)胞膜和細(xì)胞質(zhì)都有表達(dá)，藍(lán)色表示細(xì)胞核染色，見(jiàn)圖2。

2.3干性基因檢測(cè)結(jié)果成球生長(zhǎng)的CD133+CD326+細(xì)胞高表達(dá)干性基因CD133、CD326、OCT-4和Nanog，為普通A549細(xì)胞的3.27、3.39、6.01、3.42倍，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，分選的CD133+CD326+細(xì)胞具有干細(xì)胞特性，見(jiàn)圖3。

*:P<0.05，與A549細(xì)胞比較。

圖3qRT-PCR檢測(cè)A549及CD133+CD326+細(xì)胞中干性基因的表達(dá)

2.4裸鼠成瘤實(shí)驗(yàn)在注射皮下腫瘤細(xì)胞15 d后可看到皮下移植瘤的產(chǎn)生。CD133+CD326+細(xì)胞在細(xì)胞數(shù)為1×105的數(shù)量下可以成瘤，進(jìn)一步降低細(xì)胞數(shù)目為1×104數(shù)量下仍具備成瘤能力，1×103數(shù)量下細(xì)胞未能成瘤；而A549細(xì)胞能夠成功致瘤所需細(xì)胞數(shù)目為1×106，見(jiàn)表1。

表1　裸鼠皮下移植瘤成瘤實(shí)驗(yàn)

2.5miR-155MB對(duì)miR-155的識(shí)別成像功能檢測(cè)及qRT-PCR驗(yàn)證在有miR-155 MB存在的條件下，各組細(xì)胞均可檢測(cè)到較強(qiáng)的紅色熒光信號(hào)，大部分定位在細(xì)胞質(zhì)，少數(shù)定位在細(xì)胞核，其中LCSCs紅色熒光強(qiáng)度最強(qiáng)。而在陰性對(duì)照CS-RS MB中未檢測(cè)到明顯紅色熒光信號(hào)，見(jiàn)圖4A。 A549、LCSCs在CS轉(zhuǎn)染miR-155 MB平均熒光強(qiáng)度分別為27.78和64.64，比較差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，見(jiàn)圖4B。qRT-PCR檢測(cè)發(fā)現(xiàn)A549、LCSCs中均有miR-155的表達(dá)，LCSCs的miR-155的表達(dá)是A549細(xì)胞的2.63倍，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，見(jiàn)圖4C。在熒光強(qiáng)度分析中，LCSCs中miR-155的表達(dá)是A549細(xì)胞的2.33倍，熒光強(qiáng)弱趨勢(shì)與qRT-PCR中miR-155的表達(dá)趨勢(shì)較一致。

A：激光共聚焦檢測(cè)對(duì)miR-155的識(shí)別并成像(×800)；B：熒光強(qiáng)度分析；C：qRT-PCR檢測(cè)。*：P<0.05,與A549細(xì)胞比較。

圖4成像后熒光強(qiáng)度分析及qRT-PCR檢測(cè)miR-155的表達(dá)

3討論

目前我國(guó)肺癌發(fā)病率和病死率均居腫瘤首位，大多數(shù)患者確診時(shí)已屬ⅢB或Ⅳ期，失去了手術(shù)機(jī)會(huì)，5年生存率低于20%[6]。肺癌的早期診斷可以使患者能夠在早期得到合理地診治，大大降低治療成本及病死率，因此尋求早期診斷的生物學(xué)標(biāo)志物是提高患者存活率的關(guān)鍵，也是當(dāng)今肺癌研究的重要任務(wù)。

現(xiàn)有研究表明腫瘤干細(xì)胞是所有腫瘤產(chǎn)生、發(fā)展、復(fù)發(fā)的根源，研究發(fā)現(xiàn)多種實(shí)體瘤組織及腫瘤患者血液中存在著腫瘤干細(xì)胞，這些腫瘤干細(xì)胞是腫瘤發(fā)生、發(fā)展、浸潤(rùn)、轉(zhuǎn)移和復(fù)發(fā)的根源[7]。因此尋找肺癌干細(xì)胞有可能成為早期診斷一個(gè)新的突破點(diǎn)，為肺癌的早期診斷提供新方法[8]。如果能夠直接攜帶熒光物質(zhì)靶定肺癌干細(xì)胞，將有望達(dá)到早期診斷肺癌的目的。

CD133已被研究證實(shí)可以作為大多數(shù)實(shí)體腫瘤干細(xì)胞分離和鑒定的通用分子標(biāo)記物，其主要特點(diǎn)是在干細(xì)胞樣細(xì)胞中高表達(dá)，而在完全分化細(xì)胞中幾乎不表達(dá)；但也有研究認(rèn)為把CD133作為肺癌干細(xì)胞的分子標(biāo)記并不確切，需要聯(lián)合其他標(biāo)記才有助于肺癌干細(xì)胞的檢測(cè)，肺癌、結(jié)腸癌、乳腺癌等腫瘤干細(xì)胞中也高表達(dá)CD326分子，這些細(xì)胞特別容易引發(fā)腫瘤[9-10]。因此，本研究基于以上研究背景，根據(jù)本課題組前期采用對(duì)A549細(xì)胞逆向誘導(dǎo)及紫杉醇富集的方法，從A549細(xì)胞系中分選出CD133+CD326+細(xì)胞，發(fā)現(xiàn)其在干細(xì)胞培養(yǎng)基中呈球形，懸浮生長(zhǎng)。通過(guò)免疫熒光檢測(cè)懸浮的成球細(xì)胞均有CD133和CD326的表達(dá)，為CD133+CD326+細(xì)胞。qRT-PCR結(jié)果表明CD133+CD326+細(xì)胞高表達(dá)干細(xì)胞相關(guān)基因Oct-4、Nanog、CD133、CD326，且較普通A549細(xì)胞表達(dá)高。裸鼠成瘤實(shí)驗(yàn)表明CD133+CD326+細(xì)胞致瘤能力更強(qiáng)，具有干細(xì)胞的特征。

miRNA是一類內(nèi)源性、單鏈非編碼小分子RNA，通過(guò)調(diào)控信號(hào)通路對(duì)腫瘤細(xì)胞的發(fā)生、增殖、凋亡、侵襲等重要生物學(xué)過(guò)程發(fā)揮作用[11]。miR-155是miRNA中常見(jiàn)的一種小分子RNA，與腫瘤的增殖、凋亡、轉(zhuǎn)移、不良預(yù)后等密切相關(guān)[12]。現(xiàn)有研究表明，miR-155在肺癌組織中顯著高表達(dá)，檢測(cè)肺組織內(nèi)的miR-155表達(dá)水平能區(qū)分肺癌患者與非肺癌患者，而且肺癌組織中miR-155高表達(dá)的患者，其生存期更短[13]。表明肺癌細(xì)胞或肺癌干細(xì)胞中高表達(dá)的miR-155分子有可能成為肺癌早期診斷的分子靶標(biāo)。本研究也發(fā)現(xiàn)miR-155在分選的CD133+CD326+肺癌干細(xì)胞中高表達(dá)。

MB是一個(gè)非常敏感的檢測(cè)DNA、RNA和miRNA的方法，為通過(guò)識(shí)別基因分子并成像腫瘤細(xì)胞提供了可能。殼聚糖為一種天然陽(yáng)離子多糖，而基因分子本身帶有負(fù)電荷，二者可以通過(guò)靜電作用自組裝方式形成核殼結(jié)構(gòu)，并被廣泛用于介導(dǎo)質(zhì)粒、siRNA等基因轉(zhuǎn)染，CS已作為理想的基因載體廣泛應(yīng)用于細(xì)胞和動(dòng)物水平實(shí)驗(yàn)[14]。因此，本研究利用CS作為miR-155 MB載體，激光共聚焦檢測(cè)表明在有miR-155 MB存在的條件下，A549、LCSCs中可檢測(cè)到較強(qiáng)的紅色熒光信號(hào)，且以LCSCs紅色熒光強(qiáng)度最強(qiáng)，而陰性對(duì)照RS MB未檢測(cè)到明顯紅色熒光信號(hào)。熒光強(qiáng)度分析表明以肺癌干細(xì)胞中熒光信號(hào)最強(qiáng)，同時(shí)通過(guò)qRT-PCR進(jìn)一步檢測(cè)表明用CS轉(zhuǎn)染MB后的熒光強(qiáng)弱趨勢(shì)與qRT-PCR中miR-155的表達(dá)趨勢(shì)較一致，表明可以利用miR-155 MB通過(guò)檢測(cè)細(xì)胞高表達(dá)的miR-155并成像肺癌干細(xì)胞，可以有效地達(dá)到識(shí)別腫瘤干細(xì)胞的目的，從而為肺癌的早期診斷提供新思路、新方法。

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doi:·論著·10.3969/j.issn.1671-8348.2016.15.003

*基金項(xiàng)目：國(guó)家高技術(shù)發(fā)展研究計(jì)劃“863”項(xiàng)目(2007AA02Zl29)；國(guó)家自然科學(xué)基金面上項(xiàng)目(81071786)。

作者簡(jiǎn)介：朱海振(1984-)，住院醫(yī)師，博士，主要從事腫瘤干細(xì)胞、miRNA研究。△通訊作者，E-mail：tssh18018@126.com；▲ 共同通訊作者，E-mail：czt05@163.com。

[中圖分類號(hào)]R734.2

[文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼]A

[文章編號(hào)]1671-8348(2016)15-2036-04

(收稿日期：2015-11-15修回日期：2016-01-21)

Using molecular beacon for detecting microRNA and imaging lung cancer stem cells research*

Zhu Haizhen1,Geng Tao1,Li Xuetao2,Lin Sheng3,Han Jing2,Jiang Feilong2,ChenGuangpeng2,TanShisheng1△,ChenZhengtang2▲

(1.DepartmentofOncology,GuizhouProvincialPeople′sHospital,Guiyang,Guizhou550002,China;2.InstituteofCancer,XinqiaoHospital,ThirdMilitaryMedicalUniversity,Chongqing400037,China;3.DepartmentofOncology,theAffiliatedHospitalofLuzhouMedicalCollege,Luzhou,Sichuan646000,China)

[Abstract]ObjectiveTo detect the miR-155 in the CD133+ CD326+ cells(LCSCs) and imaging them by using the miR-155 molecular beacon (MB).MethodsA549 cells were cultured in the serum-free stem cell medium and treated by paclitaxel until new spheroids emerged;then we sorted the CD133+ CD326+ cells by flow cytometry and identified their stem characteristics.Chitosan nanoparticles(CS) were adopted to deliver the miR-155 MB.The laser confocal microscopy was used to detect and image the miR-155 in LCSCs.The miR-155 expression level was verified by quantitative Real-Time PCR (qRT-PCR).ResultsThe LCSCs formed the sphere in stem cell culture medium,the stem genes (CD133,CD326,OCT-4,Nanog) expression levels were 3.27，3.39，6.01，3.42 times higher than those of A549 cells(P<0.05).1×104 cells formed the subcutaneous transplanted tumors.The red fluorescence was detected in the A549 and LCSCs when CS transfect the miR155 MB,and the fluorescent signal of LCSCs was the highest(P<0.05).The fluorescence intensity was proximately consistent with the level of miR-155 expression determined by qRT-PCR.ConclusionUsing the miR-155 MB could detect the miR-155 in the LCSCs and image them.It might be a new idea for monitoring the lung cancer stem cell.

[Key words]neoplastic stem cell；lung neoplasms；A549;molecular beacon