李剛

【摘要】 目的 分析研究結(jié)核分枝桿菌T細(xì)胞斑點(diǎn)實(shí)驗(yàn)（T-SPOT.TB）診斷肺結(jié)核的臨床應(yīng)用價(jià)值。方法 125例疑似肺結(jié)核患者， 分別采用T-SPOT.TB、結(jié)核分枝桿菌抗體（TB-AB）和痰結(jié)核分枝桿菌DNA（TB-DNA）3種不同方法對(duì)其實(shí)施檢測(cè)， 判斷確診肺結(jié)核患者， 并對(duì)不同方法診斷肺結(jié)核的敏感性、特異性進(jìn)行比較。結(jié)果 125例患者中， 符合肺結(jié)核臨床診斷標(biāo)準(zhǔn)并確診的有101例， 其中T-SPOT.TB、TB-AB、TB-DNA診斷肺結(jié)核的敏感性分別為83.2%、52.5%、43.6%， T-SPOT.TB法敏感性高于TB-AB和TB-DNA法（P<0.05）， 其診斷肺結(jié)核的特異性分別為79.2%、62.5%、83.3%， T-SPOT.TB和TB-DNA法特異性高于TB-AB（P<0.05）。結(jié)論 T-SPOT.TB診斷肺結(jié)核的敏感性和特異性都比較高， 是診斷肺結(jié)核的有效手段。

【關(guān)鍵詞】 結(jié)核分枝桿菌T細(xì)胞斑點(diǎn)實(shí)驗(yàn)；肺結(jié)核；診斷價(jià)值

DOI：10.14163/j.cnki.11-5547/r.2016.18.030

結(jié)核病指的是以結(jié)核分枝桿菌為主的結(jié)核分枝桿菌復(fù)合群感染造成的慢性傳染性疾病[1]， 對(duì)患者的健康造成嚴(yán)重的威脅， 特別是涂陽肺結(jié)核患者， 感染性強(qiáng)， 致死率也比較高。有調(diào)查數(shù)據(jù)顯示， 我國每年因肺結(jié)核致死的患者數(shù)量達(dá)13萬人[2]， 對(duì)其進(jìn)行快速、準(zhǔn)確的診斷具有十分重要的意義， 而結(jié)核分枝桿菌的檢測(cè)是診斷肺結(jié)核的基本方法。本文抽取2014年1～12月本院收治的疑似肺結(jié)核的患者125例作為研究對(duì)象， 探討T-SPOT.TB診斷肺結(jié)核的臨床應(yīng)用價(jià)值， 現(xiàn)報(bào)告如下。

1 資料與方法

1. 1 一般資料 抽取2014年1～12月本院收治疑似肺結(jié)核的患者125例作為研究對(duì)象， 所有患者均表現(xiàn)出不同程度咳嗽、發(fā)熱、胸痛、氣促、呼吸困難、乏力等癥狀， 疑診為肺結(jié)核。其中， 男67例， 女58例， 年齡18～76歲， 平均年齡（40.4±12.1）歲。

1. 2 方法 使用真空抗凝管采集患者的新鮮外周血標(biāo)本5 ml，

2 h內(nèi)送檢， 分別行T-SPOT.TB檢測(cè)、TB-AB檢查及TB-DNA檢測(cè)。

1. 2. 1 T-SPOT.TB檢測(cè) 將血液標(biāo)本與1640培養(yǎng)液混勻， 再加入到含淋巴細(xì)胞分離液的離心管中， 經(jīng)離心分離和培養(yǎng)液洗滌后獲得外周血T淋巴細(xì)胞， 使用T-SPOT.TB試劑盒（購自北京九強(qiáng)生物科技有限公司）對(duì)標(biāo)本中的外周血單個(gè)核細(xì)胞（PBMC）進(jìn)行提取和培養(yǎng)， 并結(jié)合計(jì)算機(jī)輔助成像分析系統(tǒng)對(duì)顯色后的結(jié)果進(jìn)行閱讀。判斷標(biāo)準(zhǔn)：以陰性孔斑點(diǎn)數(shù)<5個(gè)， 且（抗原A/B的檢測(cè)孔計(jì)數(shù)-陰性孔計(jì)數(shù)）≥6個(gè)時(shí)或者當(dāng)陰性孔斑點(diǎn)數(shù)≥6個(gè)， 檢測(cè)孔斑點(diǎn)數(shù)≥2×陰性孔斑點(diǎn)數(shù)時(shí)視為陽性。

1. 2. 2 TB-AB檢查 常規(guī)離心分離獲得血清后， 使用膠體金法對(duì)結(jié)核分枝桿菌免疫球蛋白G（IgG）抗體進(jìn)行檢測(cè)， 結(jié)核分枝桿菌IgG抗體診斷試劑盒購自上海奧普生物醫(yī)藥有限公司。

1. 2. 3 TB-DNA檢測(cè) 采用無菌容器采集患者清晨的深咳膿性痰液作為痰標(biāo)本， 行TB-DNA檢測(cè)。采用熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)（PCR）法對(duì)痰標(biāo)本中的結(jié)核分枝桿菌DNA進(jìn)行檢測(cè)， 熒光定量PCR檢測(cè)試劑盒購自上?？寺∩锔呒夹g(shù)有限公司， 參照陽性質(zhì)控品、陰性質(zhì)控品以及陽性定量參考品的Ct值， 對(duì)檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行判斷。

1. 3 判定標(biāo)準(zhǔn) 分別觀察3種方法的檢測(cè)結(jié)果， 并以2001 年中華醫(yī)學(xué)會(huì)結(jié)核病學(xué)分會(huì)制定的《肺結(jié)核診斷和治療指南》為依據(jù)[3]， 判斷患者是否患肺結(jié)核：以患者同時(shí)滿足下列6項(xiàng)指標(biāo)中的任意3項(xiàng)可以確診為肺結(jié)核：①患者有典型臨床表現(xiàn)， 且經(jīng)胸部X線檢查有典型肺結(jié)核征象；②經(jīng)痰結(jié)核菌實(shí)時(shí)熒光定量檢測(cè)聯(lián)合探針檢測(cè)結(jié)果呈陽性；③經(jīng)血清抗結(jié)核抗體檢測(cè)呈陽性；④排除其他肺結(jié)核性疾病；⑤經(jīng)

抗結(jié)核治療顯示有效；⑥經(jīng)肺外組織病理檢查確認(rèn)存在結(jié)核病變。同時(shí)符合下列2項(xiàng)指標(biāo)中的任意1項(xiàng)可以確診為肺結(jié)核：①經(jīng)肺部（或支氣管）組織病理學(xué)檢查確認(rèn)有結(jié)核病變存在；②支氣管肺泡灌洗液（BALF）檢出抗酸分枝桿菌。對(duì)不同方法診斷肺結(jié)核的敏感性、特異性進(jìn)行計(jì)算。

1. 4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。計(jì)數(shù)資料以率（%）表示， 采用χ2檢驗(yàn)。P<0.05表示差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

125例患者中， 符合肺結(jié)核臨床診斷標(biāo)準(zhǔn)并確診的有101例， 其中T-SPOT.TB、TB-AB、TB-DNA診斷肺結(jié)核的敏感性分別為83.2%、52.5%、43.6%， T-SPOT.TB法敏感性高于TB-AB和TB-DNA法（P<0.05）， 其診斷肺結(jié)核的特異性分別為79.2%、62.5%、83.3%， T-SPOT.TB和TB-DNA法特異性高于TB-AB（P<0.05）。見表1。

3 討論

本文分別采用T-SPOT.TB、TB-AB和TB-DNA等3種不同方法對(duì)125例疑似肺結(jié)核的患者進(jìn)行了檢測(cè)診斷， 結(jié)果顯示， T-SPOT.TB法診斷肺結(jié)核的敏感性最強(qiáng)， 為83.2%， 較TB-AB和TB-DNA都有較大的提高， 這與T-SPOT.TB法檢測(cè)不受排菌類型與排菌量影響有關(guān)， 漏診率相對(duì)較低， 而在檢測(cè)特異性的比較上， T-SPOT.TB法和TB-DNA法的特異性相對(duì)較高， 其中， TB-DNA法能夠利用實(shí)時(shí)熒光定量PCR擴(kuò)增技術(shù)來實(shí)現(xiàn)定量檢測(cè)結(jié)核分枝桿菌的目的， 具有較高的診斷準(zhǔn)確率， 而T-SPOT.TB法則可從單細(xì)胞水平上對(duì)分泌抗體（或細(xì)胞因子）的細(xì)胞進(jìn)行檢測(cè)， 通過顯色斑點(diǎn)對(duì)結(jié)核分枝桿菌致敏的T淋巴細(xì)胞進(jìn)行特異性診斷， 還能通過顯色斑點(diǎn)數(shù)計(jì)算針對(duì)結(jié)核分枝桿菌反應(yīng)的效應(yīng)T淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)[4]。

總之， T-SPOT.TB診斷肺結(jié)核具有無創(chuàng)、操作簡(jiǎn)單、重復(fù)性強(qiáng)的優(yōu)點(diǎn)， 兼具良好的敏感性和特異性， 可以作為診斷肺結(jié)核的有效方法之一。

參考文獻(xiàn)

[1] 尹宏軍. 探析X線對(duì)肺結(jié)核診斷的臨床價(jià)值. 中國繼續(xù)醫(yī)學(xué)教育， 2015， 7（7）：193-194.

[2] 李余良. 淺談結(jié)核病臨床診斷技術(shù). 中國繼續(xù)醫(yī)學(xué)教育， 2015， 7（16）：54-55.

[3] 唐小莉， 郭晶， 林霏申. 結(jié)核抗體試驗(yàn)與TSPOT-TB試驗(yàn)診斷肺結(jié)核的臨床價(jià)值比較. 中國繼續(xù)醫(yī)學(xué)教育， 2015， 7（29）：34-36.

[4] 唐碩潤(rùn)， 梁珍. 結(jié)核酶聯(lián)免疫斑點(diǎn)試驗(yàn)結(jié)核分枝桿菌 DNA 測(cè)定和痰涂片檢測(cè)在肺結(jié)核診斷中的比較研究. 中國當(dāng)代醫(yī)藥， 2013， 20（34）：122-123.

[收稿日期：2016-01-26]