譚建寧　馬雯芳　李耀華　廣西中醫(yī)藥大學(xué)　530001　南寧市明秀東路179號(hào)

龍脷葉中氨基酸的成分分析

譚建寧馬雯芳李耀華廣西中醫(yī)藥大學(xué)530001南寧市明秀東路179號(hào)

摘要目的：對(duì)龍脷葉中氨基酸成分進(jìn)行分析。方法：采用TLC法對(duì)龍脷葉中L-谷氨酸、精氨酸、脯氨酸、亮氨酸進(jìn)行薄層色譜分析；采用日立L-8800型全自動(dòng)氨基酸分析儀分析龍脷葉中18種氨基酸。結(jié)果：龍脷葉中游離氨基酸薄層鑒別分離度好，專(zhuān)屬性強(qiáng)；龍脷葉中氨基酸總量達(dá)16.32%，其中谷氨酸含量最高（2.31%），蛋氨酸含量最低（0.06%）。結(jié)論：本法簡(jiǎn)便可行，結(jié)果準(zhǔn)確，重復(fù)性好，可用于龍脷葉的質(zhì)量研究。

關(guān)鍵詞龍脷葉；氨基酸；TLC；含量測(cè)定

龍脷葉Sauropus spatuli folius Beille為大戟科植物，主要分布在廣西、廣東、福建等地，具有清肺熱、抗菌、止咳作用，壯族民間常用于治療急性支氣管炎、上呼吸道感染、支氣管哮喘，是臨床常用的壯藥［1］。龍脷葉含有皂苷、甾體類(lèi)、氨基酸和脂肪酸等成分［2-3］。氨基酸是一種重要生物活性物質(zhì)［4］，其中組氨酸、蘇氨酸的缺乏可使小鼠對(duì)傷寒沙門(mén)氏菌的易感性增高，賴(lài)氨酸缺乏可使小鼠炭疽芽胞桿菌的抵抗力下降，而皮下注射半胱氨酸可增強(qiáng)動(dòng)物的某些非特異性免疫功能及增強(qiáng)對(duì)可產(chǎn)氣莢膜梭狀芽胞桿菌、葡萄糖球菌毒素的抵抗力［5］。氨基酸是龍脷葉的抗菌活性成分，目前對(duì)龍脷葉中氨基酸成分的研究尚未見(jiàn)報(bào)道。本實(shí)驗(yàn)對(duì)龍脷葉中L-谷氨酸、精氨酸、脯氨酸、亮氨酸進(jìn)行薄層色譜分析，并采用全自動(dòng)氨基酸分析儀測(cè)定龍脷葉中氨基酸的含量，旨為進(jìn)一步研究龍脷葉的活性成分提供實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。

1　實(shí)驗(yàn)材料

1.1儀器L-8800型全自動(dòng)氨基酸分析儀（日立）；BP211D型電子天平（德國(guó)賽多利斯公司）；CDUPT型超純水機(jī)（成都超純科技有限公司）；KQ5200B型超聲提取儀（昆山市超聲儀器有限公司）；DHG-9240A型電熱恒溫干燥箱（上海齊欣科學(xué)儀器有限公司）；FW135型中草藥粉碎機(jī)（天津市泰斯特儀器有限公司）。

1.2試藥L-谷氨酸對(duì)照品（批號(hào)：111576-200201，供鑒定用）；精氨酸對(duì)照品 （批號(hào)：140685-201305，供含量測(cè)定用）；脯氨酸對(duì)照品（批號(hào)：111659-200301，供鑒定用）；亮氨酸對(duì)照品（批號(hào)：110876-200204，供鑒定用）；龍脷葉對(duì)照藥材（批號(hào)：121623-201001，供鑒定用）；十二烷基硫酸鈉（SDS）、正丁醇、正己烷及其余試劑均為分析純，水為純凈水。

1.3藥材龍脷葉于2014年10月購(gòu)自玉林藥材批發(fā)市場(chǎng)，經(jīng)廣西中醫(yī)藥研究院嚴(yán)克儉助理研究員鑒定為大戟科植物龍脷葉 Sauropus spatuli folius Beille的干燥葉。5批龍脷葉產(chǎn)地分別為廣西靖西（批號(hào)：141001、141002），玉林（批號(hào)：141004）和梧州（批號(hào)：141003、141005）。

2　實(shí)驗(yàn)方法

2.1對(duì)照品溶液的制備分別取L-谷氨酸、脯氨酸、精氨酸、亮氨酸對(duì)照品適量，精密稱(chēng)定，加水制成每1 ml含0.50 mg的溶液，作為龍脷葉薄層色譜對(duì)照品溶液。再分別取以上各氨基酸對(duì)照品0.03～0.09 g，精密稱(chēng)定，置同一個(gè)500 ml量瓶中，加水至刻度，搖勻，備用。臨用時(shí)精密吸取2.0 ml 置10 ml量瓶中，加水至刻度，搖勻，即得。作為氨基酸成分分析的對(duì)照品溶液。

2.2對(duì)照藥材溶液的制備取龍脷葉對(duì)照藥材1.0 g，精密稱(chēng)定，置于50 ml具塞錐形瓶中，加入適量水，超聲提取40 min，濾過(guò)，濾液蒸干，加水定容至5 ml，作為龍脷葉對(duì)照藥材溶液。

2.3供試品溶液的制備取龍脷葉粉末（過(guò)20目篩）1.0 g，精密稱(chēng)定，置于50 ml具塞錐形瓶中，以水為溶劑，超聲提取40 min，濾過(guò)，濾液蒸干，加水定容至5 ml，作為龍脷葉薄層色譜供試品溶液。另取龍脷葉藥材適量，于65℃干燥至恒重后進(jìn)行常規(guī)酸水解處理。精密稱(chēng)定藥材粗粉（過(guò)100目篩）0.4 g，置水解管中，精密加入6 mol/L HCl溶液20 ml，抽真空狀態(tài)下封管，置于110℃烘箱中水解24 h，取出，冷卻，濾過(guò)，精密量取濾液1 ml蒸干。殘留物用去離子水溶解，再蒸干，反復(fù)進(jìn)行2次，最后殘留物用去離子水溶解定容至25 ml，用0.45 μm濾膜濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得。作為氨基酸成分分析的供試品溶液。

2.410%微乳液的制備取十二烷基硫酸鈉（SDS）、正丁醇、正己烷和水，按3.0∶14.0∶2.0∶2.2的比例混勻，即得。

2.5龍脷葉的薄層色譜分析參照薄層色譜法［6］試驗(yàn)，分別精密吸取供試品溶液、氨基酸對(duì)照品溶液、龍脷葉對(duì)照藥材溶液各10 μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板（20 cm× 20 cm），以10%微乳液為展開(kāi)劑展開(kāi)，取出，晾干，噴以2%茚三酮乙醇試液（臨用配制），電吹風(fēng)熱風(fēng)吹至斑點(diǎn)顯色清晰。

2.6氨基酸成分分析［7-8］采用日立L-8800型全自動(dòng)氨基酸分析儀。分析柱：陽(yáng)離子交換樹(shù)脂柱（4.6 mm×60 mm，3 μm）；分析時(shí)間：45 min；緩沖液流速：0.4 ml/min（緩沖液泵壓力8～11.5 Pa），茚三酮流速：0.3 ml/min（茚三酮泵壓力0.9～1.2 kPa）；緩沖液改變次數(shù)5次；柱溫：56℃；氮?dú)鈮毫Γ?0 kPa；供試品和對(duì)照品溶液進(jìn)樣量均為20 μl。

3　結(jié)果

3.1龍脷葉中游離氨基酸薄層色譜分析結(jié)果見(jiàn)圖1。供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色斑點(diǎn)。

基金項(xiàng)目：廣西自然科學(xué)基金項(xiàng)目（編號(hào)：2013GXNSFAA019171）；廣西中醫(yī)藥民族醫(yī)藥繼承創(chuàng)新工程壯瑤醫(yī)藥研究與開(kāi)發(fā)項(xiàng)目（編號(hào)：GZZY13-10）

圖1　龍脷葉中游離氨基酸TLC圖

3.2龍脷葉中氨基酸成分的分析結(jié)果按照2.6項(xiàng)測(cè)定條件，對(duì)龍脷葉中18種基礎(chǔ)氨基酸進(jìn)行分析測(cè)定，結(jié)果見(jiàn)表1。

表1　龍脷葉中18種基礎(chǔ)氨基酸的測(cè)定結(jié)果

4　討論

龍脷葉中含有蛋氨酸（0.06%）、纈氨酸（1.07%）、蘇氨酸（0.82%）、異亮氨酸（0.84%）、苯丙氨酸（1.07%）、亮氨酸（1.58%）、賴(lài)氨酸（0.62%）等7種人體必需氨基酸，含有組氨酸（0.27%）、胱氨酸（0.08%）、絡(luò)氨酸（0.58%）、精氨酸（1.29%）等4種半必需氨基酸。龍脷葉總氨基酸總量達(dá)16.32%，表明龍脷葉具有較高的藥用和食用價(jià)值。

龍脷葉中氨基酸成分的薄層色譜以微乳系統(tǒng)作為展開(kāi)劑，可以有效克服由于氨基酸成分水溶性強(qiáng)、極性大造成斑點(diǎn)拖尾的缺點(diǎn)。在預(yù)試驗(yàn)中，本課題組對(duì)龍脷葉中氨基酸的薄層色譜展開(kāi)系統(tǒng)進(jìn)行篩選，分別考察了正丁醇∶冰醋酸∶水（4∶1∶1）、氯仿∶甲醇∶水（7∶3∶1）、10%微乳液、30%微乳液、60%微乳液等多種不同展開(kāi)系統(tǒng)，其中以10%微乳液的分離效果最好，斑點(diǎn)集中清晰，比移值適中，專(zhuān)屬性強(qiáng)。

氨基酸是構(gòu)成生物體蛋白質(zhì)分子的基本單位，與生物的生命活動(dòng)密切相關(guān)，尤與人類(lèi)健康有著緊密的關(guān)系。本研究采用全自動(dòng)氨基酸分析儀分析測(cè)定了龍脷葉中18種基礎(chǔ)氨基酸的含量，為龍脷葉的質(zhì)量評(píng)價(jià)和營(yíng)養(yǎng)評(píng)價(jià)提供初步的基礎(chǔ)數(shù)據(jù)。

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（2016-05-03收稿/編輯陳明偉）

中圖分類(lèi)號(hào)：R284.1

文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A

文章編號(hào)：1003-0719（2016）03-0076-03