詹素平,劉小紅,王志堅(jiān)

(西南大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院,淡水魚類資源與生殖發(fā)育教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,水產(chǎn)科學(xué)重慶市市級(jí)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,重慶　400715)

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詹素平,劉小紅,王志堅(jiān)

(西南大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院,淡水魚類資源與生殖發(fā)育教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,水產(chǎn)科學(xué)重慶市市級(jí)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,重慶400715)

摘要：運(yùn)用石蠟切片技術(shù)和掃描電鏡技術(shù)對(duì)稀有鯽(Gobiocypris rarus)鰓結(jié)構(gòu)進(jìn)行觀察,并采用濃度為2 mg/L的CdCl2水溶液對(duì)稀有鯽進(jìn)行急性毒理實(shí)驗(yàn)。結(jié)果顯示：稀有鯽具4對(duì)鰓,由鰓耙、鰓弓、鰓絲及鰓小片組成。鰓的各個(gè)部位表面均有上皮細(xì)胞覆蓋；鰓耙和鰓弓具味蕾,鰓弓上還具不同類型的黏液細(xì)胞；相鄰鰓小片的上皮細(xì)胞間也分布有黏液細(xì)胞,在鰓小片基部有氯細(xì)胞著生。鰓絲表面有不規(guī)則凹陷和微嵴,具溝、坑、孔等結(jié)構(gòu)；鰓小片兩面均呈凹凸?fàn)睢Ｔ? mg/L的CdCl2水溶液暴露下,鰓受到損傷,發(fā)生鰓小片充血呈球狀,鰓上皮水腫、脫落,黏液細(xì)胞增多等現(xiàn)象；并隨時(shí)間延長(zhǎng)受損程度加重。

關(guān)鍵詞：鎘；稀有鯽(Gobiocypris rarus)；鰓組織

魚類的鰓除了呼吸作用之外,還在滲透調(diào)節(jié)、維持酸堿平衡和含氮廢物排泄方面具有重要作用[1]。鰓也是水體毒物首要的攻擊目標(biāo),一旦受損,直接影響魚類氣體交換、滲透調(diào)節(jié)等功能[2]。水產(chǎn)動(dòng)物有毒金屬污染的主要來源可分為外源性和內(nèi)源性(生物富集),外源性污染包括水質(zhì)、底泥、空氣、藥物、飼料等[3]。鎘(Cd)元素普遍存在于大氣、水體和土壤中[4],作為一種生物蓄積性強(qiáng)、毒性持久、具有“三致”作用的劇毒元素,過量的攝入鎘對(duì)生物體危害極其嚴(yán)重[4]；不同形式的鎘毒性不同,硝酸鎘和氯化鎘易溶于水,故對(duì)動(dòng)植物和人體的毒性較高[5]。

1材料和方法

1.1試劑

CdCl2·2.5H2O (分析純，購自重慶市科龍化工試劑廠)為實(shí)驗(yàn)水體鎘離子源試劑,先配制成濃度為20 mg/L的母液儲(chǔ)藏備用,然后根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要稀釋成不同濃度；戊二醛(分析純),購自生工生物工程有限責(zé)任公司。

1.2實(shí)驗(yàn)魚及染毒方式

1.3試驗(yàn)方法

在試驗(yàn)12、24、48、72、96 h時(shí)分別隨機(jī)選取2尾魚用于掃描電鏡觀察、2尾用于組織學(xué)觀察。掃描電鏡樣品先用蒸餾水沖洗表面,然后在解剖盤冰塊上快速取出魚鰓放入2.5%戊二醛中固定；組織學(xué)樣品放入Bouin′s液固定24 h,各級(jí)酒精脫水,二甲苯透明,石蠟包埋、切片(厚度3～5 μm),H.E、Mallory′s三色法、汞-溴酚藍(lán)染色,顯微鏡(Nikon DXM1200，日本)觀察、拍照，SPSS17.0數(shù)據(jù)分析。

2結(jié)果

2.1鰓的結(jié)構(gòu)

2.1.1解剖結(jié)構(gòu)

2.1.2組織結(jié)構(gòu)

2.1.2.1鰓弓和鰓耙

2.1.2.2鰓絲和鰓小片

鰓絲橫切，可見入鰓絲動(dòng)脈和出鰓絲動(dòng)脈，二者分別為貫穿于鰓弓的入鰓動(dòng)脈和出鰓動(dòng)脈的分支(圖版Ⅰ-3)。鰓絲縱切，可見鰓絲中有結(jié)締組織包裹的軟骨組織,軟骨組織位于鰓絲內(nèi)側(cè),軟骨細(xì)胞在其中呈長(zhǎng)橢圓狀，鰓小片內(nèi)密布毛細(xì)血管(圖版Ⅰ-4)。鰓絲兩側(cè)有鰓小片著生,在鰓絲基部至中前部區(qū)域鰓小片彼此大致平行且長(zhǎng)度近似相等,靠近鰓絲尖端的鰓小片逐漸減短,至融合。鰓絲、鰓小片表面均覆蓋著扁平上皮細(xì)胞。鰓絲上皮為復(fù)層上皮細(xì)胞,包括扁平細(xì)胞、黏液細(xì)胞、泌氯細(xì)胞等(圖版Ⅰ-5)；泌氯細(xì)胞嗜酸性,H.E染色呈淺紅色,Mallory′s三色法著色較淺,其細(xì)胞體積顯著膨大,核較扁平細(xì)胞的核大,核仁不明顯,細(xì)胞呈卵圓形,多分布在鰓小片的基部；黏液細(xì)胞中性偏酸性,AB-PAS染色呈紫紅色(圖版Ⅰ-6),Mallory′s三色法染色呈藍(lán)色(圖版Ⅰ-7),細(xì)胞圓形或橢圓形,細(xì)胞核不明顯或位于細(xì)胞邊緣；分布在鰓絲上相鄰鰓小片之間,和鰓弓上的黏液細(xì)胞類型不同。鰓小片具有兩層扁平上皮細(xì)胞,柱細(xì)胞將兩層上皮細(xì)胞隔開,其中還分布著血細(xì)胞(圖版Ⅰ-7),Mallory′s三色法染色呈橘紅色。

2.1.3鰓絲及鰓小片掃描結(jié)構(gòu)

通過掃描電鏡觀察,鰓絲表面有較多不規(guī)則凹陷和不明顯的微嵴,有溝、孔、坑等結(jié)構(gòu),使之表面粗糙(圖版Ⅰ-8)；鰓小片呈三角形,表面不同于鰓絲,與鰓絲長(zhǎng)軸近垂直排列,其邊緣具褶皺,表面凹凸不平且有不同程度地向內(nèi)凹陷(圖版Ⅰ-9),鰓小片兩面結(jié)構(gòu)類似。

2.2急性鎘暴露試驗(yàn)鰓組織化學(xué)結(jié)構(gòu)變化

對(duì)照組鰓小片結(jié)構(gòu)完整、排列整齊(圖版Ⅰ-5)。鎘暴露12 h,觀察到有的鰓小片充血,形成球狀(圖版Ⅰ-10)；24 h后,觀察到相鄰鰓小片不同程度融合,部分上皮細(xì)胞水腫,偶有脫落(圖版Ⅰ-11)；48 h后上皮細(xì)胞亦有水腫,有的鰓小片嚴(yán)重變形(圖版Ⅰ-12),染毒48 h和72 h后可見某些鰓小片之間黏液細(xì)胞肥大、增生(圖版Ⅰ-13、14、15)；72 h后,鰓小片游離端上皮細(xì)胞水腫部位增多和鰓小片基部上皮細(xì)胞(鰓絲上皮細(xì)胞)脫落(圖版Ⅰ-16)；96 h后,鰓絲部分幾乎沒有黏液細(xì)胞,鰓絲上皮細(xì)胞脫落嚴(yán)重(圖版Ⅰ-17、18),鰓絲厚度變化及黏液細(xì)胞變化見表1。由此可見,隨著作用時(shí)間的增加,鰓組織損傷加重。

表1　Cd對(duì)稀有　鯽鰓結(jié)構(gòu)參數(shù)變化的影響

注：*P≤0.05，表示與對(duì)照組的顯著性差異。

3討論

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(責(zé)任編輯：鄧薇)

圖版Ⅰ　稀有　鯽鰓顯微及掃描結(jié)構(gòu)

圖版說明:

圖版Ⅰ-1:示鰓弓黏液細(xì)胞(MC),AB-PAS染色

圖版Ⅰ-2:示鰓耙味蕾(TB),黏液細(xì)胞(MC),汞-溴酚藍(lán)染色

圖版Ⅰ-3:鰓絲橫切,示入鰓絲動(dòng)脈(Aa)、出鰓絲動(dòng)脈(Ea)及鰓絲軟骨(GFC),H.E染色

圖版Ⅰ-4:示鰓絲(GF/SF)、鰓小片(SL)及鰓絲中部厚度(雙箭頭)、鰓絲軟骨，H.E染色.

圖版Ⅰ-5:鰓絲及鰓小片結(jié)構(gòu),示血細(xì)胞(BC)、泌氯細(xì)胞(CLC)、柱細(xì)胞(PC)、扁平細(xì)胞(PVC)，H.E染色.

圖版Ⅰ-6:示鰓絲黏液細(xì)胞,AB-PAS染色.

圖版Ⅰ-7:示鰓小片血細(xì)胞、鰓絲血管竇及黏液細(xì)胞、基膜(M),Mallory′s三色法染色.

圖版Ⅰ-8、9:鰓絲及鰓小片掃描結(jié)構(gòu),示鰓絲上坑、溝(箭頭)、孔(箭)等結(jié)構(gòu)及鰓小片表面凹凸不平

圖版Ⅰ-10:染毒12 h鰓絲結(jié)構(gòu),示鰓小片充血呈球狀(箭頭)、鰓小片上皮細(xì)胞水腫(星號(hào)),H.E染色

圖版Ⅰ-11:染毒24 h鰓絲結(jié)構(gòu),示鰓小片不同程度的融合(箭),H.E染色

圖版Ⅰ-12、13、14:染毒48 h鰓絲結(jié)構(gòu),依次示鰓絲卷曲混亂排列及黏液細(xì)胞肥大、增生(箭頭),H.E染色,Mallory′s三色法,AB-PAS染色

圖版Ⅰ-15、16:染毒72 h鰓絲結(jié)構(gòu),示黏液細(xì)胞肥大增生(箭頭)，鰓小片上皮細(xì)胞水腫(星號(hào))，Mallory′s三色法、AB-PAS染色

圖版Ⅰ-17、18:染毒96 h鰓絲結(jié)構(gòu),示鰓絲上皮脫落后鰓絲中部厚度(雙箭頭),鰓小片上皮細(xì)胞水腫(星號(hào)),H.E染色

收稿日期：2015-07-17；

修訂日期：2016-03-18

第一作者簡(jiǎn)介：詹素平(1991-)，女，碩士研究生，專業(yè)方向?yàn)橘Y源動(dòng)物學(xué)。E-mail:zhansuing@163.com 通訊作者：王志堅(jiān)。E-mail:wangzj1969@126.com

中圖分類號(hào)：S931.3

文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A

文章編號(hào)：1000-6907-(2016)04-0025-06

Structure of the gill of rare minnow (Gobiocypris rarus) and effects of waterborne cadmium on it

ZHAN Su-ping,LIU Xiao-hong,WANG Zhi-jian

(KeyLaboratoryofFreshwaterFishReproductionandDevelopment,MinistryofEducation,TheKeyLaboratoryofAquaticScienceofChongqing,SchoolofLifeScience,SouthwestUniversity,Chongqing400715,China)

Abstract：The histological and surface structures of the gill of rare minnow were observed by technology of paraffin section and electron microscopy scanning.Acute toxicity test of waterborne cadmium chloride (2 mg/L) on the gill of rare minnows was conducted.The results showed that there were 4 pairs of holobranch in rare minnow,and each was composed of gill rakers,gill arch,gill filaments and secondary lamellae arranged on both sides of gill filaments.The surface of the gills was covered by the epithelial cell;taste buds could be observed in both gill rakers and arch.The gill arch had different types of mucous cells,which was also distributed among the adjacent epithelial cells of secondary lamellae.Chloride cells were mainly found in base of secondary lamellae.From SEM,some unregulated structures,including indentations,micropits and crevices were observed on gill filaments,and gill lamellae was organized as machicolated form on both sides.After waterborne cadmium (2 mg/L) exposure,damage including congestion of secondary lamellae that presented spherality,edema and drop of epithelial cells,increased mucus cells was observed;and the damage aggravated with the extension of exposure time.

Key words：cadmium;Gobiocypris rarus;gill

資助項(xiàng)目：公益性行業(yè)(農(nóng)業(yè))科研專項(xiàng)(201203086)；重慶市科委重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室專項(xiàng)經(jīng)費(fèi)