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        一清膠囊抗炎作用實驗研究

        2016-07-27 07:22:23徐雄良劉小均張啟余
        西北藥學雜志 2016年4期
        關鍵詞:角叉菜膠二甲苯抗炎

        徐雄良,劉 浪,劉小均,岳 韻,張啟余,柯 瀟,鄭 強

        (成都康弘藥業(yè)集團股份有限公司國家企業(yè)技術中心,成都

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        一清膠囊抗炎作用實驗研究

        徐雄良,劉浪,劉小均,岳韻,張啟余,柯瀟,鄭強*

        (成都康弘藥業(yè)集團股份有限公司國家企業(yè)技術中心,成都

        610036)

        摘要:目的研究一清膠囊的抗炎作用,為其臨床應用提供科學依據。方法采用二甲苯誘導小鼠耳腫脹、角叉菜膠誘導大鼠足腫脹,評價其抗炎作用。結果一清膠囊高(29.3 g·kg-1)、低(3.7 g·kg-1)劑量組均可顯著減輕二甲苯致小鼠耳腫脹(P<0.05);高(11.7 g·kg-1)、中(5.9 g·kg-1)、低(2.9 g·kg-1)劑量組均可顯著抑制角叉菜膠致大鼠足腫脹(P<0.01),其作用在致炎后1和3 h表現明顯,且高劑量組在致炎后6 h內的作用強于醋酸潑尼松組。結論一清膠囊具有較好的抗炎作用。

        關鍵詞:一清膠囊;抗炎;二甲苯;角叉菜膠

        一清膠囊由大黃、黃連和黃芩3味藥組成[1],收載于《中國藥典》2015年版一部,具有清熱瀉火解毒、化瘀涼血止血的功效;臨床上廣泛用于治療熱毒證,如火毒血熱所致的身熱煩躁、目赤口瘡、咽喉牙齦腫痛和大便秘結;咽炎、扁桃體炎和牙齦炎見上述證候者。

        研究表明,大黃中的大黃素、大黃酸和黃芩中的黃芩苷及黃連中的小檗堿均具有抑制炎癥因子的作用[2]。為了進一步研究一清膠囊的抗炎作用,本文采用二甲苯誘導小鼠耳腫脹和角叉菜膠誘導大鼠足腫脹的方法制造急性非特異性炎癥模型和免疫性炎癥模型,評價其抗炎作用,為臨床應用提供科學依據。

        1儀器與材料

        1.1儀器足趾容積測量儀(PV-200型,成都泰盟科技有限公司)。

        1.2試藥一清膠囊(成都康弘制藥有限公司,批號120514,規(guī)格0.5 g/粒,每克膠囊內容物相當于原生藥7.32 g;臨用前用質量濃度為10 g·L-1的阿拉伯膠配成所需混懸液備用);醋酸潑尼松片(浙江仙琚制藥股份有限公司,批號120479,規(guī)格5 mg/片,臨用前用質量濃度為10 g·L-1的阿拉伯膠配成所需混懸液備用);二甲苯(成都市科龍化工試劑廠,批號20080801);角叉菜膠(Sigma公司,批號81K1556,規(guī)格25 g/瓶)。1.3動物SPF級雄性昆明種小鼠,體質量20±2 g,飼養(yǎng)于SPF級環(huán)境中,動物使用許可證號:SCXK(川)2008-19。雄性SD大鼠,體質量175±25 g,飼養(yǎng)于SPF級環(huán)境中,動物使用許可證號:SCXK(川)2008-19。均由四川省醫(yī)學科學院實驗動物研究所提供。

        2方法

        2.1對二甲苯致小鼠耳腫脹模型的影響取體質量為20±2 g的雄性小鼠50只,隨機分為5組,即模型組、一清膠囊高、中、低3個劑量組(29.3,7.3和3.7 g·kg-1)和醋酸潑尼松組(10 mg·kg-1),按照0.02 mL·g-1等容積灌胃給藥,每日 2次,連續(xù)5 d,模型組則給予等體積質量濃度為10 g·L-1的阿拉伯膠溶液。末次給藥40 min后,在各組小鼠左耳均勻涂布二甲苯,0.05 mL/只,造模后30 min處死小鼠,用直徑為8 mm的打孔器取下左右耳片,稱定質量,以左右耳片質量差作為腫脹度(mg),計算腫脹抑制率(%)[3-4]。

        2.2對角叉菜膠致大鼠足腫脹模型的影響取體質量為175±25 g的雄性SD大鼠50只,隨機均分為5組,即模型組、一清膠囊高、中、低3個劑量組(11.7,5.9和2.9 g·kg-1)和醋酸潑尼松組(10 mg·kg-1),按照0.01 mL·g-1等容積灌胃給藥,每日2次,連續(xù)5 d,模型組則給予相同體積質量濃度為10 g·L-1的阿拉伯膠溶液。末次給藥30 min后在大鼠左足皮下注射質量濃度為10 g·L-1的角叉菜膠溶液,0.1 mL/只,用足趾容積測量儀測量致炎前及致炎后1,2,3,4,5和6 h時大鼠的左足體積(mL),將大鼠致炎后體積與致炎前體積相減計算大鼠的足腫脹度(mL),計算腫脹率(%),進行統計學分析[3,5]。

        3結果

        3.1對二甲苯致小鼠耳腫脹模型的影響二甲苯造模后30 min處死小鼠,用直徑為8 mm的打孔器取下左右耳片,稱定質量,以左右耳片質量差作為腫脹度(mg)進行統計分析,結果一清膠囊高(29.3 g·kg-1)、低(3.7 g·kg-1)劑量組均可顯著減輕二甲苯致小鼠耳腫脹(P<0.05),與模型組比較差異有統計學意義;與模型組相比,一清膠囊中劑量組(7.3 g·kg-1)差異雖無統計學意義,但其腫脹度仍小于模型組;與醋酸潑尼松組比較,一清膠囊高、中、低劑量組差異無統計學意義(P>0.05),結果見表1。

        表1一清膠囊對二甲苯致小鼠耳腫脹模型的影響

        Tab.1 The effect of Yiqing Capsules on the ear swelling induced by xylene in mice

        ±s,n=10)

        注:與模型組比較*P<0.05,**P<0.01;與對照組比較#P<0.05,# #P<0.01;-表示無該項指標。

        3.2對角叉菜膠致大鼠足腫脹模型的影響以致炎前及致炎后足體積的變化值計算大鼠的足腫脹度(mL),以腫脹率(%)進行統計學分析,結果一清膠囊高(11.7 g·kg-1)、中(5.9 g·kg-1)、低(2.9 g·kg-1)3個劑量組均可抑制角叉菜膠致大鼠足腫脹(P<0.05),其作用在致炎后1和3 h表現明顯(P<0.01),與模型組比較差異有統計學意義;與醋酸潑尼松組比較,一清膠囊高劑量組(11.7 g·kg-1)差異無統計學意義(P>0.05),表明一清膠囊高劑量組有較強的抗炎作用。從腫脹率(%)可知,一清膠囊高劑量組在致炎后6 h內的作用甚至強于醋酸潑尼松組,且抗炎作用也較持久,結果見表2。

        表2一清膠囊對角叉菜膠致大鼠足腫脹的影響

        Tab.2 The effect of Yiqing Capsules on the paw swelling caused by carrageenan in rat

        ±s,n=10)

        注:與模型組比較*P<0.05,**P<0.01;與對照組比較#P<0.05,# #P<0.01;-表示無該項指標。

        4討論

        炎癥是具有血管系統的活體組織對損傷因子所發(fā)生的防御反應。在炎癥反應過程中,受傷組織及血液可產生并釋放具有致炎作用的細胞因子、炎性介質和趨化因子等多種化學活性物質,從而引起局部紅、腫、熱、痛等臨床表現。PGE2、TNF-α和IL-1β是重要的炎癥細胞因子,可促進炎癥反應和組織損傷,釋放出多種炎癥介質,引起炎癥反應。

        鄧翀[6]、賴先榮等[7]研究結果表明,一清膠囊藥效物質基礎主要來源于方中大黃、黃芩和黃連的主要有效成分,如大黃中的蒽醌衍生物(大黃酸、大黃素、大黃素甲醚、大黃酚和蘆薈大黃素等),黃芩中的黃芩苷、黃芩素、漢黃芩苷、漢黃芩素和黃芩新素等,以及黃連中的小檗堿等。羅蘭等[8]利用UPLC-ESI-MS-MS與FTIR技術對一清膠囊化學成分進行了分析,鑒定出的12個化合物中有5個化合物(蘆薈大黃素、大黃酸、大黃酚、大黃素和大黃素甲醚)來自于大黃,3個化合物(黃芩苷、漢黃芩苷和漢黃芩素)來自于黃芩,4個化合物(表小檗堿、黃連堿、巴馬汀和鹽酸小檗堿)來自于黃連,且10批一清膠囊樣品紅外光譜的吸收曲線基本無區(qū)別,特征明顯,幾乎所有峰都可以重現。

        大黃能顯著改善急性危重癥患者的全身炎癥反應綜合征,大黃水提物能明顯降低小鼠腹腔毛細血管通透性的增加,不同程度地減輕大鼠足跖腫脹,明顯抑制二甲苯引起的小鼠耳廓腫脹[9]。大黃中的大黃素對炎癥早期的滲出、毛細血管通透性的增加和白細胞游走等具有較好的對抗作用,有明顯抑制急性炎癥反應的作用[10]。進一步證明了以大黃水提物為主要組分的一清膠囊具有較好的抗炎作用。

        黃芩能顯著影響白細胞的多種功能,對過敏性炎癥滲出有一定的抑制作用[11],其超聲提取物和回流提取物適宜劑量(75 mg·kg-1)對急性炎癥均有顯著的抑制作用[12],黃芩中黃酮類化合物對多種炎癥介質有抑制作用[13]。吳再旺等[14]實驗研究表明,10個不同產區(qū)的黃芩均有抑制小鼠耳腫脹作用,黃芩苷、千層紙素、A-7-O-β-D-葡萄糖醛酸苷和黃芩素均具有抑制與炎癥相關的IL-1β轉化酶的作用[15]。黃芩提取物通過抑制淋巴細胞功能和炎癥介質的產生而發(fā)揮抗炎作用。黃芩和黃連是清胃黃連丸發(fā)揮抗炎藥效的重要物質基礎,研究結果表明,清胃黃連丸可以顯著抑制醋酸致小鼠毛細血管通透性增高,抑制蛋清所引起的大鼠足腫脹和二甲苯所致的小鼠耳廓腫脹[16]。

        黃連水煎液對二甲苯致小鼠耳腫脹和對醋酸致小鼠腹腔毛細血管通透性增加均有一定的抑制作用[17]。黃連中的小檗堿能顯著降低炎性組織中PGE2的含量,具有明顯的抗炎作用[18]。

        根據文獻[19-21]報道,每粒(0.5 g)一清膠囊中黃芩苷的含量為28.32~36.99 mg,小檗堿的含量為7.53~12.50 mg,漢黃芩苷的含量為1.06~4.36 mg,來自于大黃5個組分的總含量為1.83~2.62 mg。因此,一清膠囊的抗炎物質基礎均來源于方中大黃、黃芩和黃連的主要有效成分。

        另外,一清膠囊的抗炎作用機制之一可能與抑制炎癥介質NO參與炎癥反應過程有關。體外抗炎實驗[8]表明,一清膠囊在1~100 μmol·L-1范圍內能顯著降低細胞上清液中NO的含量,且具有一定的劑量依賴性。

        總之,一清膠囊方中的3味中藥均具有較好的抗炎作用。實驗結果表明,一清膠囊對二甲苯誘發(fā)的小鼠耳腫脹及角叉菜膠誘發(fā)的大鼠足腫脹具有明顯的抑制作用,且呈一定的量效關系,其抗炎作用機制可能與降低TNF-α,IL-1β和PGE2的表達以及細胞上清液中NO的含量有關,以上研究結果與其清熱解毒的功效相關,為一清膠囊的臨床應用提供了藥效學基礎。

        參考文獻:

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        作者簡介:徐雄良,男,博士

        *通信作者:鄭強,男,博士

        doi:10.3969/j.issn.1004-2407.2016.04.020

        中圖分類號:R965

        文獻標志碼:A

        文章編號:1004-2407(2016)04-0392-03

        (收稿日期:2015-11-30)

        Anti-inflammatory effects of Yiqing Capsules

        XU Xiongliang,LIU Lang,LIU Xiaojun,YUE Yun,ZHANG Qiyu,KE Xiao,ZHENG Qiang*

        (National-recognized Enterprise Technology Center,Chengdu Kanghong Pharmaceuticals Group Limited Company,Chengdu 610036,China)

        Abstract:Objective To evaluate the pharmacodynamics of Yiqing Capsules related to anti-inflammatory effect,and to provide the scientific evidence for its clinical application. Methods Anti-inflammatory effects were studied by xylene induced ear swelling in mice and paw swelling caused by carrageenan in rat.Results Yiqing Capsules at high and low dose groups(29.3 and 3.7 g·kg-1) could apparently restrain the ear swelling induced by xylene in mice(P<0.05); Yiqing Capsules at various dose groups(11.7,5.9 and 2.9 g·kg-1) could restrain the rat paw swelling induced by carrageenan(P<0.01) and appeared obviously after 1 and 3 h.Yiqing Capsules at high dose group could restrain the rat paw swelling induced by carrageenan stronger than prednisone acetate dose group within 6 h.Conclusion Yiqing Capsules could eliminate toxins effect.

        Key words:Yiqing Capsules;anti-inflammatory;xylene;carrageenan

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