肖 娟，張瑞芬，黃 菲，劉 磊，鄧媛元，馬永軒，劉 冬，張名位，孫遠明1

（1.華南農(nóng)業(yè)大學食品學院，廣州 510642；2.廣東省農(nóng)業(yè)科學院蠶業(yè)與農(nóng)產(chǎn)品加工研究所/農(nóng)業(yè)部功能食品重點實驗室/廣東省農(nóng)產(chǎn)品加工重點實驗室，廣州 510610；3.深圳職業(yè)技術學院，深圳 518055）

?

兩種不同的酒精攝入方式誘導的小鼠酒精性肝損傷模型比較

肖 娟1，2，張瑞芬2，黃 菲2，劉 磊2，鄧媛元2，馬永軒2，劉 冬3，張名位2，孫遠明1

（1.華南農(nóng)業(yè)大學食品學院，廣州 510642；2.廣東省農(nóng)業(yè)科學院蠶業(yè)與農(nóng)產(chǎn)品加工研究所/農(nóng)業(yè)部功能食品重點實驗室/廣東省農(nóng)產(chǎn)品加工重點實驗室，廣州 510610；3.深圳職業(yè)技術學院，深圳 518055）

【摘要】目的 篩選一種簡便、穩(wěn)定、可靠的酒精性肝損傷模型。方法 通過酒精灌胃或給予Lierber-DeCarli酒精液體飼料8周來建立酒精性肝損傷小鼠模型。實驗期間記錄小鼠精神狀態(tài)、攝食量和體重變化，HE染色進行病理學分析，分析血清谷丙轉氨酶（ALT）、谷草轉氨酶（AST）、γ-谷氨酰轉移酶（γ-GT）、堿性磷酸酶（AKP）活性，血清和肝臟總膽固醇（TC）、甘油三酯（TG）含量等肝損傷指標。結果 造模8周后，兩種方式均導致小鼠肝臟脂質聚集等組織病理學變化，血清ALT、AST、AKP活性、血清和肝臟TG含量均顯著提高，提示出現(xiàn)明顯肝損傷。酒精灌胃導致小鼠精神狀態(tài)差，并顯著減輕體重，而酒精液體飼料對小鼠精神狀態(tài)和體重影響小。酒精液體飼料模型肝臟指數(shù)和血清TC水平顯著增加，而且血清ALT、AST活性、血清和肝臟TG含量及肝臟脂質聚集等組織病理學變化幅度大于酒精灌胃模型，提示前者的肝損傷程度比后者嚴重。結論 Lieber-DeCarli酒精液體飼料模型優(yōu)于酒精灌胃模型。Lieber-DeCarli酒精液體飼料模型相對酒精灌胃模型更適合用于酒精性肝損傷分子機制的研究和防治藥物的篩選。

【關鍵詞】酒精性肝損傷；Lierber-DeCarli酒精液體飼料；灌胃；模型，動物；

流行病學研究表明，全球酒精性肝病發(fā)病率逐年升高，該病已成為肝臟疾病中僅次于病毒性肝炎的第二大病因［1］，其致死率已經(jīng)遠超過乳腺癌、腸癌和前列腺癌等癌癥疾病［2，3］。為此，酒精性肝損傷成為近年來國內(nèi)外學者研究的焦點之一［4］。目前對酒精性肝損傷的研究主要集中于探討其致病機理、預防措施以及防治藥物的篩選等［5，6］。穩(wěn)定可靠的酒精性肝損傷動物模型是研究其致病機理和防治措施的基礎和必備條件。國內(nèi)外常用的酒精性肝損傷模型主要有3種，酒精灌胃模型、Lieber-DeCarli酒精液體飼料模型和Tsukamato-French模型［7］。Tsukamato-French模型對實驗技術和實驗動物的要求嚴格、費用昂貴，故難以推廣使用［8］。酒精灌胃模型、Lieber-DeCarli酒精液體飼料模型均能較好的復制出酒精性脂肪肝，但兩種模型的動物精神狀態(tài)、肝損傷程度等是否有差異尚不清楚［7］。本文主要以小鼠的精神狀態(tài)、體重和肝損傷程度等為指標來比較酒精灌胃和Lieber-DeCarli酒精液體飼料誘導的酒精性肝損傷小鼠模型的差異，以篩選穩(wěn)定、可靠的動物模型，為酒精性肝損傷的基礎研究，特別是植物活性成分對其改善作用的評價提供穩(wěn)定可靠的動物模型。

1 材料和方法

1.1 實驗動物

SPF級雄性C57BL/6小鼠60只，體重18～22 g （8周齡）來源于中山大學（大學城）實驗動物中心【SCXK（粵）2011-0029】。動物飼養(yǎng)于中山大學實驗動物中心【SYXK（粵）2012-0081】屏障環(huán)境動物房（室溫22±1℃，相對濕度為55% ～60%，12 h光照/12 h黑暗）。動物組織取材中，按實驗動物使用的3Rs原則給予人道的關懷。小鼠適應性喂養(yǎng)1周后，按體質量隨機分為正常對照組（normal control）、酒精灌胃組（oral ethanol gavage）、對照液體飼料組（control liquid diet）和酒精液體飼料組（ethanol liquid diet），每組15只。正常對照組和酒精灌胃組小鼠5只/籠，以全價營養(yǎng)顆粒飼料飼養(yǎng)，自由進食及飲水；對照液體飼料和酒精液體飼料組小鼠3只/籠，分別給予對照液體飼料和酒精液體飼料，飼料現(xiàn)配現(xiàn)用，每天記錄攝食量，酒精液體飼料組小鼠自由進食，對照液體飼料組小鼠飼料給予量為前1 d酒精液體飼料組的平均攝食量。

1.2 試劑與儀器

Lieber-DeCarli高脂肪型酒精液體飼料（含4% （w/v）酒精；飼料熱量組成為蛋白質熱量18%、酒精熱量28%、其他碳水化合物熱量19%、脂肪熱量35%）（代碼：TP 4030B）及其對照液體飼料（不含酒精；飼料熱量組成為蛋白質熱量18%、碳水化合物熱量47%，脂肪熱量35%）（代碼：TP 4030BC）購于南通特洛菲飼料科技有限公司。ALT、AST、γ-GT、AKP、TC和TG試劑盒均購于南京建成生物工程研究所。高速/冷凍離心機（Thermo，美國），-80℃低溫冰箱（Thermo，美國），低速離心機（Thermo，美國），酶標儀（Tecan，瑞士），差相熒光倒置顯微鏡（Leica，德國）。

1.3 實驗方法

1.3.1 酒精肝損傷小鼠模型建立：酒精灌胃誘導酒精肝損傷小鼠模型建立：酒精灌胃組的酒精適應期為1周，酒精灌胃劑量由0.5 g/（kg·體重）逐步增加到6 g/（kg·體重）；其造模期為8周，1～4周劑量為6 g/（kg·體重），5～8周劑量為 5 g/（kg·體重）［9-11］。正常對照組灌胃等量的蒸餾水。酒精或蒸餾水灌胃量為0.1 mL/10（g·體重）。

Lieber-DeCarli酒精液體飼料酒精肝損傷小鼠模型建立：酒精液體飼料組先經(jīng)過液體飼料適應期（3 d）后，再根據(jù)小鼠酒精性脂肪肝模型的建立方法（經(jīng)典法）說明書進行酒精適應期（4 d，第1～4 d酒精液體飼料與對照液體飼料混合的比例分別為1：4、2：3、3：2和4：1），然后進入造模期，以酒精液體飼料喂養(yǎng)造模8周［12-14］。

1.3.2 取材：小鼠禁食12 h后，乙醚麻醉小鼠，摘眼球取血，處死小鼠，肝臟用冰生理鹽水漂洗、濾紙吸干水后，切取1 cm3肝臟固定于4%多聚甲醛，用于HE染色；剩余肝臟迅速分裝后-80℃凍存。血液4℃放置1～1.5 h后4℃4 000 r/min離心15 min后，取上清液立刻用于指標測定。

1.3.3 指標測定：

1.3.3.1 血清 ALT、AST、γ-GT、AKP活性，TC和TG含量：血清ALT、AST采用賴氏法，γ-GT、AKP采用比色法，TC和TG采用甘油激酶-磷酸甘油氧化酶-過氧化物酶比色法，操作嚴格按試劑盒說明書進行。

1.3.3.2 肝臟TC和TG含量：取200 mg濕肝臟，加入9倍體積的氯仿-甲醇（2∶1）溶液［15］，制備勻漿，離心后取10 μL上清液檢測，采用甘油激酶-磷酸甘油氧化酶-過氧化物酶比色法，按試劑盒說明書進行操作。

1.3.3.3 HE染色觀察肝組織病理學形態(tài)：按常規(guī)方法制作石蠟切片并進行HE染色，光鏡下觀察肝臟形態(tài)變化。

1.4 統(tǒng)計學方法

數(shù)據(jù)以平均值±標準偏差表示，采用SPSS 16.0軟件，進行t檢驗（P＜0.05）。

2 結果與分析

2.1 精神狀態(tài)及死亡率

實驗過程中正常對照組及對照液體飼料組小鼠精神狀態(tài)好，食欲佳，皮毛有光澤。酒精灌胃組小鼠酒醉現(xiàn)象嚴重、應激反應嚴重、精神萎靡、活動減少、反應遲鈍、皮毛無光澤，在造模期第4周死亡3只。酒精液體飼料組小鼠也有酒醉現(xiàn)象，但比酒精灌胃組小鼠要輕微，無應激反應，精神狀態(tài)和反應均較正常，動物未出現(xiàn)死亡。

2.2 體重

正常對照組小鼠體重持續(xù)增長圖1（A），酒精灌胃組小鼠體重緩慢增長，從造模期第4周開始，正常對照組小鼠體重顯著高于酒精灌胃組小鼠（P＜0.05）。對照液體飼料組和酒精液體飼料組體重緩慢增長后趨于平衡圖1（B），在造模期第2周至造模期第6周，對照液體飼料組體重顯著高于酒精液體飼料組（P＜0.05），在造模期第7周至造模期第8周，對照液體飼料組小鼠與酒精液體飼料組小鼠體重差異無顯著性（P＞0.05）。結果表明，酒精灌胃顯著減輕小鼠體重，而酒精液體飼料對小鼠體重影響小。

2.3 攝食量

整個飼養(yǎng)過程中，正常對照組與酒精灌胃組小鼠攝食量差異無顯著性（圖2）；對照液體飼料組和酒精液體飼料組小鼠攝食量差異無顯著性，表明酒精灌胃和酒精液體飼料對小鼠攝食量無顯著影響。

2.4 肝臟組織病理學形態(tài)變化

從圖3中可見，正常對照組小鼠肝小葉結構清晰，肝細胞索由中央靜脈向四周呈放射狀排列；酒精灌胃組小鼠部分肝細胞出現(xiàn)脂肪變性，大部分脂肪空泡小，少數(shù)脂肪空泡大。對照液體飼料組小鼠肝小葉結構清晰，肝細胞索由中央靜脈向四周呈放射狀排列，少量肝細胞出現(xiàn)脂肪變性，脂肪空泡細??；而酒精液體飼料組小鼠大量肝細胞出現(xiàn)脂肪變性，脂肪空泡大，其余的大部分肝細胞變性、腫脹，胞漿內(nèi)充滿小的脂肪空泡，高倍鏡下可觀察到肝細胞細胞核濃縮和核溶解，以及炎性細胞浸潤。與酒精灌胃組相比，酒精液體飼料組小鼠肝臟脂質聚集程度明顯增加。

2.5 肝臟指數(shù)

與正常對照組相比，酒精灌胃組小鼠肝臟指數(shù)差異無顯著性（表1）。與對照液體飼料組相比，酒精液體飼料組小鼠肝臟指數(shù)顯著提高27.62%（P＜0.05）（表2），提示酒精液體飼料組小鼠肝臟出現(xiàn)腫脹、脂質聚集等變化，該結果與肝臟組織病理學形態(tài)變化結果相互印證。

2.6 小鼠血清ALT、AST、γ-GT、AKP活性

與正常對照組相比，酒精灌胃組小鼠血清ALT、AST、AKP活性均顯著提高（P＜0.05），提高幅度分別為28.09%、110.32%、43.60%（表1），提示肝臟出現(xiàn)損傷。與對照液體飼料組相比，酒精液體飼料組小鼠血清ALT、AST和AKP活力均顯著提高（P＜0.05），提高幅度分別為 86.41%、187.75%、34.78%（表2），提示肝臟出現(xiàn)損傷。對比肝功能特征指標血清ALT、AST活性的變化程度，可發(fā)現(xiàn)酒精液體飼料組的變化幅度大于酒精灌胃組，提示酒精液體飼料誘導的肝臟損傷可能比酒精灌胃誘導的肝臟損傷更嚴重。

注：#表示差異有顯著性（P＜0.05）。圖1 酒精灌胃（A）和Lierber-DeCarli酒精液體飼料（B）誘導的酒精性肝損傷小鼠模型體重變化Note.#：Significantly reduced body weight（P＜0.05）.Fig.1 Changes of body weight of the oral ethanol gavage model（A）and Lierber-DeCarli ethanol liquid diet model（B）

2.7 小鼠血清及肝臟TG和TC含量

與正常對照組相比，酒精灌胃組小鼠血清TG和肝臟TG含量均顯著提高（表1）（P＜0.05），提高幅度分別為23.80%和11.40%，但是，兩組小鼠的血清TC和肝臟TC含量差異無顯著性，提示灌胃酒精誘導的酒精肝損傷模型表現(xiàn)出一定的肝損傷。與對照液體飼料組相比，酒精液體飼料組小鼠血清TG、TC和肝臟TG含量均顯著提高（P＜0.05），提高幅度為32.13%、21.90%和14.47%（表2），提示酒精液體飼料能導致一定程度的肝損傷。

酒精液體飼料組小鼠血清 TC顯著增加，而酒精灌胃組該指標無顯著變化。對比小鼠血清TG和肝臟TG含量變化程度，可發(fā)現(xiàn)酒精液體飼料組的變化幅度略大于酒精灌胃組。提示酒精液體飼料誘導的肝臟損傷可能比酒精灌胃誘導的肝臟損傷更嚴重。該結果與肝臟病理變化相互印證。

圖2 酒精灌胃（A）和Lierber-DeCarli酒精液體飼料（B）誘導的酒精性肝損傷小鼠模型攝食量變化Fig.2 Changes of food intake of the oral ethanol gavagemodel（A）and Lierber-DeCarli ethanol liquid diet model（B）

3 討論

穩(wěn)定可靠的動物模型是研究ALD的分子機制和防治措施的基礎。酒精灌胃和Lieber-DeCarli酒精液體飼料誘導的ALD模型均為國內(nèi)外公認的ALD模型［7］。酒精灌胃模型操作簡便，能夠控制酒精攝入量，可維持血中有效酒精濃度，容易復制酒精性脂肪肝和肝炎，但動物易產(chǎn)生應激反應，死亡率高。Lieber-DeCarli酒精液體飼料誘導的ALD模型是使動物能主動飲用酒精液體飼料，可復制出酒精性脂肪肝和肝炎，其優(yōu)點是試驗者能夠通過配對喂養(yǎng)主動控制能量攝入，保持各組間的能量平衡，排除營養(yǎng)攝入即攝入能量不均對實驗的結果的影響［11，16］。

圖3 酒精灌胃和Lierber-DeCarli酒精液體飼料誘導的酒精性肝損傷小鼠模型肝臟組織病理形態(tài)變化（HE染色，×200，標尺=100 μm）Fig.3 Histological changes of the liver tissues in the oral ethanol gavage and Lierber-DeCarli ethanol liquid diet mouse models.（HE staining，×200，Bar=100 μm）

表1 酒精灌胃誘導的酒精性肝損傷小鼠模型肝臟指數(shù)、血清ALT、AST、γ-GT和AKP活性，血清和肝臟中甘油三酯和總膽固醇水平的變化（-±s）Tab.1 Changes of the liver-to-body weight ratio，serum ALT，AST，γ-GT and AKP activities，serum and hepatic TG and TC contents in the oral ethanol gavage models.

表1 酒精灌胃誘導的酒精性肝損傷小鼠模型肝臟指數(shù)、血清ALT、AST、γ-GT和AKP活性，血清和肝臟中甘油三酯和總膽固醇水平的變化（-±s）Tab.1 Changes of the liver-to-body weight ratio，serum ALT，AST，γ-GT and AKP activities，serum and hepatic TG and TC contents in the oral ethanol gavage models.

注*表示在0.05水平上差異有顯著性（P＜0.05）。Note.*means a significant difference（P＜0.05）.

變化幅度/% Change/%肝臟指數(shù)Liver-to-body weight ratio/%　3.34±0.33　3.59±0.33谷丙轉氨酶ALT/U/L　29.39±3.82　37.65±9.66*　+28.09%谷草轉氨酶AST/U/L　10.72±2.86　22.55±3.83*　+110.32% γ-谷氨酰轉移酶γ-GT/U/L　3.24±0.74　3.68±0.89堿性磷酸酶AKP/U/L　59.79±10.32　85.85±14.51*　+43.60%血清甘油三酯Serum TG/mmol/L　0.94±0.12　1.16±0.21*　+23.80%血清總膽固醇Serum TC/mmol/L　2.58±0.38　2.75±0.46肝甘油三酯Hepatic TG/mg/g liver　11.98±1.26　13.34±1.47*　11.40%肝總膽固醇Hepatic TC/mg/g liver　4.90±0.75　5.58±0.88指標Indexs正常對照組Normal control酒精灌胃組Oral ethanol

本實驗利用酒精灌胃和Lieber-DeCarli酒精液體飼料誘導小鼠酒精性肝損傷，造模8周，肝臟出現(xiàn)明顯脂質聚集，小鼠血清ALT、AST、AKP活性，血清TG和肝臟TG含量均顯著提高，這些都符合早期酒精性肝損傷的變化特點［2，3］，表明酒精灌胃組和酒精液體飼料組小鼠均出現(xiàn)明顯酒精性脂肪肝。但是，酒精灌胃組小鼠酒醉現(xiàn)象嚴重、精神狀態(tài)差；酒精液體飼料組小鼠也有酒醉現(xiàn)象，但比酒精灌胃組小鼠要輕微，無應激反應，精神狀態(tài)和反應均較正常，這有可能是因為酒精灌胃所用的酒精濃度高（50%酒精），對小鼠的刺激大，而酒精液體飼料中酒精的濃度僅為4%，對小鼠的刺激很微弱，因此從精神狀態(tài)上來看酒精液體飼料模型優(yōu)于酒精灌胃模型。本實驗中酒精液體飼料誘導的ALD模型未出現(xiàn)死亡，而酒精灌胃的第4周小鼠死亡3只。研究表明酒精灌胃劑量低無法誘導酒精性脂肪肝形成，而劑量高易導致大量動物死亡［7］。灌胃5 g/ （kg·體重）或6 g/（kg·體重）酒精（酒精濃度40%～52%）8周成功誘導酒精性脂肪肝形成［9，10］，Zeng等［11］研究表明4 g/kg·體重 酒精灌胃8周不能導致小鼠肝損傷（脂肪肝）的發(fā)生。因此，本實驗中酒精灌胃劑量在1～4周為6 g/（kg·體重），在出現(xiàn)小鼠死亡后，酒精灌胃劑量調整為5 g/（kg·體重）。灌胃酒精顯著減輕小鼠體重，由于灌胃酒精對攝食量無顯著影響，那么體重的減少很可能是由于高濃度酒精刺激影響胃腸道的消化吸收功能造成的［17，18］；而酒精液體飼料對小鼠體重影響小，很可能是因為進行了配對喂養(yǎng)，使得酒精液體飼料組與其對照組的能量攝入保持一致，這體現(xiàn)了Lieber-DeCarli酒精液體飼料模型的優(yōu)點。

對照液體飼料組肝臟HE染色結果顯示有少量脂質聚集，原因是對照液體飼料是高脂肪型飼料，食用時間較長的情況下小鼠肝臟會有少量脂質聚集，因此造模時間一般不超過8周［7］。Ge et al.［13］和Wang et al.［14］的研究也發(fā)現(xiàn)造模8周后，HE染色和油紅O染色顯示對照液體飼料組小鼠肝臟有輕微脂質聚集。

比較酒精灌胃組和液體酒精飼料相對各自對照組的變化程度發(fā)現(xiàn)：（1）液體酒精飼料模型肝臟指數(shù)顯著增加，血清TC水平顯著提高，而酒精灌胃模型這兩個指標無顯著變化。（2）兩個模型的血清ALT、AST活性、血清和肝臟TG含量均顯著變化，但液體酒精飼料模型的變化幅度大于酒精灌胃模型。（3）液體酒精飼料模型的肝臟脂質聚集等病理變化比酒精灌胃模型的嚴重。提示Lieber-DeCarli酒精液體飼料模型優(yōu)于酒精灌胃模型。

因此，從精神狀態(tài)、體重和肝損傷程度等方面來看，Lieber-DeCarli酒精液體飼料模型優(yōu)于酒精灌胃模型。

表2 Lierber-DeCarli酒精液體飼料誘導的酒精性肝損傷小鼠模型肝臟指數(shù)、血清ALT、AST、γ-GT和AKP活性，血清和肝臟中甘油三酯和總膽固醇水平的變化（±s）Tab.2 Changes of the liver-to-body weight ratio，serum ALT，AST，γ-GT and AKP activities，serum and hepatic TG and TC contents in the Lierber-DeCarli ethanol liquid diet models

表2 Lierber-DeCarli酒精液體飼料誘導的酒精性肝損傷小鼠模型肝臟指數(shù)、血清ALT、AST、γ-GT和AKP活性，血清和肝臟中甘油三酯和總膽固醇水平的變化（±s）Tab.2 Changes of the liver-to-body weight ratio，serum ALT，AST，γ-GT and AKP activities，serum and hepatic TG and TC contents in the Lierber-DeCarli ethanol liquid diet models

注*表示在0.05水平上差異有顯著性（P＜0.05）。Note.*means a significant difference（P＜0.05）.

變化幅度/% Change/%肝臟指數(shù)Live-to-body weight ratio/%　3.00±0.57　3.82±0.51*　+27.62%谷丙轉氨酶ALT/U/L　23.35±7.40　43.54±14.26*　+86.41%谷草轉氨酶AST/U/L　10.48±1.20　30.16±5.10*　+187.75% γ-谷氨酰轉移酶γ-GT/U/L　3.14±0.68　3.90±0.99堿性磷酸酶AKP/U/L　67.97±12.65　91.61±12.21*　+34.78%血清甘油三酯Serum TG/mmol/L　0.92±0.11　1.22±0.23*　+32.13%血清總膽固醇Serum TC/mmol/L　2.58±0.28　3.14±0.30*　+21.90%肝甘油三酯Hepatic TG/mg/g liver　14.02±1.26　16.05±2.17*　+14.47%肝總膽固醇Hepatic TC/mg/g liver　8.06±1.48　8.46±1.67指標Indexs對照液體飼料組Control liquid diet酒精液體飼料組Ethanol liquid diet

4 結論

Lieber-DeCarli酒精液體飼料誘導的酒精肝損傷小鼠模型精神狀態(tài)良好，肝臟指數(shù)顯著增加，血清TC水平顯著提高，血清ALT、AST活性、血清和肝臟TG含量及肝臟脂質聚集等組織病理學變化幅度大于酒精灌胃誘導的酒精肝損傷小鼠模型。相對酒精灌胃，Lieber-DeCarli酒精液體飼料對動物精神狀態(tài)影響小、易于形成酒精脂肪肝，因此更適合用于酒精性肝病分子機制的研究和防治藥物的篩選。

參考文獻：

［1］ Mann RE，Smart RQ，Govoni R.The epidemiology of alcoholic liver disease［J］.Alcohol Res Health，2003，27（3）：209-219.

［2］ Schwartz JM，Reinus JF.Prevalence and natural history of alcoholic liver disease［J］.Clin Liver Dis，2012，16（4）：659 -666.

［3］ Arteel G，Marsano L，Mendez BF，et al.Advances in alcoholic liver disease［J］.Best Pract Res Cl Ga，2003，17（4）：625-647.

［4］ Beier JI，Arteel GE，McClain CJ.Advances in alcoholic liver disease［J］.Curr Gastroenterol Rep，2011，13（1）：56-64.

［5］ 張彥芬，秘堯，何奇龍，等.FH/Wjd大鼠酒精性肝損傷模型探討［J］.中國實驗動物學報，2014，22（5）：59-62.

［6］ Ding R-B，Tian K，Huang L-L，et al.Herbal medicines for the prevention ofalcoholicliverdisease：Areview［J］.J Ethnopharmacol，2012，144（3）：457-465.

［7］ Brandon-Warner E，Schrum LW，Schmidt CM，et al.Rodent models of alcoholic liver disease：Of mice and men［J］.Alcohol，2012，46（8）：715-725.

［8］ Nanji AA，F(xiàn)rench SW.Animal models of alcoholic liver disease focus on the intragastric feeding model［J］.Alcohol Res Health，2003，27（4）：325-330.

［9］ Park H-Y，Choi H-D，Eom H，et al.Enzymatic modification enhances the protective activity of citrus flavonoids against alcohol-induced liver disease［J］.Food Chem，2013，139（1-4）：231-240.

［10］ Ren Y，Deng F，Zhu H，et al.Effect of epigallocatechin-3-gallate on iron overload in mice with alcoholic liver disease［J］.Mol Biol Rep，2011，38（2）：879-886.

［11］ 曾濤，姜璐璐，張翠麗，等.兩種Lieber-DeCarli液體飼料誘導的小鼠酒精性肝損傷模型的建立［J］.毒理學雜志，2012，26 （4）：258-261.

［12］ Bull-Otterson L，F(xiàn)eng W，Kirpich I，et al.Metagenomic analyses ofalcoholinducedathogenicalterationsintheintestinal microbiome andtheeffectofLactobacillusrhamnosusGG treatment［J］.PLoS One，2013，8（1）：e53028.

［13］ Ge X，Lu Y，Leung T-M，et al.Milk osteopontin，a nutritional approach to prevent alcohol-induced liver Injury［J］.Am J Physiol Gastrointest Liver Physiol，2013，304（10）：G929 -G939.

［14］ Wang Y，Kirpich I，Liu Y，et al.Lactobacillus rhamnosus GG treatment potentiates intestinal hypoxia-inducible factor，promotes intestinal integrity and ameliorates alcohol-induced liver injury ［J］.Am J Pathol，2011，179（6）：2866-2875.

［15］ 曾濤，謝克勤，張翠麗，等.氯仿/甲醇勻漿測定肝臟甘油三酯含量［J］.衛(wèi)生研究，2008，37（5）：550-552.

［16］ 方志紅，崔劍巍，曹健美，等.Lieber-DeCarli酒精性肝損傷模型的復制［J］.中西醫(yī)結合學報，2006，4（6）：596-600.

［17］ You M，F(xiàn)ischer M，Deeg MA，et al.Ethanol induces fatty acid synthesis pathways by activation of sterol regulatory elementbinging protein（SPEBP）［J］.J Biol Chem，2002，277（32）：29342-29347.

［18］ Zeng T，Xie KQ.Ethanol and liver：recent advances in the mechanisms ofethanol-inducedhepatosteatosis［J］.Arch Toxicol，2009，83（12）：1075-1081.

〔修回日期〕2016-03-22

【中圖分類號】R-33

【文獻標識碼】A

【文章編號】1671-7856（2016）06-0011-07

doi：10.3969.j.issn.1671-7856.2016.06.003

［基金項目］國家自然科學基金-青年科學基金項目（NSFC 31501478）；廣東省自然科學基金博士啟動項目（2014A030310328）；深圳市科技計劃基礎研究項目（JCYJ20140901162541286）；廣東省省級科技計劃項目（2016B070701012）。

［作者簡介］肖娟（1985-），女，博士后，研究方向：植物活性物質與功能食品。

［通訊作者］孫遠明（1958-），男，教授，博士生導師，研究方向：食品安全檢測。injury was assessed by the activities of serum ALT，AST，AKP and γ-GT，and serum and hepatic TC and TG.Results After modeling，both models showed significantly increased activities of serum ALT，AST，AKP，and contents of serum and hepatic TG（P＜0.05），indicating the successful development of alcoholic steatohepatitis.However，oral ethanol gavage led to body weight loss and weak mental state.Ethanol liquid diet less affected the body weight and mental state.Ethanol liquid diet enhanced liver to-body weight ratio and serum TC，but oral gavage of ethanol did not.The changes of serum ALT，AST，serum and hepatic TG，and hepatic steatosis in the ethanol liquid diet models were more severe than those in the oral gavage ethanol models，suggesting that Lierber-DeCarli ethanol liquid diet led to more serious liver injury than oral gavage ethanol.Conclusions Lierber-DeCarli ethanol liquid diet model is better than oral gavage ethanol model，and is more suitable for studies on mechanisms and evaluation of hepato-protective drugs for alcoholic liver disease.

Comparison of two mouse models of alcoholic liver disease induced by oral ethanol gavage or Lierber-DeCarli ethanol liquid diet

XIAO Juan1，2，ZHANG Rui-fen2，HUANG Fei2，LIU Lei2，DENG Yuan-yuan2，MA Yong-xuan2，LIU Dong3，ZHANG Ming-wei2，SUN Yuan-ming1
（1.College of Food Science，South China Agricultural University，Guangzhou 510642，China；2.Sericultural& Agri-Food Research Institute，Guangdong Academy of Agricultural Sciences/Key Laboratory of Functional Foods，Ministry of Agriculture/Guangdong Key Laboratory of Agricultural Products Processing，Guangzhou 510610；3.Shenzhen Polytechnic，Shenzhen 518055）

【Abstract】Objective To select a simple，stable and reliable mouse model of alcoholic liver disease.Methods The mouse models of alcoholic liver disease were induced by oral gavage ethanol or Lierber-DeCarli ethanol liquid diet for 8 weeks.The food intake and body weight were recorded.Pathological changes were examined using HE staining.Liver

【Key words】Alcoholic liver disease；Lierber-DeCarli ethanol liquid diet；Alcohol；Oral gavage；Mouse model